肺腺癌中CD44v6和組織蛋白酶D的表達及臨床意義

展翼翼 達春麗 劉春玲

(新疆醫科大學附屬腫瘤醫院肺內科二病區，新疆 烏魯木齊 830001)

肺腺癌中CD44v6和組織蛋白酶D的表達及臨床意義

展翼翼 達春麗1劉春玲

(新疆醫科大學附屬腫瘤醫院肺內科二病區，新疆 烏魯木齊 830001)

目的 應用免疫組化方法檢測肺腺癌中CD44v6和組織蛋白酶(Cath)-D的表達，探討其意義。方法 64例確診為肺腺癌并行根治手術患者的術后標本作為觀察組，未見明顯異常的肺組織23例作為對照組。兩組中CD44v6和Cath-D的檢測應用免疫組化SP法。結果 觀察組中CD44v6和Cath-D表達的陽性率明顯高于對照組，觀察組中CD44v6和Cath-D表達的陽性率與腫瘤的淋巴結轉移、脈管累犯密切相關，Cath-D表達的陽性率與腫瘤的大小密切相關，二者均與性別、年齡、分化程度及胸膜累犯無相關性；二者無明顯相關性。結論 肺腺癌中CD44v6和Cath-D高表達可以促進腫瘤發展；二者高表達提示腫瘤處于進展狀態。

肺腺癌；CD44v6；組織蛋白酶(Cath)-D；免疫組化

肺癌約占所有新發癌癥的12.6%，肺腺癌是肺癌中最常見的類型，常經過非典型腺瘤樣增生發展到原位腺癌，再發展為微小或區域性浸潤性腺癌，最終形成典型的浸潤性腺癌，在此過程中伴隨著多種基因和蛋白調控和表達的異常〔1〕。細胞黏附分子是一類存在于細胞表面、介導細胞與細胞、細胞與基質之間相互黏附的糖蛋白，CD44v6是黏附蛋白中的一種能夠有效促進細胞生長和轉移灶形成的糖蛋白〔2,3〕。組織蛋白酶(Cath)-D是一種蛋白水解酶，能溶解細胞外基質、基底膜和結締組織，對腫瘤擴散有一定作用〔4,5〕。本實驗應用免疫組化方法檢測肺腺癌中CD44v6和Cath-D的表達，觀察其臨床及病理學的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2013年7月至2014年12月我院確診為肺腺癌并行根治手術的患者64例為觀察組，其中男30例，女34例；年齡38～77歲，平均(58.4±9.1)歲。術后均經病理學HE切片和免疫組化染色證實，并符合國際肺癌研究協會(IASLC)/美國胸科學會(ATS)/歐洲呼吸學會(ERS)國際多學科分類中的相關標準。未見明顯異常的肺組織23例作為對照組，其中男12例，女11例；年齡39～70歲，平均(56.5±8.2)歲。兩組性別、年齡均無明顯差異，具有可比性。

1.2 CD44v6和Cath-D的檢測 CD44v6和Cath-D蛋白均為濃縮液，按不同比例進行稀釋后進行預實驗，選擇最佳配比濃度用于正式實驗。CD44v6和Cath-D的檢測均基于術后的石蠟切片，應用免疫組化SP法，行二氨基聯苯胺(DAB)染色，嚴格按說明書進行，做好質量控制工作，努力減少誤差。

1.3 CD44v6和Cath-D結果的判讀 CD44v6的陽性部位為細胞膜，Cath-D的陽性部位為細胞質，以染成棕黃色色為陽性反應細胞，選擇上皮細胞集中的3個400倍視野的區域進行觀察，計算陽性率取平均值，以<5%定為陰性，以≥5%定為陽性。

1.4 統計學方法 采用SAS6.12統計軟件進行χ2檢驗及線性相關分析。

2 結 果

2.1 兩組中CD44v6和Cath-D表達陽性率的比較 兩組CD44v6和Cath-D表達的陽性率差異顯著。見表1。

表1 兩組中CD44v6和Cath-D表達陽性率的比較〔n(%)〕

組別nCD44v6Cath-D觀察組6435(54.69)32(50.00)對照組234(17.39)3(13.04)χ2/P值9.5159/0.002010.3035/0.0013

2.2 觀察組中CD44v6和Cath-D陽性率在不同臨床病理特征中的比較 CD44v6和Cath-D表達的陽性率與腫瘤的淋巴結轉移、脈管累犯密切相關，Cath-D表達的陽性率與腫瘤的大小密切相關，二者均與性別、年齡、分化程度及胸膜累犯無相關性。見表2。

2.3 觀察組中CD44v6和Cath-D表達的相關性 CD44V6和Cath-D無明顯相關性(P>0.05)。

表2 觀察組中CD44v6和Cath-D陽性率在不同臨床病理特征中的比較〔n(%)〕

臨床特征nCD44v6Cath-D淋巴結轉移 無3916(41.03)14(35.90) 有2519(76.00)18(72.00) χ2/P值7.5200/0.00617.9426/0.0048脈管累犯 無4822(45.83)20(41.67) 有1613(81.25)12(75.00) χ2/P值6.0742/0.01375.3333/0.0209腫瘤大小 <3cm2313(56.52)7(30.43) ≥3cm4122(53.66)25(60.98) χ2/P值0.0487/0.82535.4973/0.0190性別 男3014(46.67)16(53.33) 女3421(61.76)16(47.06) χ2/P值1.4661/0.22600.2510/0.6164年齡 <60歲3315(45.45)18(54.55) ≥60歲3120(64.52)14(45.16) χ2/P值2.3437/0.12580.5630/0.4530分化 高-中3923(58.97)22(56.41) 低2512(48.00)10(40.00) χ2/P值0.7404/0.38951.6410/0.2002胸膜累犯 無3419(55.88)20(58.82) 有3016(53.33)12(40.00) χ2/P值0.0418/0.83802.2588/0.1239

3 討 論

肺腺癌具有腺樣分化或黏液產生的特點，表現為腺泡樣、乳頭樣、細支氣管肺泡樣，具有黏液形成的實性巢或以這些形式混合生長的惡性上皮性腫瘤。肺腺癌很少位于中央，表現為肺門周圍的腫塊，很少有空洞，可出現單發或多發，大小不一，可以出現明顯的中央灰白色纖維化伴有胸膜皺褶。腺癌可以擴散，最初是沿淋巴道或血道播散，之后可以出現氣道播散，部分病例尚可出現胸膜表面播散。在這種擴散過程中，轉移相關基因起重要作用〔6〕。CD44v6是含v6變異體的CD44拼接變異體，可以通過與透明質酸進行有效結合，進而影響腫瘤細胞之間及腫瘤細胞與基質的結合能力，使細胞表面黏附分子的構成和功能發生改變，可以提高腫瘤細胞的運動潛能，促進腫瘤細胞的浸潤和轉移〔7,8〕。Cath-D是一種蛋白水解酶，在酸性環境中產生，其功能有：①作為雌激素依賴的腫瘤標志物；②作為增生因子，通過胰島素樣生長因子受體起作用；③降解細胞外基質，也可以促進基質中的生長因子釋放〔9〕；④激活家族中的其他成員，促進級聯反應的形成〔10,11〕。

本實驗結果提示CD44v6和Cath-D在上皮細胞癌變過程中起重要作用。二者參與腫瘤的脈管播散。CD44v6被學者認為是腫瘤轉移促進因子，其作用與上皮型黏附蛋白的作用相反，而與神經型黏附蛋白的作用相類似，因此CD44v6也是黏附相關細胞因子動態平衡中的重要因子。在一些腫瘤細胞中上皮型黏附蛋白的表達降低，使細胞之間的附著減弱，腫瘤細胞從周圍細胞的附著處脫離，出現浸潤或轉移〔12〕。此時與其相對應的腫瘤細胞黏附分子如CD44v6、N-cadherin等高表達，使腫瘤細胞與血管內皮上的纖連蛋白、膠原蛋白等結合，或者使異質性黏附作用增強，形成轉移灶〔13〕。腫瘤形成過程中Cath-D上調對細胞外基質進行降解，使阻礙細胞轉移的屏障受到破壞，進而促進轉移的發生〔14,15〕。組織學的高級別和脈管侵犯是預后不良的重要參數，這兩個指標也被用于臨床分期，因此二者的表達可能在一定程度上提示預后，即二者高表達可能在一定程度上提示預后不良。本文結果提示Cath-D高表達可以促進腫瘤的生長，此時腫瘤繁殖加快，細胞增生活躍，細胞的異型性增加，腫瘤體積增大，浸潤能力增強。本實驗未發現CD44v6和Cath-D的表達與腫瘤分化程度及胸膜累犯的關系，因此CD44v6和Cath-D在腫瘤細胞分化過程中的調節作用不強。二者發揮作用的通路和方式可能有自身的特異性〔16,17〕，其具體機制有待深入研究。

1 張 杰.肺腺癌IASLC/ATS/ERS國際多學科分類臨床應用中的若干問題與思考〔J〕.診斷病理學雜志,2012;19(6):401-3.

2 Fu Y,Geng Y,Yang N,etal.CD44v6 expression is associated with a poor prognosis in Chinese hepatocellular carcinoma patients:a meta-analysis〔J〕.Clin Res Hepatol Gastroenterol,2015;39(6):736-9.

3 Zhao LH,Lin QL,Wei J,etal.CD44v6 expression in patients with stage Ⅱ or stage Ⅲ sporadic colorectal cancer is superior to CD44 expression for predicting progression〔J〕.Int J Clin Exp Pathol,2015;8(1):692-701.

4 王忠民,唐懷好,楊紅偉,等.非小細胞肺癌組織蛋白酶D和P選擇素表達的臨床研究〔J〕.中國醫師雜志,2004;6(3):324-6.

5 魏 博,徐倉寶.組織蛋白酶D在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義〔J〕.西安醫科大學學報(中文版)，2000;21(3):226-8.

6 孟宇中,張建中.肺、胸膜、胸腺及心臟腫瘤病理學和遺傳學〔M〕.北京:人民衛生出版社,2006:32-5.

7 Haylock AK,Spiegelberg D,Mortensen AC,etal.Evaluation of a novel type of imaging probe based on a recombinant bivalent mini-antibody construct for detection of CD44v6-expressing squamous cell carcinoma〔J〕.Int J Oncol,2016;48(2):461-70.

8 Spiegelberg D,Mortensen AC,Selvaraju RK,etal.Molecular imaging of EGFR and CD44v6 for prediction and response monitoring of HSP90 inhibition in an in vivo squamous cell carcinoma model〔J〕.Eur J Nucl Med Mol Imaging,2016;43(5):974-82.

9 陳曉藝,張白凌,陳少杰.組織蛋白酶D與基質金屬蛋白酶-9在口腔鱗癌的表達〔J〕.福建醫科大學學報,2006;40(6):560-2.

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11 葛鳳霞,張 晶,靳慧敏,等.乳腺癌中CD44 、Cath-D的表達及其與淋巴結轉移的關系〔J〕.診斷病理學雜志,2001;8(3):170-1.

12 谷化平,尚培中,周翠玲.CD44v6和組織蛋白酶D表達與食管癌預后的關系〔J〕.中華消化外科雜志,2003;2(1):34-6.

13 陳 俊,蔡 軍.CD44v6與腫瘤關系的研究進展〔J〕.實用臨床醫學,2014;15(1):129-31.

14 Paksoy M,Hardal U,Caglar C.etal.Expression of cathepsin D and E-cadherin in primary laryngeal cancers correlation with neck lymph node involvement〔J〕.J Cancer Res Clin Oncol 2011;137(9):1371-7.

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16 Strojan P,Budihna M,Smid L,etal.Urokinase-type plasminogen activator,plasminogen activator inhibitor type 1 and cathepsin D:analysis of their prognostic significance in squamous cell carcinoma of the head and neck〔J〕.Anticancer Res,2000;20(5C):3975-81.

17 谷化平,尚培中,周翠玲.子宮內膜腺癌中CD44v6和組織蛋白酶D的表達及臨床意義〔J〕.山西醫科大學學報,2002;33(6):509-11.

〔2015-04-11修回〕

(編輯 苑云杰)

劉春玲(1967-)，女，碩士，主任醫師，主要從事肺癌生物免疫治療研究。

展翼翼(1982-)，男，碩士，主治醫師，主要從事肺癌研究。

R734

A

1005-9202(2017)01-0119-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.01.052

1 新疆醫科大學附屬腫瘤醫院重癥醫學科