CD36基因多態性與動脈硬化心臟病的相關性

丁法明 李 娜 宓寶斌 畢麗麗

(濱州醫學院附屬醫院，山東 濱州 256600)

CD36基因多態性與動脈硬化心臟病的相關性

丁法明 李 娜 宓寶斌 畢麗麗

(濱州醫學院附屬醫院，山東 濱州 256600)

目的 探討動脈硬化心臟病與CD36單核苷酸多態性的關系。方法 121例動脈硬化心臟病患者及體檢的健康者217例進行研究；空腹12 h后采集靜脈血5 ml，檢查甘油三酯、空腹血糖、血細胞、低密度脂蛋白、總膽固醇、高密度脂蛋白、血栓素B2等主要生化指標，記錄其體質量、升高、體質量指數、血壓等一般指標，并詳細問詢其疾病史；采用聚合酶鏈反應-連接酶檢測反應法(PCR-LDR法)檢測CD36的 SNPs基因型。結果 對照組冠心病、高血壓、糖尿病患者比例及血壓、體質量指數、甘油三酯、血糖、總膽固醇、血栓素、低密度脂蛋白顯著低于病例組(P<0.05)，病例組患者血高密度脂蛋白水平顯著低于對照組(P<0.05)；rs1761667位點存GG、AG、AA 3種基因型，兩組基因頻率差異具統計學意義(P<0.05)；分析分布頻率發現，病例組AG基因型顯著高于對照組(P<0.05)；AG基因型人群中病例組患者收縮壓、舒張壓、體質量指數、總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白顯著高于對照組(P<0.05)，高密度脂蛋白水平顯著低于對照組(P<0.05)；AG基因型均可明顯增加動脈硬化心臟病的患病風險(P<0.05)；甘油三酯、收縮壓、糖尿病史、冠心病史、低密度脂蛋白與rs1761667AG基因型為影響動脈硬化心臟病的獨立性危險因素(P<0.05)；CD36 SNPs具有群體代表性，符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)。結論 動脈硬化心臟病與CD36 rs1761667的AG型存相關關系，是導致動脈硬化心臟病的遺傳因素。

CD36；基因多態性；動脈硬化心臟病

動脈硬化心臟病是臨床中常見的嚴重威脅老年人生命健康及生活質量的臨床多發性疾病，血栓及動脈硬化斑塊的形成在動脈硬化心臟病的發生及發展過程中扮演著重要角色，此外，血脂異常及血小板活化異常又是導致該病發生的危險性因素〔1,2〕。雖有學者指出動脈硬化可能與遺傳因素有關，但現階段尚未表明遺傳因素與動脈硬化心臟病存在直接關系〔3〕。CD36是最早發現于血小板的糖蛋白屬B族清道夫受體，后由大量實驗證實其也存在于微血管內皮細胞、肝細胞、巨噬細胞等〔4〕。研究發現，高血脂患者體內氧化低密度脂蛋白與CD36特異性結合，促進血小板活化，提高凝血狀態，加速內血栓形成〔5〕。有研究指出，通過CD36巨噬細胞可攝取大量氧化低密度脂蛋白并形成泡沫細胞〔6〕。因而推斷CD36表達水平與CD36基因多態性關系密切，其可能與動脈硬化心臟病緊密相關。本研究分析探討動脈硬化心臟病與CD36單核苷酸多態性的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 經我院倫理委員會批準，選取2014年1月至2015年5月我院收治的121例動脈硬化心臟病患者作為受試者，女31例，男90例，平均年齡(80.83±3.74)歲。所有患者均經彩超、MRI或CT診斷后確診為動脈硬化心臟病。同期選取于我院體檢的健康者217例作為對照組，女42例，男175例，平均年齡(80.29±3.72)歲。兩組一般臨床資料無統計學差異(P>0.05)，分組合理，具有可比性。入組患者及家屬均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 入選標準 (1)患者均未并發動脈炎、血液病、外傷、腫瘤、血管畸形、動脈瘤；(2)患者肝腎功能正常，無發熱、感染；(3)患者均排除自身免疫性疾病、惡性腫瘤、血液病；(4)未使用過免疫抑制劑；(5)參與本研究前30 d內未服用他汀類、氯吡格雷、華法林及阿司匹林類藥物。

1.3 方法

1.3.1 生化指標及一般資料 空腹12 h后采集靜脈血5 ml，使用日立全自動生化分析儀檢查患者體內甘油三酯、空腹血糖、血細胞、低密度脂蛋白、總膽固醇、高密度脂蛋白等主要生化指標。此外對有所有入組人員的體質量、身高、體質量指數、血壓等一般指標進行測量記錄，詳細問詢病史，如高血壓史、糖尿病史、冠心病史等。

1.3.2 測定血漿血栓素B2 使用ELISA法檢測患者血漿中血栓素B2水平，采集血樣品后離心15 min(1 000 r/min)收集血漿，使用酶聯免疫試劑盒(Cayman公司，美國)檢測血栓素B2水平，嚴格依照說明書進行操作。

1.3.3 CD36 SNPs檢測 使用Haploview分析中國漢族人群CD36的SNPs位點即rs9784998及rs1761667，后采用聚合酶鏈反應-連接酶檢測反應法(PCR-LDR法)檢測CD36的 SNPs基因型。PCR擴增：使用Pubmed查詢rs9784998及rs1761667的PCR引物序列，并委托上海翼和應用生物技術有限公司合成，以20 μl作為PCR反應體系，PCR擴增完成后使用瓊脂糖凝膠電泳(3%)檢測產物。連接酶檢測：委托上海翼和應用生物技術有限公司合成LDR探針，以10 μl作為LDR反應體系，反應完成后取LDR產物進行測序，并使用Genemapper軟件分析處理數據。

1.4 統計學分析 使用SPSS17.0軟件計量資料使用t檢驗率的比較采用χ2檢驗分析Logistic回歸分析相關性，使用擬合優度法檢驗基因型是否符合Hardy-Weinberg平衡定律。

2 結 果

2.1 一般資料及血栓素B2檢測結果 對照組冠心病、高血壓、糖尿病患者比例顯著低于病例組(P<0.05)，且該組血壓、體質量指數、甘油三酯、血糖、總膽固醇、血栓素、低密度脂蛋白均顯著低于病例組(P<0.05)。病例組患者高密度脂蛋白水平顯著低于對照組(P<0.05)。見表1。

指標對照組(n=217)病例組(n=121)P值男性(n)175900.18年齡(歲)80.29±3.7280.83±3.740.21體質量指數(kg/m2)24.07±3.0425.29±3.700.00冠心病史(n)116920.00高血壓史(n)1301010.00糖尿病史(n)36380.00舒張壓(mmHg)76.20±10.9779.46±11.630.01收縮壓(mmHg)144.04±14.93152.10±19.980.00甘油三酯(mmol/L)1.00±0.421.27±0.690.00空腹血糖(mmol/L)5.67±0.976.04±1.510.02低密度脂蛋白(mmol/L)2.82±0.703.10±0.830.00總膽固醇(mmol/L)4.80±0.825.10±1.000.01高密度脂蛋白(mmol/L)1.49±0.371.39±0.380.02血栓素B2(pg/ml)340.36±4.22550.04±4.570.01血小板計數(×108/L)184.60±58.76187.60±46.260.64

2.2 CD36基因多態性結果 應用Genemapper對兩位點基因分型進行分析，見圖1、圖2。

圖1 rs9784998位點分析圖

圖2 rs1761667位點分析圖

2.3 CD36多態性分布頻率 rs1761667位點存在GG、AG、AA 3種基因型，兩組基因頻率差異顯著(P<0.05)；深入分析分布頻率發現，病例組AG基因型顯著高于對照組(P<0.05)。rs9784998存在TT、CT、CC 3種基因型，但兩組間3種基因型的分布頻率無統計學差異(P>0.05)，見表2。病例組患者收縮壓、舒張壓、體質量指數、總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白顯著高于對照組(P<0.05)，高密度脂蛋白水平顯著低于對照組(P<0.05)，見表3。

表2 CD36 SNPs基因型及分布頻率比較〔n(%)〕

SNPs病例組(n=121)對照組(n=217)χ2值P值Rs9786998C180(75.63)310(71.43)1.370.24T58(24.37)124(28.57)TT5(4.20)22(10.14)3.700.16CC66(55.46)115(53.00)CT48(40.34)80(36.86)Rs1761667A93(39.08)159(36.81)0.030.86G145(60.92)273(63.19)GG39(32.77)92(42.60)AA13(10.93)35(16.20)7.140.03AG67(56.30)89(41.02)

指標對照組(n=89)病例組(n=67)P值體質量指數(kg/m2)23.40±2.8425.56±3.560.00甘油三酯(mmol/L)0.97±0.411.29±0.670.00收縮壓(mmHg)143.15±13.97151.83±20.450.01舒張壓(mmHg)75.67±1.1879.75±11.750.03低密度脂蛋白(mmol/L)2.80±0.723.09±0.900.03高密度脂蛋白(mmol/L)1.49±0.341.37±0.370.04總膽固醇(mmol/L)4.76±0.825.05±1.030.05血栓素B2(pg/ml)336.97±4.26473.43±4.570.17血小板計數(×108/L)182.45±44.85180.06±42.200.74

2.4 rs1761667 SNPs對動脈硬化心臟病影響 調整性別、冠心病、年齡、體質量指數、糖尿病、甘油三酯、收縮壓、低密度脂蛋白前后rs1761667，AG基因型可明顯增加動脈硬化心臟病的患病風險(P<0.05)，見表4。

表4 rs1761667 SNPs對動脈硬化心臟病的影響

基因型對照組(n=89)病例組(n=67)調整前OR(95%CI)P值調整后OR(95%CI)P值AA35130.88(0.42～1.83)0.730.67(0.27～1.62)0.37AG89671.77(1.09～2.90)0.021.93(1.08～3.45)0.03GG92391.00-1.00-

2.5 動脈硬化心臟病危險因素篩選 使用Logistic回歸分析發現，甘油三酯、收縮壓、糖尿病史、冠心病史、低密度脂蛋白與rs1761667AG基因型進入回歸方程，為影響動脈硬化心臟病的獨立性危險因素(P<0.05)，見表5。

表5 多元Logistic回歸分析結果(rs1761667 AG型VS GG型)

危險因素Wsdfr值OR(95%CI)P值冠心病9.520.3010.932.53(1.40～4.55)0.00收縮壓10.220.0110.031.03(1.01～1.04)0.00低密度脂蛋白6.150.1910.461.58(1.10～2.27)0.01甘油三酯4.930.2610.581.78(1.07～2.95)0.03AG4.710.2910.631.88(1.06～3.34)0.03糖尿病4.930.3110.681.97(1.08～3.59)0.03

2.6 Handy-Weinberg平衡定律檢測結果 CD36 SNPs(rs9784998和rs1761667)具有群體代表性符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)。

3 討 論

人源CD36基因外顯子數不低于15個，位于7號染色體q11.2區。CD36 cDNA序列結果顯示，其由471個氨基酸組成，分子量為88 kD〔7〕。研究發現，CD36共存2 900個以上基因多肽位點，且其大部分為SNPs；全基因組研究發現，CD36 存15個SNPs，可能增加動脈硬化心臟病的患病風險〔8〕。有學者指出， CD36為巨噬細胞及血小板上受體，可特異性結合氧化低密度脂蛋白，而SNPs可改變CD36在靶細胞上的表達，提示氧化低密度脂蛋白可能在動脈硬化性心臟病的發病及發展過程中扮演重要角色〔9〕。此外，諸多動脈硬化疾病可能與CD36 SNPs密切相關。

本組研究結果顯示，CD36 rs1761667的AG型可顯著增加動脈硬化心臟病的發病風險，分析認為與其可影響靶細胞表面CD36表達水平有關。有研究發現，CD36在不同人種中表達水平存一定差異，且其可能與rs1761667基因型密切相關，如AA型人體內CD36表達量最低，而GG與AG型表達量明顯高于AA型〔10〕。AG型基因頻率在病例組中明顯高于對照組。分析認為其可能導致CD36表達量增高，導致單核細胞大量吞噬氧化低密度脂蛋白，最終導致單核細胞形成泡沫細胞，進一步導致動脈硬化病灶區的形成。有學者指出，受rs1761667影響，CD36在血小板表面表達水平可明顯增加，增強血小板活化及聚集水平，加速血栓形成〔11〕。本次研究中在評價學習血小板活化水平時使用血漿血栓素B2作為評價指標，結果顯示病例組患者血栓素B2水平明顯偏高。病例組AG型個體內血栓素B2水平雖有升高趨勢，但與對照組相比并無顯著性差異，分析認為其可能與臨床樣本數較少或與CD36以外影響血小板活化水平因素有關。此外，有學者指出，rs1761667可通過調節體內代謝增高動脈硬化心臟病患病風險〔12〕。作為一類典型的長鏈脂肪酸受體，CD36參與游離脂肪酸向胞內轉移。有學者研究證實，rs1761667可使清中游離脂肪酸水平明顯增高，而在動脈硬化的發生及發展過程中游離脂肪酸又起著極其重要作用〔13〕。有研究發現，人體血清中高密度脂蛋白與CD36表達負性相關，低密度脂蛋白與CD36表達正性相關〔14〕。本研究結果顯示，AG型組中病例組低密度脂蛋白水平明顯偏高，低密度脂蛋白水平顯著偏低，與其研究結果相似。此外，近年來有研究指出代謝綜合征、2型糖尿病與rs1761667水平密切相關，可增加患者動脈硬化心臟病患病率〔15〕。

綜上所述，動脈硬化心臟病與CD36 rs1761667的AG型存相關關系，是導致動脈硬化心臟病發病的遺傳因素。但本次研究臨床樣本數較少，其是否具有廣泛臨床意義還有待進一步研究。

1 趙偉偉,車京津,張彥彥,等.CD36 rs3211956和rs7755單核苷酸多態性與早發冠心病的相關性〔J〕.天津醫藥,2014;24(12):1197-201,1202.

2 Jaganathan A,Murugan K,Panneerselvam C,etal.Earthworm-mediated synthesis of silver nanoparticles:a potent tool against hepatocellular carcinoma,plasmodium falciparum parasites and malaria mosquitoes〔J〕.Parasitol Int,2016;65(3):276-84.

3 陳 馨,崔天盆,姚群峰,等.冠心病患者 Gas 6、CD36檢測的臨床意義〔J〕.湖北中醫藥大學學報,2015;14(2):116-8.

4 Liu M,Zhang W,Li X,etal.Impact of age and sex on the development of atherosclerosis and expression of the related genes in apoE deficient mice〔J〕.Biochem Biophys Res Commun,2016;469(3):456-62.

5 張 悅.重慶漢族人群CD36基因rs1761667和rs3173798位點多態性與冠心病的易感性研究〔D〕.重慶：重慶醫科大學,2014.

6 Sorci-Thomas MG,Thomas MJ.Microdomains,inflammation,and atherosclerosis〔J〕.Circ Res,2016;118(4):679-91.

7 馬玉蘭.冠心病患者microRNA-155調節免疫細胞分化的機制研究〔D〕.武漢：華中科技大學,2014.

8 Boghdady A,Arafa UA,Sabet EA,etal.Association between rs1761667 polymorphism of CD36 gene and risk of coronary atherosclerosis in Egyptian population〔J〕.Cardiovasc Diag Ther,2016;6(2):120-30.

9 陳 馨,陳 俊,章 爽,等.CD36與動脈硬化的相關性研究〔J〕.標記免疫分析與臨床,2015;22(10):972-5.

10 Chang H,Wang Q,Shi T,etal.Effect of DanQi Pill on PPARα,lipid disorders and arachidonic acid pathway in rat model of coronary heart disease〔J〕.BMC Comp Alt Med,2016;16(1):1.

11 Chan JW,Lewis DR,Petersen LK,etal.Amphiphilic macromolecule nanoassemblies suppress smooth muscle cell proliferation and platelet adhesion〔J〕.Biomaterials,2016；84(1)：219-29.

12 魯艷軍.富含甘油三酯脂蛋白致泡沫細胞的蛋白組學研究〔D〕.武漢：華中科技大學,2010.

13 Li R,Chen L,Zhao S,etal.Inflammation activation contributes to adipokine imbalance in patients with acute coronary syndrome〔J〕.PLoS One,2016;11(3):e0151916.

14 Vadekeetil A,Saini H,Chhibber S,etal.Exploiting the antivirulence efficacy of an ajoene-ciprofloxacin combination against pseudomonas aeruginosa biofilm associated murine acute pyelonephritis〔J〕.Biofouling,2016;32(4):371-82.

15 張彥彥.CD36rs7755和rs3211956單核苷酸多態性與早發冠心病的相關性研究〔D〕.天津：天津醫科大學,2013.

〔2016-08-09修回〕

(編輯 曲 莉)

山東省自然科學基金(ZR2014HP024)

宓寶斌(1979-)，男，主治醫師，主要從事老年常見病的診療工作。

丁法明(1984-)，男，碩士，主要從事冠心病及心律失常的介入治療研究。

R541.4

A

1005-9202(2017)01-0079-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.01.034