柚皮苷對胃潰瘍大鼠血清及胃黏膜組織中SOD和NO水平的影響*

賀 敏，秦建設，呂武賓,姜興鵬△

(1.重慶三峽醫藥高等專科學校中醫系 404120;2.重慶三峽醫藥高等專科學校附屬醫院針灸科，重慶 404100)

柚皮苷對胃潰瘍大鼠血清及胃黏膜組織中SOD和NO水平的影響*

賀 敏1，秦建設1，呂武賓2,姜興鵬2△

(1.重慶三峽醫藥高等專科學校中醫系 404120;2.重慶三峽醫藥高等專科學校附屬醫院針灸科，重慶 404100)

目的 觀察柚皮苷對乙酸型胃潰瘍大鼠血清及胃黏膜組織中超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮(NO)水平的影響，探討柚皮苷對胃潰瘍的治療作用。方法 60只SPF級SD大鼠分成6組，即正常組，模型組，柚皮苷低(50mg/kg)、中(100mg/kg)、高(200mg/kg)劑量組和蘭索拉唑組(3mg/kg)。采用改良Okabe法制作乙酸型胃潰瘍模型。造模后次日開始給藥，每天1次，連續給藥1周后處死大鼠，采集標本，檢測血清與胃黏膜組織液中SOD和NO水平。結果 柚皮苷具有明顯的抗潰瘍作用。與模型組相比，柚皮苷中、高劑量組大鼠血清及胃黏膜組織液中SOD和NO水平明顯升高(P<0.05)，相比柚皮苷低劑量組與蘭索拉唑組，柚皮苷高劑量組效果更明顯(P<0.05)。結論 柚皮苷具有顯著的抗胃潰瘍作用，其作用機制可能與提高血清及胃黏膜組織中SOD和NO的水平有關。

橙皮苷；胃潰瘍；超氧化物歧化酶;一氧化氮

柚皮苷(naringin)即柚皮素-7-O-新橙皮糖苷，又稱柚苷、柚皮素，是一種雙氫黃酮類化合物，是骨碎補、陳皮、枳實、青皮等中藥的主要有效成分之一。現有研究發現其具有抗病毒、鎮痛、抗過敏及改善局部微循環和營養供給的性能，其較強的抗炎、抗氧化能力已被證實[1]。2013年，柚皮苷被國家批準作為一類新藥進入臨床試驗。大量藥物成分分析研究顯示，對胃潰瘍有治療作用的很多中成藥，如健脾舒胃凝膠、胃蘇顆粒、胃炎靈顆粒等中均檢測出含有大量的柚皮苷成分[2-4]。但是，有關柚皮苷對胃潰瘍的治療作用研究文獻比較少見。本文旨在研究柚皮苷對胃潰瘍大鼠胃黏膜損傷的保護作用，特別是對超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮(NO)水平的影響，進一步闡明柚皮苷的藥理作用，為治療胃潰瘍提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料 柚皮苷(編號：101291319，Sigma公司)，蘭索拉唑片(規格：15mg，批號：120623，重慶科瑞制藥有限公司)，柚皮苷用羚甲基纖維素納(CMC)制成100%柚皮苷懸濁液。Bio-TekELX800多功能酶標儀(美國)，H-1850R湘儀高速離心機。

1.2 方法

1.2.1 分組 清潔級4月齡SD大鼠60只，雌雄各半，體質量180～200g，由第三軍醫大學大坪醫院野戰外科研究所醫學實驗動物中心提供，許可證號：SCXK(渝)2012-0005。將大鼠分為正常組，模型組，柚皮苷低劑量、中劑量、高劑量組，蘭索拉唑組，每組10只。

1.2.2 模型制備 用改良Okabe法制作乙酸型胃潰瘍模型[5-6]。大鼠適應性飼養1周后禁食不禁水24h。以10%的水合氯醛腹腔注射進行麻醉，在劍突下沿正中線作2～3cm的正中切口，打開腹腔，將胃輕輕拉出，用1.0mL注射器在胃前壁胃小彎角切跡下方刺入漿膜下注入0.1mL100%的乙酸，以出現白點為度，然后用細棉簽將溢出乙酸吸凈，用含生理鹽水清洗，將胃小心地納入腹腔，逐層縫合創口。術后當日給大鼠自由飲水，次日開始自由飲食。

1.2.3 給藥方法 造模次日開始給藥：模型組給予生理鹽水1mL/100g灌胃；柚皮苷低劑量組給予50mg/kg灌胃；柚皮苷中劑量組給予100mg/kg灌胃；柚皮苷高劑量組給予200mg/kg灌胃；蘭索拉唑組給予3mg/kg蘭索拉唑。每天 1 次，連續給藥 1 周。正常組正常飲食。

1.2.4 標本采集與處理 給藥1周后，所有組別大鼠禁食24h后，進行腹腔麻醉，開腹采用腹主動脈取血方法收集血液標本，取血后室溫靜置1h后3 500r/min離心10min，吸出上層血清存放在-85 ℃冰箱保存。胃黏膜用組織勻漿器勻漿后離心，吸出上層澄清液存放在-85 ℃冰箱保存。

1.2.5 觀測指標與方法

1.2.5.1 血清SOD水平檢測 采用WST-1法檢測血清SOD水平。按試劑盒要求設定對照孔、對照空白孔、測定孔和測定空白孔，分別加樣品、雙蒸水、酶工作液、酶稀釋液、底物應用液后，37 ℃孵育反應20min。用多功能酶標儀(Bio-TekELX800，美國)在450nm波長測定光密度值(OD值)。依據公式計算樣品中SOD水平。

1.2.5.2 血清NO水平檢測 采用一步法，按試劑盒要求設定空白孔、標準孔和測定孔，分別加雙蒸水，20mol/L亞硝酸鈉標準液，樣品，顯色劑后，靜置15min。用多功能酶標儀(Bio-TekELX800，美國)在550nm波長測定各孔吸光度值(A值)，依據計算公式得出各樣本NO水平。

2 結 果

2.1 胃潰瘍大鼠血清及胃黏膜組織SOD的變化 與模型組相比，柚皮苷低、中、高劑量給藥組與蘭索拉唑組大鼠血清及胃黏膜組織中SOD水平均升高，但柚皮苷中劑量、高劑量組效果明顯(P<0.05)。相比柚皮苷低劑量組與蘭索拉唑組，柚皮苷高劑量組效果更明顯(P<0.05)，見表1。

表1 各組大鼠血清及胃黏膜組織液中SOD水平的變化

a：P<0.01，與正常組比較；b：P<0.05，與模型組比較；c：P<0.05，與蘭索拉唑組比較；d：P<0.05，與柚皮苷低劑量組比較。

2.2 胃潰瘍大鼠血清及胃黏膜組織NO的變化 與模型組相比，柚皮苷中、高劑量組與蘭索拉唑組大鼠血清及胃黏膜組織中NO水平均升高，但柚皮苷中、高劑量組效果明顯(P<0.05)。相比柚皮苷低劑量組與蘭索拉唑組，柚皮苷高劑量組效果更明顯(P<0.05)，見表2。

表2 各組大鼠血清及胃黏膜組織液中NO水平

a：P<0.01，與正常組比較；b：P<0.05，與模型組比較；c：P<0.05，與蘭索拉唑組比較；d：P<0.05，與低劑量組比較。

3 討 論

胃潰瘍是臨床常見的消化道疾病，各種物理和化學因素刺激、機體應激狀態及病原菌的感染導致胃黏膜損傷，誘發或加劇潰瘍病的發生[7-8]。大量研究表明，胃潰瘍產生與修復是一個非常復雜的過程，是多種細胞、生長因子及細胞外基質相互作用的結果，而胃黏膜防御屏障功能下降，防御保護因子減少是形成胃潰瘍的重要病理基礎之一。SOD是存在于體內抑制和防御自由基損傷的重要抗氧化酶之一，胃潰瘍發生過程中氧自由基損傷是重要因素之一，大量試驗研究表明，SOD活性下降、抗氧化能力降低，導致機體出現氧化應激反應，是胃潰瘍產生的重要機制[9]。本實驗研究結果表明，柚皮苷能明顯提升胃潰瘍大鼠血清及胃黏膜中SOD水平，隨著用藥劑量的增加，其作用效果愈明顯，相比柚皮苷低劑量組與蘭索拉唑組，柚皮苷高劑量組效果更明顯。

NO不僅具有抗氧化作用，還是重要的胃黏膜保護因子，其主要通過以下機制發揮作用：(1)舒張血管平滑肌直接擴張血管，增加胃黏膜血流，從而改善胃黏膜微循環；(2)改善受損胃黏膜的血管通透性，維持血管壁的完整性[10]；(3)拮抗內皮素-1(ET-1)的縮血管作用[11]。本實驗結果表明，柚皮苷能明顯提升胃潰瘍大鼠血清及胃黏膜中NO的水平，隨著用藥劑量的增加，其作用效果愈明顯，相比柚皮苷低劑量組與蘭索拉唑組，柚皮苷高劑量組效果更明顯。

柚皮苷是一種在植物界廣泛存在的天然單體化合物，現有研究發現其具有抗病毒、鎮痛、抗過敏、改善局部微循環和營養供給的性能。其較強的抗炎、抗氧化能力已被證實[1]。本實驗結果顯示，柚皮苷具有明顯的促進胃潰瘍愈合作用，且治療效果與蘭索拉唑無明顯差異。柚皮苷的作用機制可能是通過刺激胃黏膜細胞，促進黏膜保護因子SOD及NO分泌，提高SOD及NO水平，加快胃黏膜的增殖與修復，從而達到保護胃黏膜，預防和治療胃潰瘍的作用。

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10.3969/j.issn.1671-8348.2017.02.026

重慶市教育委員會科學技術研究資助項目(KJ131805)。

賀敏(1980-)，講師，碩士，主要從事中醫藥治療脾胃疾病方面研究。△

E-mail：657537946@qq.com。

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1671-8348(2017)02-0230-03

2016-07-10

2016-10-11)