青稞酒中糖精鈉含量的測定方法研究

蔡林森

(青海省產品質量監督檢驗所，青海西寧810001)

青稞酒中糖精鈉含量的測定方法研究

蔡林森

(青海省產品質量監督檢驗所，青海西寧810001)

建立了高效液相色譜法測定青稞酒中糖精鈉的檢測方法。將青稞酒樣品10.0 g在平行蒸發儀上減壓蒸發至近干再用超純水定容至10 mL，待分析。采用Inertsustain C18（4.6×250 mm×5 μm）柱分離。以0.02 mol/L的乙酸銨緩沖液和甲醇（V∶V=85∶15）為流動相，流速0.8 mL/min，柱溫40℃，進樣量為10 μL，紫外檢測器的波長為220 nm。實驗結果表明，糖精鈉在5～150 μg/mL范圍內線性良好，線性方程為：y=24893.5x，相關系數R2=0.9999。加標回收率為97.74%～106.9%，檢出限為0.023 μg/mL。本方法簡便、快速、精密、準確，可用于青稞酒中糖精鈉的檢測。

糖精鈉；青稞酒；高效液相色譜

青稞酒是青藏高原特有的民族傳統產品，是以青稞和豌豆為主要原料，用大曲、小曲及酒母等作為糖化發酵劑，經過一系列的化學反應而制成的。由于在釀制過程中可能會產生苦澀的味道，為了改善其口感，生產企業通常會非法添加一些甜味劑，如甜蜜素、安賽蜜、糖精鈉等。我國《食品安全國家標準食品添加劑使用標準》中明確規定，蒸餾酒中不得添加人工合成甜味劑，在配制酒中可以添加少量，對添加量也作出了嚴格的規定[1-2]。因此，建立一種簡單、快速、準確的方法來測定青稞酒中糖精鈉的含量是非常必要的。常用糖精鈉的檢測方法為液相色譜法[3-4]，超高效液相色譜-質譜法[5-7]。但由于青稞酒中的基質復雜，而且只需加入少量的甜味劑就能改變其口味，同時儀器檢出限等方面存在的問題，給青稞酒中糖精鈉的檢測工作帶來了較大的困難。本實驗采用高效液相色譜對青稞酒中糖精鈉進行檢測，該方法不需對樣品進行復雜的前處理，而且定量準確，穩定性好，靈敏度高，檢測成本低，為青稞酒中甜味劑的檢測提供了依據。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

樣品：青稞酒（購于青海青稞酒生產企業）。

試劑及耗材：糖精鈉（LA16901010，純度99.9%，Dr Ehrenstorfer GmbH），甲醇（色譜純，Fisher scientific），乙酸銨（分析純，煙臺市雙雙化工有限公司），0.22 μm濾膜（上海密柱膜分離技術有限公司）。

儀器設備：高效液相色譜儀（島津LC-20A，島津企業管理中國有限公司），超純水機（GWA-UN4-20，普析通用）；平行蒸發儀（BUCHI Synlore）。

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：Inertsustain C18（4.6×250 mm×5 μm）；流動相：0.02 mol/L乙酸銨∶甲醇（V∶V=85∶15）；流速0.8 mL/min；柱溫40℃；進樣量為10 μL；紫外檢測器的波長為220 nm。

1.2.2 標準工作曲線的配制

準確稱取糖精鈉固體標準品0.0500 g，用純水溶解后定容至50 mL的容量瓶中，即配得1000 μg/mL的標準儲備液，待用。

分別吸取50 μL、100 μL、200 μL、500 μL、800 μL、1000 μL、1500 μL用純水定容至10 mL容量瓶中，即配得5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL、50 μg/mL、80 μg/mL、100 μg/mL、150 μg/mL的標準工作曲線。

1.2.3 樣品前處理

稱取青稞酒樣品10.0 g于平行蒸發管中，在減壓的條件下蒸發至近干以除去乙醇，再用超純水定容至10 mL混合均勻，過0.22 μm微孔濾膜，待上機測試。

2 結果與討論

2.1 標準曲線范圍的選擇

根據《食品安全國家標準食品添加劑使用標準》中規定的最大使用限量150 mg/kg和樣品前處理的方法，本實驗選擇了5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL、50 μg/mL、80 μg/mL、100 μg/mL、150 μg/mL為線性范圍，每個標準濃度點重復進樣3次，取其平均值。同時考察了標準濃度點與標準偏差的關系，其比值為一常數，選取了直線回歸方程。得到的線性方程為：y=24893.5x，相關系數R2= 0.9999。

2.2 標準曲線的校準驗證

根據實驗室質量控制的要求，需要對標準曲線的準確性進行驗證。本實驗通過另取不同批次的糖精鈉標準品，分別配制成濃度為10 μg/mL、80 μg/mL、150 μg/mL的標準溶液，在相同的實驗條件下重復測定3次，取其平均值。偏差分別為2.0%、0.4%、0.3%。符合實驗室質量控制的要求。測定結果見表1。

2.3 流動相的選擇

通過比較水-甲醇、水-乙腈、乙酸銨-甲醇和乙酸銨-乙腈對峰形和靈敏度的影響，其中乙酸銨-甲醇明顯優于其他3種體系的流動相，通過多次實驗優化，本實驗最終選取了0.02 mol/L的乙酸銨∶甲醇（V∶V=85∶15）作為流動相。

2.4 樣品前處理

青稞酒中含有大量的乙醇，對糖精鈉的檢測有嚴重的干擾。由于糖精鈉屬于鹽類化合物，其熔點高且難揮發，通過蒸發除去乙醇。本實驗通過比較了水浴加熱蒸發、旋轉蒸發和平行蒸發的效率，平行蒸發能同時處理12個樣品，且蒸干的時間短，因此選取了平行蒸發。本實驗采用平行蒸發儀將10.0 g的青稞酒蒸至近干，然后用純水定容至10 mL，上機測試。該方法既能避免青稞酒中其他成分對檢測的干擾，又能保證較高的回收率。

2.5 方法的準確度及精密度

在空白青稞酒樣品中分別加入10 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL 3個水平濃度的糖精鈉標品，按實驗相同的樣品前處理方法，在相同的儀器條件下重復測定6次，計算回收率和精密度。其結果見表2。

由表2可知，糖精鈉在10 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL 3個濃度水平的精密度實驗中相對標準偏差（RSD）在0.058%～0.23%之間，表明精密度良好；回收率在97.74%～106.9%，表明準確度高。

2.6 方法的檢出限

方法檢出限是指給定的方法在特定的條件下能夠檢出被測物質的最小濃度值，它是表示分析方法的重要的參數之一。分析方法的檢出限與儀器噪音，樣品的性質，前處理方法，試劑等都有直接的關系。為了能夠準確的反映整個分析方法在分析過程中的誤差，可采用標準物質按方法的分析步驟進行檢測，本實驗通過分析12份已知的標品計算方法的檢出限。計算公式如下：CL=KSC/X，其中：CL為方法的檢出限，μg/mL；K為置信因子，一般取3；S為樣品測量值的標準偏差；C為樣品含量值，μg/mL；X為樣品測量值的平均數。本實驗取12份0.5 μg/mL的糖精鈉標準品，按照測定方法進行測定，測定結果見表3。按公式計算檢出限為：0.023 μg/mL。

2.7 不確定度分析

根據《檢測和校準實驗室能力的通用要求》的規定，

當檢測的結果在標準要求的臨界值上下時，有可能導致誤判產品不合格時，應該計算該方法的不確定度，以確保檢測數據的有效性和準確性。本實驗不確定度的主要來源有電子天平、容量瓶、標準物質的不確定度等因素。由于本實驗檢測的樣品中均不含糖精鈉，不存在誤判的可能，就未采用不確定度來校正結果。在以后的檢測中，當出現檢測結果在臨界值上下時，必須用不確定度來校正結果。

2.8 樣品分析

抽取了青海省20家青稞酒廠的40個青稞酒樣品，用該方法進行檢測，均未檢出糖精鈉。

3 結論

本實驗通過優化色譜條件和前處理方法，建立了一種高效液相色譜法檢測青稞酒中糖精鈉的方法，對不同青稞酒廠家的生產的青稞酒進行檢測，均未檢出糖精鈉。實驗結果表明：該方法穩定性好，準確度高，重復性好，用于青稞酒中糖精鈉的檢測，前處理簡單，是一種實用性較強的檢測方法。

[1]魯琳,杭義萍,高燕紅,等.食品甜味劑分類及其檢測技術現狀[J].現代預防醫學,2009,36(11)：2033-2035.

[2]中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員會.食品安全國家標準食品添加劑使用標準：GB 2760—2014[S].北京：中國標準出版社,2014.

[3]程春梅,趙燕,師邱毅,等.液相色譜法測定白酒中安賽蜜和糖精鈉含量[J].釀酒科技,2012(6)：99-101.

[4]陳仁遠,馮永渝,梁桂娟,等.白酒中甜味劑含量的本底值及來源研究[J].釀酒科技,2014(9)：37-41.

[5]胡強,王延云,李超豪,等.超高效液相色譜質譜法快速測定白酒中痕量甜味劑[J].食品科學,2013,34：232-236.

[6]柯潤輝,王麗娟,安紅梅,等.超高效液相色譜-串聯質譜法直接測定白酒中8種甜味劑[J].釀酒科技,2016(5)：107-110.

[7]劉佟,楊悠悠,王浩,等.超高效液相色譜-串聯質譜法測定飲品中7種人工合成甜味劑[J].分析測試技術與儀器,2015,12(21)：218-224.

Determination of Saccharin Sodium Content in Highland Barley Liquor

CAI Linsen
(Qinghai Product Quality Supervision and Inspection Institute,Xining,Qinghai 810001,China)

The determination method of saccharin sodium content in highland barley liquor by HPLC had been developed.10.0 g liquor sample was placed on multivapor for decompression-evaporation until almost dry,then ultra-pure water was injected to 10 mL for subsequent analysis. Inertsustain C18(4.6×250 mm×5 μm)column was used for separation.0.02 mol/L ammonium acetate buffer and methanol(V/V=85∶15) was used as mobile phase,the flowing rate was 0.8 mL/min,the column temperature was at 40℃,the injection volume was 10 μL,and the wavelength of ultraviolet detector was at 220 nm.The experimental results showed that sodium saccharin showed a good linear relationship within 5 to 150 μg/mL and the linear equation was y=24893.5x,the correlation coefficient R2=0.9999,the recovery was between 97.74%to 106.9%,and the detection limit was 0.023 μg/mL.This method was simple,rapid,precise,accurate and it could be used in the analysis of saccharin sodium in highland barley liquor.

saccharin sodium;highland barley liquor;liquid chromatography

TS262.3；TS261.7

A

1001-9286（2017）03-0107-02

10.13746/j.njkj.2016358

2016-12-02

蔡林森（1986-），男，重慶開縣人，碩士研究生，助理研究員，研究方向為材料化學和食品分析。

優先數字出版時間：2017-01-25；地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.1051.TS.20170125.0744.002.html。