頭孢吡肟對陰溝腸桿菌體外抗菌活性的分析

●馬兆泉陳濤

頭孢吡肟對陰溝腸桿菌體外抗菌活性的分析

●馬兆泉1陳濤2

目的：了解頭孢吡肟對陰溝腸桿菌的體外抗菌活性，分析了陰溝腸桿菌對頭孢吡肟的耐藥情況．方法：使用5種底物的“雙紙片協同試驗”對30株陰溝腸桿菌進行超廣譜B-內酰胺酶(ESBLs)檢測。體外藥敏試驗采用K-B法，實驗數據處理使用WHONET-5.5軟件。結果：19株非ESBLs產酶細菌對頭孢吡肟的耐藥率為0%；由于ESBLs的作用，本組產ESBLs陰溝腸桿菌11例，對頭孢吡肟的耐藥率為36.6%．結論：ESBLs是造成陰溝腸桿菌對頭孢吡肟耐藥的主要原因，該藥在治療陰溝腸桿菌感染時應以耐藥機制檢測結果為依據．

頭孢吡肟；陰溝腸桿菌；體外抗菌活性；AmpC酶

近年來隨著三代頭孢菌素的廣泛應用，其誘導作用使得產B-內酰胺酶如ESBL及AmpC酶的革蘭陰性桿菌日益增加，細菌的耐藥性也相應增加，三代頭孢菌素臨床治療效果明顯降低。頭孢吡肟屬第四代頭孢菌素，它對革蘭陰性菌比大多數第三代頭孢菌素具有更廣的抗菌譜和更強的抗菌活性。陰溝腸桿菌是院內感染常見的病原菌之一，耐藥機制復雜，對B內酰胺類抗生素呈嚴重的交叉耐藥，給臨床治療該菌感染帶來極大的困難[1]。第四代頭孢菌素，頭孢吡肟在高耐藥性細菌感染中的治療效果受到了臨床的普遍關注。本研究運用細菌耐藥機制檢測和抗生素體外藥敏分析的方法，對頭孢吡肟的體外抗菌活性進行了分析比較。

1 材料和方法

1.1 菌株來源

菌株由本院檢驗科細菌室2014年1月～2016年10月間臨床分離的30株陰溝腸桿菌。

1.2 抗生素紙片和培養基

藥敏紙片∶頭孢吡肟(FEP)、氨芐西林(AM)、慶大霉素(GM)、頭孢唑啉(CZ)、阿莫西林／克拉維酸(AMC/CLA)、頭孢噻肟(CTX)、頭孢曲松(CRO)、頭孢他啶(CAZ)、氨曲南(ATM)、阿米卡星(AK)和亞胺培南(IPM)等11種。

1.3 培養基

M-H瓊脂購自生物·梅里埃公司．在每只內徑為8.5cm的平皿中定量傾注M-H瓊脂23ml，以確保平皿中瓊脂厚度為4 mm。

1.4 質控菌株

大腸埃希苗ATCC 25922、ATCC 35218，肺炎克雷伯菌ATCC 700603購自中國藥品生物制品檢定所。質控結果均符合NCCLS規定的要求。

2 方法

超廣譜B內酰胺酶(ESBLs)檢測采用文獻報道的以AMC紙片為中心，CAZ、CTX、CRO、ATM和FEP為底物的雙紙片協同試驗(DDST)。紙片中心距離采用20 mm，在因抗生素的協同作用．5種底物的抑菌環出現干擾而影響結果判斷時，調整距離為25 mm。本次實驗以ATCC 25922大腸埃希菌、ATCC 700603肺炎克雷伯菌為ESBLs檢測的陰、陽性對照。

3 結果

實驗數據處理使用WHONET-5.5軟件。結果 19株非ESBLs產酶細菌對頭孢吡肟的耐藥率為0%；由于ESBLs的作用，本組產ESBLs陰溝腸桿菌11例，對頭孢吡肟的耐藥率為36.6%．

4 討論

隨著三代頭孢菌素的廣泛使用以及三代頭孢菌素對革蘭陰性桿菌產AmpC酶及ESBLs具有強烈的誘導和篩選作用，使其治療效果明顯降低。陰溝腸桿菌是院內感染的重要病原菌之一，其復雜的耐藥機制及其對B內酰胺類抗生素嚴重的交叉耐藥給臨床感染的治療帶來很大的困難。目前認為,革蘭陰性桿菌對第三代頭孢菌素耐藥的原因主要是細菌產生質粒介導的超廣譜酶(ESBL),如陰溝腸桿菌,弗勞地枸櫞酸桿菌等產生染色體介導的AmpC酶,滅活第三代頭孢菌素而引起耐藥,陰溝腸桿菌在β內酰胺抗生素誘導劑不存在時,只產少量的AmpC酶,而在β內酰胺抗生素誘導劑存在時,則產生高水平的AmpC酶。近年研究表明,革蘭陰性桿菌不僅產生染色體介導的AmpC酶,而且還產生質粒介導的AmpC酶.ESBLs的產生在很大程度上加劇了陰溝腸桿菌的嚴重耐藥性，實驗研究提示FEP仍有被ESBLs水解的可能；在本次實驗調查中，陰溝腸桿菌ESBLs產酶株也表現出對FEP的水解能力。參照NCCLS的有關規定，本研究中11株產ESBLs陰溝腸桿菌對FEP的耐藥率為36.6%。ESBLs是影響本地區頭孢吡肟對陰溝腸桿菌抗菌活性的主要原因。細茵的耐藥性問題是可以得到控制的，控制的關鍵在于合理、有效地使用抗菌藥物。而臨床微生物學監測資料在抗菌藥物的合理運用中有非常重要的參考價值。盡管與本地區常用的其他頭孢菌素及氮曲南相比，FEP表現出更好的抗菌活性和對酶的穩定性，但其臨床治療效果同樣會受到細菌耐藥性的影響。因此同所有的抗菌藥物一樣，FEP的使用，特別是在難治性感染中的運用應以實驗室檢查資料為依據，對于陰溝腸桿菌ESBLs產酶株還應參照產ESBLs的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌治療原則。

頭孢吡肟在頭孢烯的3位上有一個季銨化的N-甲基吡咯啶基，可形成兩性離子，容易通過革蘭陰性細菌外層膜孔而起抗菌作用。它分子較小能夠很快穿過革蘭陰性桿菌的細胞膜，在細胞膜和壁之間短時間達到一定濃度發揮藥效；它與青霉素結合蛋白的親和力較高而與B-內酰胺酶的親和力降低，特別是對染色體介導的或質粒介導的Bush -J型B-內酰胺酶，即AmpC酶具有較高的穩定性.[2].FEP為第四代注射用頭孢菌素。與常用的三代頭孢菌素相比，具有與B內酰胺酶的親和力更低，對某些染色體介導B內酰胺酶更穩定，對細菌細胞膜的穿透力更強等特點。由于具有諸多的優點，從本文結果可知，頭孢吡肟對革蘭陰性桿菌的抗菌活性高于三代頭孢菌素，特別是對產AmpC酶的細菌，在排除ESBLs菌嚴重感染的情況下對臨床治療和控制醫院感染方面具有良好的效果。

（作者單位：1甘肅省嘉峪關市中醫醫院；2甘肅省康復中心醫院）

[1]摩梅，陰溝腸桿菌對B-內酰胺類抗生素耐藥的機制．國外醫學微生物學分冊．1997，20(3):21-23

[2]熊薇，張文池，陳如，等．頭孢類抗生素對臨床常見革蘭陰性桿菌體外抗菌活性的比較研究[J]．中華醫院感染雜志，2001；11(4):251-253

陳濤