1例中間型β地中海貧血的基因診斷與臨床表現

●王健 何繼宏 何曉清 李偉強 唐躍華

1例中間型β地中海貧血的基因診斷與臨床表現

●王健 何繼宏 何曉清 李偉強 唐躍華

目的：分析1例中間型β地中海貧血的基因檢測結果與臨床表現。方法：資料選取我院2014年-2016年期間收治的1例中間型β地中海貧血患兒，采用常規PCR技術以及DNA序列測定進行基因診斷。結果：常規PCR檢測技術結果為β41/42雜合子，提示為輕型β地中海貧血；DNA序列測定結果發現患兒β珠蛋白基因還存在PolyA(A＞G)突變，為βPolyA(A＞G)/β41/42雙重雜合子。結論：臨床診斷為中間型β地中海貧血需要結合臨床表現和基因檢測結果綜合分析，對于常規基因檢測與地中海貧血表型篩查結果不符時，應考慮為罕見或未知突變類型，進一步檢測非常見類型α或β地中海貧血基因，以防漏診或誤診。

中間型β地中海貧血；基因診斷；臨床表現

α珠蛋白基因位于人體的16號染色體，而α地中海貧血為基因連接中-α3.7、α4.2、--SEA缺失基因的超過95%，且α地中海貧血主要由于超過5%的α基因缺失導致，且近些年有較少報道α四聚體、α三聚體。β珠蛋白基因位于11號染色體，且此基因鏈為1%基因缺失或99%點突變。回顧相關外國文獻發現數百種β珠蛋白基因突變，而我國僅發現20多種。臨床研究發現地中海貧血的主要臨床表現為肽鏈α/β平衡因素、β基因表現β0與β+、α基因表現α1與α2等相關因素影響。而目前臨床診斷地中海貧血的實驗方法有以下幾種∶（1）采用外周血紅蛋白電泳檢測血紅蛋白定量和定性[1]；（2）疑似地中海貧血患者應給予α地中海貧血Gap-PCR基因缺失檢測法，β地中海貧血反向斑點雜交檢測法；（3）α與β珠蛋白基因全長測序。本文就如何提高基因檢測技術和統計臨床表現和影響因素進行詳細討論，為今后臨床治療提供有利參考和證據，現將報告闡述如下∶

1 資料與方法

一般資料∶

患兒∶女；年齡∶4歲；患者由于面色蒼白，且患者消瘦、體弱無力。患兒家屬主訴∶患兒11月時開始面色蒼白，消瘦、右上腹包塊逐步增大。生化檢驗發現∶WBC∶9.2×109/L，Hb∶72.0g/L，MCV69.0fl，MCH∶19.6pg，MCHC∶32.1%，PLT∶301×109/L。且發病半年時共 2次紅細胞懸液輸入，每次個1單位，且患兒輸入紅細胞懸液后很快出現面色蒼白，且家長攜患兒前去當地醫院就診，經生化檢查發現Hb浮動性較大，且當患感冒時可出現Hb下降至50-60g/L，當正規、有效、對癥治療發現可逐漸恢復至80-90g/L，且此期間可不予以相關處理。而近1年內患者右上腹逐漸增大，但無明顯腹脹和疼痛，但患兒出現體型消瘦但在標準范圍內。患兒家屬出具以往病歷，發現患兒出生時并無貧血，但多日后黃疸不退，經診斷為“新生兒膽紅素”，臨床予以藍光照射治療后黃疸消退。與患兒家屬溝通發現∶患兒目前既往有輕度貧血，而患兒外公為中度貧血，而其余家屬是否患有貧血和程度尚不明確。而本次經我院常規檢驗發現∶WBC∶6.38×109/L、Hb82g/L、MCV63.1fl、MCH20.2pg、MCHC32.8%、PLT189×109/L、ALT∶18U/L、TBIL64.1umol/L、IBIL56.2umol/L，而測定血清鐵元素11.8umol/L；不飽和鐵結合19.3umol/L，經腹部彩超檢查發現，患兒肝、脾部出現明顯增大，但并未出現結構性變異以及占位性異常病變；且經檢測發現患兒抗人球蛋白陰性；而外周血紅蛋白電泳結果顯示HbF9.1%，HbA24.2%。

2 檢測方法

2.1 α與β珠蛋白常見突變基因型檢測

提取外周靜脈血白細胞基因組DNA后，利用反向斑點雜交技術(reverse dotblot，RDB)檢測17種β地貧點突變類型∶41-42、43、654、-32、-28、-29、71-72、-30、17、14-15、βE、CAP、31、InT、27/28、IVS1-1、IVS1-5，與3種α地貧點突變類型∶aCS、aQS、aWS；利用多重PCR技術（Multiplex PCR）檢測3種α地貧缺失型突變類型-a3.7、-a4.2、--SEA。

2.2 珠蛋白基因全長測序。

3 結果

（1）依據血常規與血紅蛋白電泳結果分析，此患兒應為中間型地中海貧血。

（2）經地中海貧血基因檢測發現∶患兒的基因型為β基因41/42雜合子而α基因未檢測出異常。患兒母親的地貧基因檢測未見異常，父親的地貧基因檢測結果也為β基因41/42雜合子。患兒基因型結果提示為輕型β－地中海貧血，與篩查結果不符。

（3）進一步采用PCR測序方法分析202種非常見點突變型β地中海貧血（深圳亞能公司完成），結果發現患兒β珠蛋白基因還存在Poly A(A＞G)突變，為βPoly A(A＞G)/β41/42雙重雜合子。

4 討論

本次調查的患兒為中度貧血，且患兒發病前已輸血2次，每次各1個單位，但本次感染時患兒彩超下已出現肝脾增大以及生化檢查小細胞低色素貧血和膽紅素升高等結果，所有檢查符合溶血性貧血特點；且患兒經鐵代謝檢查發現排除缺鐵性貧血，以及采用電泳檢查HbF、HbA2都增高，同時回訪患兒家屬發現，家屬人群中存在數人貧血，且癥狀符合中間型β-地中海貧血，但α與β珠蛋白常見突變基因型檢測結果提示為輕型，與篩查結果不符。進一步采用PCR測序方法分析202種非常見點突變型β地中海貧血，結果發現患兒β珠蛋白基因還存在Poly A(A＞G)突變，為βPoly A(A＞G)/β41/42雙重雜合子。

綜上所述，臨床診斷為中間型地中海貧血，首要應排除患者患有其他方面原因導致貧血，再采用血紅蛋白電泳和基因分析，同時進行家族病史分析，聯合各項結果綜合分析病情。對于常規基因檢測與地中海貧血表型篩查結果不符時，應考慮為罕見或未知突變類型，進一步檢測非常見類型α或β地中海貧血基因，以防漏診或誤診。因此，對于罕見類型β地中海貧血，如果不進行血液學表型篩查，而只進行常規基因檢測，會造成假陰性結果。（

作者單位：惠州市第三人民醫院）

[1]黃莉,姚紅霞.羥基脲治療中間型β地中海貧血的療效觀察[J].中國實驗血液學雜志,2016,24(3):806-809.

[2]楊金玲,鄭敏.β地中海貧血實驗室診斷的研究進展[J].中國優生與遺傳雜志,2016(4):7-8.

[3]劉新顏,王靜,曾艷紅,等.β地中海貧血基因檢測結合HLA配型的胚胎植入前遺傳學診斷技術的臨床應用[J].中華婦產科雜志,2016,51(7):491-497.

課題名稱：廣東惠州地區中間型β地中海貧血的基因多樣性及其臨床表現的研究課題編號：20140806；惠州市科學技術局