HPLC法測定頭孢噻肟鈉中2-巰基苯并噻唑（M）殘留量

王 冉

華北制藥集團河北華民藥業有限責任公司 河北省石家莊市 052165

HPLC法測定頭孢噻肟鈉中2-巰基苯并噻唑（M）殘留量

王 冉

華北制藥集團河北華民藥業有限責任公司 河北省石家莊市 052165

目的：建立HPLC法測定頭孢噻肟鈉中2-巰基苯并噻唑（M）殘留量。方法：采用高效液相色譜法，樣品經萃取處理后測定。色譜柱為依利特BDS C18(4.6mm×150mm，5.0μm);流動相為pH6.25磷酸鹽緩沖液-甲醇(60：40）;檢測波長為315nm，柱溫為25℃。萃取劑為三氯甲烷。結果：M的質量濃度在0.5μg/ml-7.5μg/ml范圍內與峰面積線性關系良好(r=0.9998，n=7);平均回收率為107%（n=9)。結論：該方法快速、靈敏，結果準確可靠，可用于頭孢噻肟鈉中M的檢測。

HPLC；頭孢噻肟

頭孢噻肟為第三代頭孢菌素，抗菌譜廣，臨床上主要用于各種敏感菌的感染。我公司在生產頭孢噻肟鈉的過程中使用AE活性酯與7-ACA反應，M為以氨噻肟酸和二硫化二苯并噻唑為起始原料生產AE活性酯的副產物，可能會在頭孢噻肟鈉里殘留。M為基因毒性雜質，根據EMEA人用藥品委員會（CHMP）關于基因毒性雜質的限度指南規定及頭孢噻肟鈉最大日劑量可以計算得出，M每日允許攝入量為5μg/ g。測定M的方法有高效液相色譜法。如果采取直接進樣法，需要配備靈敏度更高的質譜檢測器才能對其進行定量檢測。本文通過對樣品中的M進行萃取法富集，然后采用HPLC（UV檢測器）進行定量測定，建立了頭孢噻肟鈉中的M殘留定量檢測方法。

圖1：M對照品

1 試劑

頭孢噻肟鈉，華北制藥河北華民藥業有限責任公司提供，批號為C2081510044、C2081510045、 C2081510046；M，分析純，阿拉丁，批號為F1206015，含量98.1%；甲醇，色譜純，上海星可生化，批號為021250801。

2 方法與結果

（1）色譜條件，色譜柱。依利特BDS C18(4.6mm×150mm，5.0μm)；柱溫25℃；檢測器波長315nm，

流速1.2ml/min。

（2） 對照品溶液制備。精密稱取M約25mg，置100ml容量瓶中，加三氯甲烷使溶解并定量稀釋至刻度。精密吸取1.0ml于50ml容量瓶中，用流動相定量稀釋成5μg/ml M對照品溶液。

（3） 樣品溶液制備。精密稱取頭孢噻肟鈉供試品約2.0g，精密加入10.0ml純化水使溶解，精密加入三氯甲烷2.0ml，劇烈振搖1分鐘，靜置，取下層溶液，以孔徑0.45μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

（4）專屬性測試，經測試，空白溶液對主峰測定無干擾。對照品溶液中，只有M峰，滿足M峰與相鄰雜質峰間的分離度>1.5的要求。供試品溶液中，M峰與相鄰峰間的分離度為13.4，滿足M峰與相鄰雜質峰間的分離度R>1.5的要求。

（5） 檢測限和定量限。當信噪比（S/ N）為3:1時，M的濃度為0.014μg/ml，即為檢測限；當信噪比（S/N）為10:1時，M的濃度為0.036μg/ml，即為定量限。

（6）重復性。按照2.3項下操作，平行制備6組樣品溶液，經測試，M結果平均值為1.69334ppm，RSD為1.3%。

（7）中間精密度按照色譜條件，采用不同人員不同時間進行樣品測定，各組樣品溶液M含量測定值的平均值為1.55135ppm，RSD為8.2%。

（5）樣品中M的殘留量測定。分別稱取三批頭孢噻肟鈉樣品2.0g按照2.3項下操作，進樣分析。結果見表1。

表1：樣品檢測結果

3 討論

（1）本實驗建立了HPLC（紫外檢測器）檢測頭孢噻肟鈉中M殘留量的方法，以外標法進行計算，該方法具有檢測限低(ppm級)，準確度及精密度高，樣品檢測時間短（10min）的優勢。

（2） 因三氯甲烷易揮發，樣品溶液需要臨用新制并密封保存，否則會導致檢測結果偏高。

（3） 供試品進行萃取時注意一定要振搖1min，否則萃取不完全，會使檢測結果偏低。

[1]毛樹祿,呂培其,張元金,李小婭,陳敬華.高效液相色譜法測定橡膠制品中2-巰基苯并噻唑[J].理化檢驗(化學分冊),2014(10):1242-1244.

王冉，女，現供職于華北制藥集團河北華民藥業有限責任公司，從事藥品檢測方面的研究。