葛根素對免疫抑制模型小鼠細胞免疫功能的影響

高 青 馬記平

鄭州澍青醫學高等專科學校 河南省鄭州市 450064

葛根素對免疫抑制模型小鼠細胞免疫功能的影響

高 青 馬記平

鄭州澍青醫學高等專科學校 河南省鄭州市 450064

目的：觀察葛根素對免疫抑制模型小鼠細胞免疫功能的影響，初步研究其作用機制。方法：通過小鼠體重、臟器指數以及IFN-γ/IL-4比值等，檢測葛根素對免疫抑制模型小鼠細胞免疫功能的影響。結果：免疫抑制模型小鼠體重、臟器指數以及IFN-γ/IL-4比值都顯著下降。葛根素Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組小鼠體重、臟器指數以及IFN-γ/IL-4比值都顯著升高。結論：葛根素提高小鼠的細胞免疫功能，其機制可能和促進脾臟T淋巴細胞增值，糾正T淋巴細胞亞群Th1/Th2比例紊亂有關。

葛根素；細胞免疫；Th1/Th2近年來，由于環境污染、精神壓力等多種因素刺激，免疫紊亂性疾病逐年升高，該類疾病發病機制復雜，遷延難愈。有研究發現[1]葛根素能夠增加免疫器官的重量，

對T淋巴細胞的增值分化有一定的促進作用，葛根素在治療免疫紊亂疾病上有獨特的優勢，引起廣泛的重視。本研究用環磷酰胺誘導免疫抑制模型小鼠[2]，在造模的基礎上給予不同濃度的葛根素片，研究葛根素對免疫抑制模型小鼠細胞免疫功能的影響，并初步研究其可能的作用機制。

1 實驗的材料

1.1 試劑與儀器

RPMI1640細胞培養液（焦作路非凡生物科技有限公司，批號30021）；四甲基偶氮唑鹽（MTT，新鄉智寶生物科技有限公司，批號：M2126）；葛根素片（鄭州荔諾生物科技有限公司，批號：120523）；小鼠IL-4、IFN-γ的ELISA檢測試劑盒（鄭州唯爾生物科技）。

1.2 動物與分組

KM種雄性小鼠（18～22g）120只，由山東魯抗醫藥股份有限公司提供，生產許可證號SCXK（魯）2013-0001。將動物置于清潔級動物房內，自由攝食1周后實驗。按隨機區組分組法將小鼠分組，每組10只。試驗前3d，正常組腹腔注射0.1mL/10g的生理鹽水，其余各組小鼠腹腔注射環磷酰胺100mg/kg，連續三天造免疫抑制模型[3]。試驗第4d起，正常組灌胃生理鹽水，陽性對照組灌胃香菇多糖（100mg/ kg），葛根素各組分別灌胃50、150、300mg/kg的葛根素溶液，各組0.1mL/10g BW連續灌胃給藥2周。

2 方法

2.1 葛根素對小鼠體重、臟器指數的影響

摘取小鼠的胸腺和脾臟，稱重記錄，按照下列公式計算臟器指數。脾臟指數=（脾臟重量mg/小鼠體重g）×10；胸腺指數=（胸腺重量mg/小鼠體重g）×10

2.2 血清中IFN-γ、IL-4的含量測定

沒有加抗凝劑的血液，在室溫放置2h后3500r?min-1離心10min，取上清，即得血清。按照ELISA試劑盒說明書操作步驟進行操作，最后酶標儀在450nm下讀取吸光度。

3 數據處理

本實驗采用SPSS17.0版的統計軟件進行了方差分析，實驗結果用表示，實驗的組間比較使用單因素方差分析，實驗結果以P<0.05表示差異有統計學的意義。

4 結果

4.1 葛根素對小鼠體重、臟器指數的影響

根據最后一次各組小鼠體重相比發現，模型組小鼠體重、脾臟指數和胸腺指數顯著低于正常組（P<0.01或P<0.05），葛根素組小鼠體重、脾臟指數和胸腺指數顯著高于模型組小鼠（P<0.01或P<0.05）。見表1。

表1：葛根素對各組小鼠臟器指數、體重的影響（n=10）

表1：葛根素對各組小鼠臟器指數、體重的影響（n=10）

注：與正常組相比▲▲P<0.01，▲P<0.05；與模型組相比★P<0.05，★★P<0.01

組別體重（g）脾臟指數胸腺指數正常組32.14±0.6548.84±9.4320.35±4.29模型組27.35±0.64▲32.68±8.07▲▲10.72±1.82▲▲陽性藥組32.25±0.56★53.41±10.28★★20.28±5.46★葛根素Ⅰ組29.50±1.4346.87±12.63★16.28±5.46葛根素Ⅱ組30.58±0.81★50.88±12.04★★18.65±5.06★葛根素Ⅲ組31.73±0.49★★47.25±11.69★20.59±6.17★

4.2 葛根素對小鼠血清中IFN-r和IL-4含量的影響

模型組和正常組相比，血清中IFN-r含量顯著降低（P<0.01），IL-4的含量升高（P<0.05），IFN-r/IL-4比值顯著升高（P<0.01），葛根素組小鼠與模型組小鼠相比，血清中IFN-r含量顯著升高（P<0.01，P<0.05），IL-4的含量明顯升高（P<0.05），IFN-r/IL-4比值顯著升高（P<0.01，P<0.05）。見表2。

表2：葛根素對血清中IL-4和IFN-r含量的影響

5 討論

脾臟、胸腺是重要的免疫器官，其重量及功能在一定程度上影響機體的免疫功能，其中脾臟淋巴細胞增殖能力是機體細胞免疫能力的主要指標之一[5]。T淋巴細胞是相當復雜的不均一體，在體內不同細胞因子刺激下可分化為Th2型、Th1型細胞。Th1型細胞分泌IFN-γ、IL-2[6]等，主要介導了細胞免疫應答。但是Th2型細胞主要分泌IL-4、IL-5等，主要介導體液免疫應答，輔助抗體生成[7]。正常情況下，Th1/Th2處于一種相對穩定的狀態，維持機體免疫穩態，但是當機體免疫抑制等癥狀時，出現Th1/Th2比例的失衡。實驗發現葛根素能夠上調血清中IFN-γ含量，降低血清中IL-4含量，升高IFN-γ/IL-4比值，改善Th1/Th2比例，進而影響小鼠的細胞免疫功能。葛根素可能通過促進脾臟T淋巴細胞增值，刺激Th1型細胞分化增生，糾正T淋巴細胞亞群Th1/Th2細胞比例紊亂，提高免疫抑制小鼠的免疫功能。

[1]程麗彩.葛根素對機體免疫系統影響研究進展[J].實用中醫藥雜志,2010,26(06):440-441.

[2]包匯慧,耿雪,賈旭東,等.環磷酰胺對大鼠脾細胞抑制作用的研究[J].毒理學雜志,2014,28(03):189-194.

[3]陳健明,陳殿慧,余秀雪,等.玉屏風藥液對環磷酰胺抑制的C57BL/6小鼠免疫功能的影響[J].現代中西醫結合雜志,2014,23(23):2509-2612.

[4]曾光,梁清華,吳漢軍,等.熊果酸對刀豆蛋白A誘導小鼠T細胞增殖與激活的影響[J].湖南中醫藥大學學報,2008(02):16-18.

[5]于曉紅,李書丹,闞洪敏,等.紅樹莓原液對免疫抑制小鼠臟器指數及血清IFN-γ、IL-4水平的影響[J].天津中醫藥,2015,32(03):173-175.

[6]翟志敏.IL-2對免疫激活和免疫耐受的雙向調節作用[J].中國藥理學通報,2013(03):319-322.

[7]李春光,王月飛,趙紅曄,等.化濕湯結合潤膚止癢膏對濕疹小鼠血清IL-4和IFN-γ水平影響[J].中國中醫藥科技,2015,22(01):31-32.

高青（1987-），女，河南省鄭州市經濟技術開發區人。碩士學位。現為鄭州澍青醫學高等專科學校助教，從事藥理學教學工作。