老年原發性血小板增多癥患者Jak2基因v617f點突變檢測的臨床意義

謝曉玲

(惠州市中心人民醫院血液科，廣東 惠州 516001)

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老年原發性血小板增多癥患者Jak2基因v617f點突變檢測的臨床意義

謝曉玲

(惠州市中心人民醫院血液科，廣東 惠州 516001)

目的探討老年原發性血小板增多癥(ET)患者Jak2基因v617f點突變檢測的臨床意義。方法老年ET患者100例，檢測Jak2基因v617f點突變，根據檢測結果分為陰性組(n=54)與陽性組(n=46)，比較兩組年齡、性別、脾腫大、骨髓巨核細胞數、實驗室檢查指標及血栓發生率、出血率。結果兩組年齡、性別、脾腫大及骨髓巨核細胞數差異均無統計學意義(均P>0.05)。陽性組白細胞計數(WBC)水平顯著高于陰性組(P<0.05)，兩組血紅蛋白(HGB)、血小板計數(PLT)水平比較差異無統計學意義(P>0.05)。陽性組血栓發生率顯著高于陰性組(P<0.05)，兩組出血率比較差異無統計學意義(P>0.05)。結論Jak2基因v617f點突變檢測有利于輔助臨床診斷老年ET，有效評估患者疾病狀態，并為臨床治療和預防血栓的發生提供參考依據。

原發性血小板增多癥；Jak2；基因突變；v617f

原發性血小板增多癥(ET)是發病率較高的一類骨髓增殖性疾病，亦是一種多能干細胞慢性克隆增生性疾病〔1〕。主要臨床表現為外周血血小板計數的持續性升高〔2〕。有研究報道〔3〕，ET患者普遍存在Jak2基因12號外顯子第1849位核苷酸G-T突變，這也導致了負調控功能區Jak2蛋白的617位結氨酸錯譯編碼為苯丙氨酸。本文擬研究老年ET患者Jak2基因v617f點突變檢測的臨床意義。

1 資料與方法

1.1臨床資料 回顧性分析2012年3月至2016年3月于惠州市中心人民醫院接受治療的老年ET患者100例，納入標準：①患者均符合世界衛生組織(WHO)制定的ET診斷標準〔4〕，且均為ET；②年齡≥60歲。排除標準：①合并其他周圍血管病、冠心病、惡性腫瘤及遺傳性易栓癥等患者；②伴有高血壓、糖尿病或高脂血癥者。患者男60例，女40例，年齡60～81〔平均(37.2±8.3)〕歲；病程1～8年，平均(3.46±1.33)年。患者均知情同意。根據檢測結果分為陽性組46例，陰性組54例。陽性組男28例，女18例；年齡(68.2±3.6)歲；脾腫大25例；骨髓巨核細胞數>36個39例；≤36個7例。陰性組男32例，女22例；年齡(67.9±3.7)歲；脾腫大20例；骨髓巨核細胞數>36個41例，≤36個13例。兩組年齡、性別、脾腫大及骨髓巨核細胞數差異均無統計學意義(均P>0.05)。

1.2方法 檢測所有患者Jak2基因v617f點突變情況，Jak2引物序列：上游引物一：5′-AGCATTTGGTTTTAAATTATGGAGTATATT-3′,上游引物二：5′-ATCTATAGTCATGCTGAAAGTAGGAGAAAG-3′，下游引物：5′-CTGAATAGTCCTACAGTGTTTTCA-GTTTCA-3′。PCR反應體系為25 μl，包括150 ng的DNA以及10 pmd/μl兩種。擴增條件：94℃預變性240 s，變性45 s，56℃退火30 s，72℃延伸60 s，完成35個循環后繼續72℃延伸600 s。擴增完成后取Jak2擴增產物8 μl，在2.0%瓊脂糖凝膠下進行電泳，使用紫外燈檢查結果。判定標準：①突變陽性：同時存在364 bp與203 bp兩條條帶；②突變陰性：只存在364 bp一條條帶。

1.3觀察指標 比較兩組年齡、性別、脾腫大、骨髓巨核細胞數、實驗室檢查指標以及血栓發生率、出血率，其中實驗室檢查指標主要包括外周血白細胞計數(WBC)、血紅蛋白(HGB)、血小板(PLT)。所有患者入院后均采集指尖血3 ml，3 000 r/min離心15 min后分離血清，并立即送檢，采用JHF7-3000型血常規檢測儀(西化儀科技有限公司生產)進行檢測，由電腦報告結果。

1.4統計學方法 應用SPSS21.0軟件進行χ2、t檢驗。

2 結 果

2.1兩組實驗室檢查指標比較 陽性組WBC水平顯著高于陰性組(P<0.05)，兩組HGB、PLT水平比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

2.2兩組血栓發生率、出血率比較 陽性組血栓發生率〔45.65%(21/46)〕顯著高于陰性組〔20.37%(11/54)，P<0.05〕，兩組出血率〔6.52%(3/46)、5.56%(3/54)〕差異無統計學意義(χ2=7.296、0.041，P>0.05)。

表1 兩組實驗室檢查指標比較

3 討 論

ET屬于骨髓增殖性腫瘤之一，該病主要是一種存在不同血液學特征的綜合征，且可相互轉化〔5〕。血栓形成及出血是臨床ET患者發生率最高的并發癥，嚴重時甚至會直接導致患者的死亡〔6〕。有研究報道，Jak2基因v617f點突變屬于動脈血栓的高危因素〔7〕。有研究報道〔8〕，Jak2基因v617f點突變可能是通過增強酪氨酸蛋白激酶/信號傳導子和轉錄活化子(JAK-STAT)信號傳導通路，從而使得紅系祖細胞的細胞生存蛋白BCL-X過度表達，同時通過MAPK與PI13K信號傳導通路降低紅系祖細胞中死亡受體所誘導的細胞凋亡，刺激造血細胞系的G1/S期轉化，進一步促進了造血細胞的增殖，有利于細胞增生以及分化。本研究結果發現Jak2基因v617f點突變陽性率結果與劉金梅等〔9〕結果存在一定差異。可能與兩組研究所選取的患者年齡不同有關。本研究結果提示Jak2基因v617f點突變與患者的年齡、性別、脾腫大及骨髓巨核細胞數情況無相關性。但另有研究報道顯示年齡不同的ET患者Jak2基因v617f點突變陽性率存在顯著差異〔10〕。其中導致結果出現誤差的原因可能與不同研究中的樣本量存在差異，且本研究只選取了年齡≥60歲老年患者有關。另外本研究提示Jak2基因v617f點突變與ET患者的血液學特征存在一定相關性，可能成為臨床上診斷ET的指標之一。本文結果還與鄒煦等〔11〕研究相一致，說明Jak2基因v617f點突變可能參與了ET患者血栓形成過程，并發揮一定作用。

1Rashid M,Ahmed RZ,Ahmed S,etal.Coexisting JAK2V617F and CALR Exon 9 mutation in essential thrombocythemia〔J〕.Indian J Hematol Blood Transfus,2016;32(Suppl 1):112-6.

2Sokolova MA,Turkina AG,Melikyan AL,etal.Efficiency of interferon therapy in patients with essential thrombocythemia or polycythemia vera〔J〕.Ter Arkh,2016;88(12):69-77.

3成志勇,付建珠,徐 倩,等.PTEN、VEGF、COX-2與JAK2 V617F突變陽性骨髓增殖性腫瘤血管新生〔J〕.中國病理生理雜志,2016;32(5):938-42.

4Gisslinger H,Jeryczynski G,Gisslinger B,etal.Clinical impact of bone marrow morphology for the diagnosis of essential thrombocythemia:comparison between the BCSH and the WHO criteria〔J〕.Leukemia,2017;31(3):774-5.

5Smith BB,Nuttall GA,Pruthi RK,etal.A novel approach to essential thrombocythemia and cardiac surgery〔J〕.Ann Thorac Surg,2017;103(3):e249-50.

6李小妮.151例低危原發性血小板增多癥患者的臨床特點和血栓危險因素相關分析〔J〕.內科急危重癥雜志,2016;22(5):379-80.

7許 笑,張群峰,張心菊,等.采用微陣列數字PCR檢測JAK2基因V617F突變〔J〕.中華檢驗醫學雜志,2016;39(3):176-80.

8Gadomska G,Stankowska K,Boinska J,etal.Activation of the tissue factor-dependent extrinsic pathway and its relation to JAK2 V617F mutation status in patients with essential thrombocythemia〔J〕.Blood Coagul Fibrinolysis,2016;27(7):817-21.

9劉金梅,高 坤,張文珍,等.原發性血小板增多癥患者Jak2-v617f突變與急性冠脈綜合征的相關性〔J〕.中外醫學研究,2016;14(12):149-50.

10吳明正,周澤平,文 靜,等.原發性血小板增多癥的危險分層與治療進展〔J〕.實用醫學雜志,2015;31(17):2920-1.

11鄒 煦,常炳慶,杜文津,等.原發性血小板增多癥患者血栓發生與JAK2V617F基因相關性的薈萃分析〔J〕.癌癥進展,2014;12(2):172-8.

〔2017-03-19修回〕

(編輯 袁左鳴/滕欣航)

R558

A

1005-9202(2017)18-4614-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.18.087

惠州市科技計劃項目(No.20160801)

謝曉玲(1978-)，女，副主任醫師，主要從事血液病研究。