近幾年檢測新技術在豬病診斷上的應用

衛秀余，魏 星

（1.上海市奉賢區動物疫病預防控制中心，上海 201400；2.上海星侃生物技術公司，上海 201404）

檢測新技術

近幾年檢測新技術在豬病診斷上的應用

衛秀余1，魏 星2

（1.上海市奉賢區動物疫病預防控制中心，上海 201400；2.上海星侃生物技術公司，上海 201404）

隨著養豬規模的不斷擴大，對豬場疫病防控的要求也在不斷提高；因為在大型豬場一旦發生某種疫病，從確診采取正確的防控措施到恢復正常生產，往往需要3～6個月的周期甚至更長。由此將影響豬場至少6個月以上的生產水平，經濟損失巨大。

因此規模豬場迫切需要一些疫情早期預警、免疫效果精準評估的檢測技術；現將我們實驗室近幾年引進和創建的檢測新技術在豬場的應用經驗介紹如下，供大家參考。

1 口腔液樣品檢測抗原和抗體技術

基于口腔液中除了腺體分泌物外，還包含著黏膜細胞脫落物；所以其中不但含有機體免疫或感染產生的抗體，還存在著感染時隨細胞脫落的各種病原體。

由于公豬的兇猛，采集血液樣品比較困難，因此豬場公豬的免疫抗體檢測普遍會遺漏；一些豬場豬藍耳病、偽狂犬病的流行就是由于對公豬的監測不到位，使公豬成了非常重要的傳染源。

目前通過口腔液可以檢測到的抗原有：豬藍耳病毒、偽狂犬病毒、圓環病毒等；可以檢測的抗體有：豬瘟、豬藍耳病、偽狂犬、圓環病毒和口蹄疫等。

口腔液的采集非常簡便：在豬群喂料前1～2 h，在豬欄上懸掛白色棉紗繩、高度以豬站立時可以咬到為宜，讓豬自由咀嚼棉紗繩20～30 min后把棉紗繩中的口腔液擠入保鮮袋中、再轉入離心管中備用。

2 血清樣品中檢測霉菌毒素技術

由于豬場的飼料一般5～7 d更換一批原料，而每批原料都存在一定的質量差異，因此通過飼料樣品中檢測霉菌毒素來診斷豬群的霉菌毒素中毒時往往會出現誤差。

而直接從疑似中毒豬群的血清樣品中檢測相關的霉菌毒素含量，就可以作為診斷依據；并且通過這一檢測技術還可以用于霉菌毒素吸附劑吸附能力的評估。我們在添加某種霉菌毒素吸附劑前和添加吸附劑后14 d分別采集豬群血清樣品，根據添加霉菌毒素吸附劑前后豬群血清中特定霉菌毒素含量的變化，可以判斷出飼料中該霉菌毒素是否被吸附劑吸附（如果吸附了，血清中該霉菌毒素的含量就會顯著下降）。

目前從血清樣品中可以檢測的霉菌毒素有：黃曲霉毒素、嘔吐毒素、煙曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素等。

3 臍帶血樣品中檢測抗原技術

要診斷某種病原是否會發生垂直傳播，以前主要通過對流產胎兒或新生未哺乳仔豬內臟的檢測來證實；不易采樣且成本較高，所以在臨床上應用較少。而根據一些實驗研究，豬藍耳病、圓環病毒、偽狂犬和豬瘟等病原體都可能通過懷孕母豬傳染給胎兒；繼而造成這些病原體在豬群中持續不斷的流行和造成受感染仔豬的免疫抑制。

我們現在可以通過對臍帶血中某種病原體的檢出率來評估該豬群是否發生了該疫病的垂直傳染，從而為制定該疫病的綜合防控方案提供科學依據；但是，臍帶血檢測只能證實某種疫病在該豬場是否存在垂直傳播，所以不能把它夸大為防控傳染病的主要診斷手段。

4 免疫抗體精準評估技術

仔豬從母體獲得某種疫病的免疫或野毒感染抗體，其持續時間都是有一定規律的。我們根據這些母源抗體的消長規律，就可以找到檢測某種疫病免疫抗體的最佳日齡節點。

大量的檢測數據證實豬藍耳病的母源抗體（母豬免疫或野毒感染）一般維持到25～30日齡左右，而豬藍耳病弱毒疫苗接種后其ELISA抗體在7～10 d左右即可檢測到；根據大部分豬場仔豬藍耳病的免疫日齡在2～3周左右，我們選擇5～6周齡這個日齡節點、隨機采血檢測豬藍耳病ELISA抗體，就可以避開母源抗體對檢測結果的影響、早期評估該豬群的豬藍耳病免疫是否成功。

雖然大量的實驗數據證實豬藍耳病ELISA抗體與真實的免疫保護力之間幾乎沒有相關性，但是疫苗或野毒感染后7～10 d即可檢測到ELISA抗體同樣得到了大家公認；因此我們認為通過檢測豬藍耳病的ELISA抗體至少可以證實疫苗毒是否感染成功，間接地反映了免疫效果。

同樣的原理，我們選擇8～9周齡仔豬檢測圓環病毒2型ELISA抗體，可以進行圓環病毒疫苗免疫是否成功的早期評估；并且可以作為選擇圓環病毒2型疫苗的重要依據。

5 豬藍耳病的診斷標準

經常遇到豬場把保育仔豬出現的呼吸困難、毛色粗亂等癥狀簡單地歸類于豬藍耳病，造成頻繁更換豬藍耳病疫苗和免疫程序，結果豬病依舊。

由于豬藍耳病病毒在康復豬體內可以長期存在，最長可達175 d；部分豬藍耳病弱毒苗免疫后同樣可以維持較長時間的病毒血癥。因此單純把病豬樣品中檢測到豬藍耳病抗原作為診斷依據，往往就會出現誤診！

根據實驗室攻毒試驗結果顯示，豬藍耳病發病豬都會出現肺彌漫性實變的病理變化；所以我們認為要確診豬群是否正在發生豬藍耳病，不能簡單地根據抗原檢測結果就作出診斷、必須要結合典型的臨床癥狀和病理變化（肺出現彌漫性實變），三者同時具備才能確診。目前有關豬藍耳病防控上出現的困惑和爭議都是由于診斷上存在的誤區造成的！

2017-04-29）