血漿miR-222的表達水平與肺癌的相關性

王宏陽 葉曉明

(浙江大學研究生院，浙江 杭州 310000)

血漿miR-222的表達水平與肺癌的相關性

王宏陽 葉曉明1

(浙江大學研究生院，浙江 杭州 310000)

目的探討血漿微小RNA(miR)-222與肺癌的相關性。方法選取肺癌患者273例及正常對照201例，抽取晨間空腹抗凝血，并提取血漿總RNA。采用TaqMan探針實時熒光定量PCR法檢測各組血漿中miR-222的表達強度。結果肺癌患者血漿miR-222表達水平顯著高于正常對照組(P<0.05)。在肺癌患者血漿中，Ⅳ期患者miR-222水平高于Ⅰ期、Ⅱ期及Ⅲ期患者(P<0.05)。結論miR-222在肺癌患者血漿中表達升高，很可能作為一種新的肺癌標志物用于臨床。

微小RNA(miR)222；肺癌；血漿；標志物

肺癌起病隱匿，早期癥狀不明顯，不易被發現，導致患者就診時往往多已發生轉移，失去手術切除機會。然而，由于目前肺癌的早期分子標志物對肺癌的篩查效果并不理想。因此，發現并探索新的血漿肺癌標志物，并在人群中進行篩查，對于提高肺癌早期的檢出率和診斷率有重要意義。微小RNA(miR)是細胞內的小分子非編碼RNA，它可以通過與其靶基因的3′UTR結合并抑制其表達。miR分子量小，在疾病的發生、發展過程中可透過細胞膜進入血液循環系統，并在一定時間內穩定存在，因此循環血miR很可能是一種新的腫瘤早期標志物應用于臨床。miR-222在體內多種組織中廣泛存在。目前認為，該miR在包括肺癌在內的多種腫瘤細胞中表達上調〔1～4〕。因此提示，該miR與腫瘤高度相關，并可能在肺癌的發生及發展過程中起到關鍵性的調控作用。本研究探討miR-222與肺癌的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料 2012年4月至2015年2月于臨海市第一人民醫院呼吸內科住院、經病理組織學確診為肺癌的患者273例為肺癌組，男181例，女92例，平均(59.4±7.5)歲。按照國際肺癌分期標準〔5〕，Ⅰ期41例，Ⅱ期53例，Ⅲ期112例，Ⅳ期67例。經病理學分型鱗癌138例，腺癌75例，小細胞癌41例，大細胞癌5例，低分化癌14例。正常對照組201例，隨機取自本院體檢中心，經體檢排除內外科疾病的健康人，男121例，女80例，平均年齡(51.8±5.4)歲。

1.2樣品采集與保存 患者在收入院后，在未進行任何治療前抽取清晨空腹外周靜脈血4 ml，并收集于乙二胺四乙酸(EDTA)-K2抗凝管中之后，立即以1 000 r/min離心10 min。轉移上層血漿，并分裝于1.5 ml環氧樹脂(EP)管中，立即存于-80℃冰箱保存備用。

1.3血漿miR提取及保存 將血漿從冰箱取出，在冰上自然解凍。采用mirVana血漿miR提取試劑盒(Life technologies公司)，按照制造商使用說明加入線蟲Cel-miR-39內參，并提取血漿總RNA。用分光光度計檢測RNA濃度及提取質量，合格后的標本立即儲存于-80℃冰箱保存備用。

1.4血漿miR-222檢測 將各RNA樣品取出，并用焦碳酸二乙酸(DEPC)水稀釋至等濃度，采用ABI公司miR逆轉錄試劑盒按使用說明分別逆轉錄各樣品中miR-222和內參Cel-miR-39。采用TaqMan探針實時熒光定量PCR法檢測各樣品中miR-222及Cel-miR-39的Ct值，每個樣品設置2個平行孔，并以miR-222與Cel-miR-39的相對Ct值表示miR-222在各樣品中的相對表達強度。將正常對照組miR-222的相對表達強度設定為1.00，各組相對于正常對照組血漿miR-222的表達變化。

1.5統計學方法 采用SPSS23.0統計軟件進行秩和檢驗。

2 結 果

正常對照組血清miR-222表達強度為1.00(0.44,1.56)，而肺癌組血漿miR-222表達強度〔2.49(1.27,3.76)〕明顯增高(P<0.01)。Ⅳ期肺癌患者血漿miR-222表達水平〔3.16(2.14，4.80)〕較Ⅰ期〔1.38(0.91，2.97)、Ⅱ期1.84(0.80，2.73)及Ⅲ期〔2.70(1.44，4.05)〕患者明顯增高(P<0.01)。

3 討 論

迄今為止，已在人類細胞中發現數百種miR參與調控體內生理及病理過程。miR分子小，性質較為穩定，較多數胞內蛋白更容易釋放入血，因此血漿miR水平的改變很可能是某些疾病早期的重要變化。然而，由于檢測技術及理論尚不成熟，目前尚無作為疾病標志物的miR在臨床上應用。本研究顯示肺癌組血漿miR-222水平較正常對照組表達強度升高，由此提示miR-222很可能是一種新的肺癌標志物。

miR-222高表達于肺癌細胞內，且與患者預后呈正相關〔4〕。在肺癌中，miR-222的高表達與高速泳動族蛋白A1有關〔6〕。因此，過表達的miR-222很可能從快速增殖的肺癌細胞中釋放入血。本研究中血漿miR-222的表達水平在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者中并無明顯變化。因此表明，血漿miR-222表達水平與臨床分期并不平行，尚不能認為血漿miR-222可作為肺癌臨床分期的輔助性依據。但是Ⅳ期患者血漿miR-222表達水平顯著高于Ⅰ期及Ⅱ期患者，可能與晚期患者腫瘤組織發生壞死，細胞內容物大量釋放有關。

miR-222同時又是一種癌基因，可靶向抑制多種腫瘤抑制蛋白，如p27、蛋白酪氨酸磷酸酶基因(PTEN)、金屬蛋白酶抑制因子(TIMP)3等〔7～9〕。miR-222可通過抑制上述腫瘤抑制蛋白促進腫瘤增殖、遷移及侵襲等，加速腫瘤的惡化。因此，在治療的同時采用相應技術干擾miR-222的表達，即可延緩甚至阻斷腫瘤的增殖、遷移及侵襲，從而達到延長患者壽命、提高生存質量的目的。因此，miR-222除可作為肺癌的標志物外，還可能是肺癌個體化治療的潛在靶點。

1Galardi S,Mercatelli N,Giorda E,etal.miR-221 and miR-222 expression affects the proliferation potential of human prostate carcinoma cell lines by targeting p27Kip1〔J〕.J Biol Chem,2007;282(32):23716-24.

2Chen WX,Hu Q,Qiu MT,etal.miR-221/222:promising biomarkers for breast cancer〔J〕.Tumour Biol,2013;34(3):1361-70.

3Wong QW,Ching AK,Chan AW,etal.MiR-222 overexpression confers cell migratory advantages in hepatocellular carcinoma through enhancing AKT signaling〔J〕.Clin Cancer Res,2010;16(3):867-75.

4Mao KP,Zhang WN,Liang XM,etal.MicroRNA-222 expression and its prognostic potential in non-small cell lung cancer〔J〕.Sci World J,2014;2014：908326.

5葉 波，楊龍海，劉向陽.最新國際肺癌TNM分期標準(第7版)修訂稿解讀〔J〕.中國醫刊，2008;43(1):21-3.

6Zhang Y,Ma T,Yang S,etal.High-mobility group A1 proteins enhance the expression of the oncogenic miR-222 in lung cancer cells〔J〕.Mole Cell Biochem,2011;357(1-2):363-71.

7Yang YF,Wang F,Xiao JJ,etal.MiR-222 overexpression promotes proliferation of human hepatocellular carcinoma HepG2 cells by downregulating p27〔J〕.Int J Clin Exp Med,2014;7(4):893-902.

8Zhou S,Shen D,Wang Y,etal.microRNA-222 targeting PTEN promotes neurite outgrowth from adult dorsal root ganglion neurons following sciatic nerve transection〔J〕.PLoS One,2012;7(9):e44768.

9Lu Y,Roy S,Nuovo G,etal.Anti-microRNA-222(anti-miR-222)and-181B suppress growth of tamoxifen-resistant xenografts in mouse by targeting TIMP3 protein and modulating mitogenic signal〔J〕.J Biol Chem,2011;286(49):42292-302.

〔2016-06-08修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢園)

王宏陽(1984-)，男，在職碩士，主治醫師，主要從事呼吸系統疾病研究。

R734.2

A

1005-9202(2017)17-4312-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.17.068

1 臨海市第一人民醫院呼吸科