瘦肉精酶聯免疫試劑盒的質量評價與使用

文│匡德春（遼寧省調兵山市畜產品安全檢測站）

瘦肉精酶聯免疫試劑盒的質量評價與使用

文│匡德春（遼寧省調兵山市畜產品安全檢測站）

目前，動物源性食品中瘦肉精的確證檢測主要有液相色譜串聯質譜法和氣相色譜質譜聯用法，由于儀器及耗材昂貴，樣品提取凈化復雜，對檢測人員的素質要求較高等原因，確證檢測法無法在縣區級畜產品檢測機構的日常監管和大規模篩查工作中使用。而酶聯免疫試劑盒可以經濟、快速地實現瘦肉精的篩查工作，在基層單位得以大量使用。

瘦肉精檢測中酶聯免疫試劑盒的質量評價方法和使用注意事項在實際工作中尤為重要，本文就此進行簡述，供廣大瘦肉精檢測工作者參考與借鑒。

一、質量評價方法

評價瘦肉精酶聯免疫試劑盒質量的關鍵指標有標準曲線、檢出限和定量限、準確度和精密度、假陽性率和假陰性率、交叉反應。

1.標準曲線。標準曲線主要確定工作濃度范圍和IC50范圍。評價定量酶聯免疫試劑盒的標準曲線時，按照試劑盒提供的標準曲線濃度（一般不少于5個）進行測試，每個濃度點測量5次，然后擬合標準曲線，并得出50%抑制濃度（IC50）值。IC50是衡量抗體及試劑盒靈敏度的指標，IC50越低說明抗體和試劑盒的靈敏度越高，測定的IC50應低于或等于試劑盒給出的值。

2.檢出限和定量限。評價酶聯免疫試劑盒的檢出限時，應測定20份空白樣品的均值，均值加上3倍標準差所得的結果應低于試劑盒給出的檢出限。

評價酶聯免疫試劑盒的定量限時，按照說明書提供的定量限濃度配制6份樣品進行測定驗證，定量限的準確度應滿足試劑盒的要求。

3.精密度和準確度。評價瘦肉精酶聯免疫試劑盒時，應隨機選擇3個批次的試劑盒，在3個日期進行測試評價。評價時應分別配制定量限、2倍定量限、5被定量限3個濃度的樣品，每個濃度配制5個平行樣，按試劑盒說明書進行測試，計算精密度和準確度，所得結果應符合試劑盒說明書的要求。

4.假陽性率和假陰性率。對于定性的酶聯免疫試劑盒應評價其假陽性率和假陰性率。配制添加檢出限濃度的50份樣品進行測試，確定假陰性率。制備50份空白樣品進行測試，確定假陽性率。一般來說假陽性率可以控制在5%范圍內，不得有假陰性存在。

5.交叉反應。根據酶聯免疫試劑盒提供的信息，測定試劑盒與待測物、待測物類似物、待測物代謝物等物質的交叉反應率，應滿足試劑盒提供的要求。

二、使用注意事項

影響瘦肉精酶聯免疫試劑盒檢測結果的因素一般有試劑盒選擇、檢測人員能力、設備狀態、環境影響等。

1.試劑盒選擇。選擇試劑盒時，應考慮擬選試劑盒的檢測藥物類型是否滿足監督篩查的需求，樣品前處理方法是否經濟、快速、便于現場操作，是否需要增加新的儀器設備，試劑盒的檢出限是否滿足監督篩查計劃的要求。

2.檢測人員能力。檢測人員能力是影響瘦肉精酶聯免疫試劑盒檢測結果的主要因素，具體體現在：試劑配制的準確性和規范性，不得使用自來水配制試劑；樣品提取、點樣、洗板、孵育、顯色等操作的熟練程度；酶標儀操作的熟練程度；移液器使用的規范程度等。

3.設備狀態。酶標儀、移液器等涉及量值溯源的設備應定期檢定/校準，加貼狀態標識。需要現場檢測時，酶標儀等設備搬運后使用前應進行核查，確保其滿足檢測的需要。

4.環境影響。環境是影響瘦肉精酶聯免疫試劑盒質量及檢測結果準確性的關鍵因素之一。

（1）試劑盒應按要求貯存，一般貯存溫度為2～8℃。

（2）標準溶液、顯色液對光敏感，實際操作中應避免直接暴露在光線下。

（3）使用前所有試劑應平衡至室溫，使用后應迅速將其放回2～8℃。

（4）孵育、顯色時應恒溫、避光。

5.其他注意事項。不用手或其他物品接觸酶標板底部；終止液具有腐蝕性，避免接觸皮膚。

三、小結

盡管酶聯免疫試劑盒法檢測瘦肉精簡便快捷，但影響檢測結果準確性的因素較多。除需規范的評價試劑盒本身質量外，在實際操作中應嚴格按試劑盒說明書規范操作，同時做好質控工作，減少或避免影響因素的干擾，確保檢測數據和結果的準確性，為畜產品質量安全監管提供精準的數據支持。