豬瘟診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展

許光勇王朝軍周海深徐利

（1北京養(yǎng)豬育種中心，北京100194；2中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京100193）

豬瘟診斷技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展

許光勇1,2王朝軍1周海深1徐利1

（1北京養(yǎng)豬育種中心，北京100194；2中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京100193）

豬瘟是一種急性、熱性和高度接觸性傳染病。該病沒(méi)有區(qū)域性，呈世界性分布，給全球養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。目前豬群感染豬瘟病毒無(wú)有效治療措施，完全依靠疫苗接種和加強(qiáng)生物安全體系管理進(jìn)行預(yù)防。雖然中國(guó)C株對(duì)豬瘟的消滅和防控起到了重要作用，但近年來(lái)豬瘟卻表現(xiàn)出復(fù)發(fā)趨勢(shì)，呈現(xiàn)非典型癥狀或隱性感染狀態(tài)，故在沒(méi)有出現(xiàn)典型癥狀的情況下，如何快速、精準(zhǔn)地做出診斷顯得極為重要。文中就數(shù)十年來(lái)國(guó)內(nèi)外所開(kāi)發(fā)或使用過(guò)的豬瘟診斷技術(shù)作一綜述。

豬瘟；診斷技術(shù)；進(jìn)展；應(yīng)用

豬瘟（Classical Sw ine Fever,CSF）是由黃病毒科瘟病毒屬中的豬瘟病毒（Classical Sw ine Fever virus, CSFV）引起豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，俗稱(chēng)“爛腸瘟”。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）在《國(guó)際動(dòng)物衛(wèi)生法典》中將其列為必須報(bào)告和重要檢疫對(duì)象的A類(lèi)動(dòng)物疫病，我國(guó)農(nóng)業(yè)部將其列為一類(lèi)動(dòng)物疫病[1,2]。豬瘟病毒可感染各個(gè)階段豬群，分別可導(dǎo)致母豬群出現(xiàn)流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和木乃伊胎及弱仔比例升高，公豬群呈現(xiàn)精液帶毒，產(chǎn)房哺乳仔豬出現(xiàn)腹瀉、發(fā)病死亡率升高，以及中大豬群出現(xiàn)以發(fā)熱、全身如針尖點(diǎn)狀出血、腸管糜爛或脾梗死等癥狀為主要特征[3]的發(fā)病。豬瘟對(duì)全球養(yǎng)豬業(yè)來(lái)講可謂是毀滅性打擊。當(dāng)前，感染豬瘟病毒后治療基本無(wú)效，對(duì)豬瘟防控主要是采取預(yù)防措施，即疫苗免疫配合生物安全的綜合管理措施。目前大部分使用的豬瘟活疫苗為豬瘟兔化弱毒株（C株）疫苗，經(jīng)細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)后制成細(xì)胞苗接種使用，也有部分是將毒株接種動(dòng)物采集組織制成脾淋苗后使用，以及其他一些核酸疫苗、基因缺失疫苗及DNA疫苗等[4]。鄭慶端等于2005年報(bào)道，在接種C株豬瘟活疫苗4天后即可部分產(chǎn)生免疫力。在養(yǎng)豬實(shí)際生產(chǎn)中，接種豬瘟活疫苗2～3周后，約80%的豬群能夠產(chǎn)生有效保護(hù)抗體。近年來(lái)在中國(guó)，豬瘟雖不呈現(xiàn)暴發(fā)形勢(shì)，但仍有零散發(fā)生，呈現(xiàn)溫和感染狀態(tài)，對(duì)豬場(chǎng)尤其是種豬場(chǎng)造成隱性危害。在歐洲、南美洲等地區(qū)呈現(xiàn)復(fù)發(fā)趨勢(shì)，且一些宣布已經(jīng)消滅豬瘟的國(guó)家再次出現(xiàn)豬瘟復(fù)發(fā)的報(bào)道[4]。因此，對(duì)豬瘟病毒是否感染及豬瘟病毒的診斷工作應(yīng)做出更高、更精準(zhǔn)的要求和標(biāo)準(zhǔn)，故多種豬瘟診斷方法孕育而生。

豬瘟自1833年在美國(guó)俄亥俄州發(fā)現(xiàn)以來(lái)，在全球范圍內(nèi)流行傳播[5]。但隨著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，豬瘟診斷技術(shù)越來(lái)越多，重復(fù)性和可靠性也越來(lái)越高，由數(shù)十年前的流行病學(xué)調(diào)查統(tǒng)計(jì)、臨床表現(xiàn)和病理解剖變化的主觀判斷，到如今常用的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法、免疫熒光試驗(yàn)、實(shí)時(shí)定量PCR或基因芯片檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)，無(wú)疑對(duì)豬瘟病毒感染確診起到促進(jìn)作用。

1 豬瘟病原與流行特征

豬瘟病毒是單股正鏈RNA病毒，病毒粒子直徑約40～50 nm，呈球形，核衣殼為二十面體對(duì)稱(chēng)，基因組全長(zhǎng)12.3 kb，有一個(gè)大的開(kāi)放閱讀框并能編碼含3 898個(gè)氨基酸的多聚蛋白，該蛋白在宿主細(xì)胞和病毒自身蛋白酶作用下，產(chǎn)生4個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白（C、Erns、E1和E2）和8個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白（Np ro、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B），而E2蛋白即能誘導(dǎo)產(chǎn)生豬瘟保護(hù)性抗體[4,6]。

在我國(guó)，首次發(fā)現(xiàn)豬瘟的時(shí)間是1925年。1954年，我國(guó)老一輩科學(xué)家成功研制出豬瘟兔化弱毒疫苗，該毒株一直延續(xù)使用至今并取得良好的免疫效果，世界上其他一些國(guó)家借助于該毒株疫苗成功完成豬瘟凈化與根除工作，而中國(guó)于1956年就提出消滅豬瘟計(jì)劃，至今已60年時(shí)間，豬瘟仍存在于全國(guó)范圍內(nèi)的養(yǎng)殖場(chǎng)，故我們還有很長(zhǎng)一段路要走，尤其是把精準(zhǔn)確診作為前提[7]。

豬瘟一年四季均可發(fā)生，對(duì)各個(gè)階段、品種、性別的豬群均易感，無(wú)地方流行性，一般可通過(guò)水平和垂直傳播，也可以通過(guò)蚊蟲(chóng)等媒介傳播，豬瘟病毒對(duì)堿性消毒藥如苛性鈉或生石灰等敏感。隨著時(shí)間推移，豬瘟病毒為適應(yīng)環(huán)境生存而不斷發(fā)生新的變化，故其所表現(xiàn)的臨床反應(yīng)也越來(lái)越復(fù)雜。

2 臨床癥狀

豬感染豬瘟病毒后，其潛伏期一般為5～7天，根據(jù)養(yǎng)殖環(huán)境差異、區(qū)域性病毒流行性、豬群健康度以及綜合管理水平等條件不同，其表現(xiàn)出的病程長(zhǎng)短不一，臨床癥狀會(huì)有所差異，通常可將其分為最急性型、急性型、亞急性型、慢性型、溫和型和繁殖障礙型[8]。受到豬瘟病毒感染，可能會(huì)出現(xiàn)體溫升高呈稽留熱、全身性出血（點(diǎn)）或妊娠母豬流產(chǎn)及所產(chǎn)死胎、木乃伊胎和弱仔數(shù)量增加等臨床表現(xiàn)。

突然發(fā)病并迅速死亡的多為最急性型豬瘟。急性型豬瘟通常可見(jiàn)體溫升高至41～42℃、食欲不振、扎堆嗜睡、結(jié)膜炎、皮膚黏膜廣泛充血出血。亞急性型與急性型豬瘟癥狀非常相似，但其病程稍長(zhǎng)，通常在一些老疫情區(qū)或管理不到位的豬場(chǎng)發(fā)生。慢性型豬瘟主要表現(xiàn)為被毛粗亂、精神萎靡、漸進(jìn)性消瘦、體溫忽高忽低、便秘與腹瀉交替，病程可持續(xù)三個(gè)月以上，死亡率在10%～30%之間。溫和型豬瘟是目前最流行的一種，感染后可能不出現(xiàn)任何臨床癥狀，但豬群尤其是種豬群長(zhǎng)期帶毒和排毒，通過(guò)水平和垂直傳播方式導(dǎo)致豬瘟病毒在本場(chǎng)內(nèi)循環(huán)感染。繁殖障礙型豬瘟往往呈現(xiàn)出混合感染情況，例如與圓環(huán)病毒、藍(lán)耳病病毒等共同存在，導(dǎo)致母豬流產(chǎn)或早產(chǎn)、產(chǎn)死胎木乃伊胎和弱仔數(shù)量增加。無(wú)論是何種類(lèi)型豬瘟，若通過(guò)臨床癥狀表現(xiàn)來(lái)進(jìn)行判斷，應(yīng)該眼觀看到高燒稽留和出血性素質(zhì)，二者往往缺一不可。

3 病理解剖變化

根據(jù)豬瘟病毒毒力強(qiáng)弱和機(jī)體自身免疫狀態(tài)，感染豬瘟病毒后其表現(xiàn)的病理變化各不相同。最急性型偶爾在黏膜漿膜、腎臟、心臟包膜或外膜以及膀胱黏膜表面見(jiàn)到少量細(xì)小的點(diǎn)狀出血，淋巴結(jié)輕微腫脹。病理變化最明顯的應(yīng)該是急性型，具有典型的敗血癥變化，可見(jiàn)皮膚全身性出血，全身淋巴結(jié)腫脹、深紅色、切開(kāi)呈紅白相間的大理石樣外觀，脾臟邊緣出現(xiàn)出血性梗死，腎臟實(shí)質(zhì)性變性，經(jīng)常出現(xiàn)麻雀腎，切開(kāi)腎臟可見(jiàn)髓質(zhì)和皮質(zhì)均有點(diǎn)狀或線狀出血，消化道有出血點(diǎn)或出血斑，嚴(yán)重者可見(jiàn)形成潰瘍?cè)睿闻K變性質(zhì)脆，呼吸系統(tǒng)和心血管均可見(jiàn)出血斑點(diǎn)[9]。其他類(lèi)型豬瘟無(wú)特別典型病理變化，需結(jié)合其他信息或?qū)嶒?yàn)室檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行判斷。

4 實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)

豬瘟診斷技術(shù)較多，既可以鑒定病原又可以檢測(cè)抗體，方法包括實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)的免疫熒光試驗(yàn)（FAT）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（AGP）和間接血凝試驗(yàn)（IHA）等方法，分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)包括反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）、巢式PCR、多重引物PCR、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（RT-LAMP）等，另外還有一些基因芯片檢測(cè)技術(shù)和核酸探針技術(shù)用于豬瘟病毒診斷工作[6,10]。

4.1 常規(guī)診斷技術(shù)

4.1.1 免疫熒光試驗(yàn)

免疫熒光試驗(yàn)（FAT）是檢測(cè)豬瘟的常用方法，其原理是將抗豬瘟病毒抗體IgG提純并標(biāo)記熒光物，做成熒光試劑并用于扁桃體或淋巴結(jié)等病料的觸片或冰凍切片進(jìn)行著色或染色，然后借助于熒光顯微鏡觀察，在顯微鏡下若能看到綠色熒光，表明豬瘟病毒抗體染色為陽(yáng)性結(jié)果。FAT可有效提高早期感染豬瘟病毒檢出率，對(duì)強(qiáng)毒株和弱毒株均有較高的準(zhǔn)確性，且使用范圍廣，在某些大型規(guī)模化豬場(chǎng)比較適用，對(duì)于豬瘟防控起到極其重要的意義。FAT與其他方法相比，具備診斷所需時(shí)間短、檢出率高、準(zhǔn)確性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)[11]。

FAT包括組織直接免疫熒光試驗(yàn)、細(xì)胞培養(yǎng)直接免疫熒光試驗(yàn)和間接免疫熒光試驗(yàn)。組織直接FAT主要是利用所采集的組織或臟器，用石蠟包埋或冰凍切片進(jìn)行固定，再用豬瘟特異性熒光抗體進(jìn)行染色并在熒光顯微鏡下觀察，若出現(xiàn)亮綠色熒光即表明有豬瘟病毒存在。細(xì)胞培養(yǎng)直接FAT主要是將可疑病料勻漿制成上清液接種于PK-15細(xì)胞進(jìn)行增殖培養(yǎng)，加入酶標(biāo)抗體染色，然后肉眼觀察即可。間接FAT直接在可疑組織上滴加抗豬瘟陽(yáng)性血清（1∶4）作用30分鐘，洗滌后加入羊抗豬IgG熒光抗體作用30分鐘，漂洗干燥后于熒光顯微鏡下觀察結(jié)果[12]。何若鋼等2008年利用免疫熒光試驗(yàn)技術(shù)對(duì)廣西十幾個(gè)豬場(chǎng)進(jìn)行豬瘟調(diào)查，結(jié)果表明外表看似健康且無(wú)任何臨床癥狀的豬群豬瘟抗原陽(yáng)性率高達(dá)7.21%。自1965年Robertson報(bào)道以來(lái)，F(xiàn)AT是國(guó)內(nèi)外最常用的方法之一，該方法直觀、可靠，廣泛應(yīng)用于組織病料的豬瘟病毒檢測(cè)，適用于早期感染和無(wú)明顯臨床癥狀的帶毒豬排查。

4.1.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織推薦的血清抗體檢測(cè)方法，具有一定敏感性和特異性，可用于豬群抗體監(jiān)測(cè)和抗原檢測(cè)，目前也是規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)普遍采用的一種檢測(cè)技術(shù)。ELISA法是利用抗原抗體發(fā)生反應(yīng)的原理，包括間接ELISA、競(jìng)爭(zhēng)ELISA、抗原捕獲ELISA、Dot-ELISA和微波快速ELISA，各種方法均有優(yōu)缺點(diǎn)[8]。周宗安、楊曉梅和Leforban、丘惠深以及Hergarten等通過(guò)大量試驗(yàn)證明ELISA法的敏感性和特異性。由于具備高敏感性和特異性、試劑穩(wěn)定無(wú)放射性和可操作性強(qiáng)等特點(diǎn)，該方法成為很多豬場(chǎng)和實(shí)驗(yàn)室常用的血清學(xué)檢測(cè)方法。

4.1.3 間接血凝試驗(yàn)

間接血凝試驗(yàn)（IHA）的原理為將抗原或抗體包被于紅細(xì)胞表面作為載體，然后與相應(yīng)的抗體或抗原結(jié)合，發(fā)生紅細(xì)胞凝集反應(yīng)，其包括正向和反向IHA。正向IHA用于檢測(cè)血清中豬瘟抗體，反向IHA用于檢測(cè)組織病料中豬瘟抗原。

4.1.4 瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)

瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（AGP）是利用可溶性抗原與抗體在瓊脂凝膠內(nèi)擴(kuò)散形成白色沉淀的原理，包括單向和雙向AGP。該方法簡(jiǎn)單，但特異性和敏感性較差，通常不采用。

4.1.5 免疫膠體金技術(shù)

免疫膠體金技術(shù)具有靈敏度高和操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，發(fā)展和應(yīng)用前景十分廣闊。陳龍賓等在2007年建立了豬瘟膠體金免疫層析快速診斷方法。

4.2 分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，其在豬瘟檢測(cè)上的應(yīng)用越來(lái)越多。利用分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè)豬瘟病原主要是PCR，不同類(lèi)型PCR都是針對(duì)豬瘟病毒進(jìn)行診斷。RT-PCR利用特異性引物將豬瘟病毒核酸進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，經(jīng)PCR一系列反應(yīng)擴(kuò)增，然后將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳和染色，從而判定是否存在病毒感染。巢式PCR使用2對(duì)引物進(jìn)行擴(kuò)增即二次擴(kuò)增，然后進(jìn)行觀察判定。多重PCR是應(yīng)用多對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增，對(duì)引物設(shè)計(jì)要求較高。RT-LAMP是新建的一種恒溫核酸擴(kuò)增技術(shù)，針對(duì)靶基因6個(gè)區(qū)域設(shè)計(jì)4對(duì)特異引物，在等溫條件下完成擴(kuò)增反應(yīng)[13]。實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-Time PCR）和前面4種有所區(qū)別，前4種是從定性方面進(jìn)行判斷，而Real-Time PCR是從定量的角度進(jìn)行判斷。

不同類(lèi)型PCR優(yōu)缺點(diǎn)各異，現(xiàn)簡(jiǎn)單闡述如下：RT-PCR操作簡(jiǎn)單、靈敏度和特異性高、重復(fù)性好，對(duì)豬瘟病毒識(shí)別性很強(qiáng)，檢測(cè)范圍廣泛，在臨床診斷中發(fā)揮著重要作用。巢式PCR利用2對(duì)引物，其擴(kuò)增特異性和靈敏度得到進(jìn)一步提高。多重PCR是采用2對(duì)或更多引物擴(kuò)增，但對(duì)引物設(shè)計(jì)要求更高。環(huán)介導(dǎo)等溫核酸擴(kuò)增技術(shù)無(wú)需借助儀器即可觀察結(jié)果，為基層和現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)提供便利，故具有良好的推廣應(yīng)用前景[6,11]。Real-Time PCR能夠解決普通PCR假陽(yáng)性問(wèn)題，分析感染病毒數(shù)量，無(wú)需電泳操作，但由于該技術(shù)受到PCR等儀器要求較高、所用試劑成本較高等因素制約，故沒(méi)有在基層推廣開(kāi)[14]。曾小娜等2009年分別采用RT-PCR和RT-LAMP法對(duì)80份可疑樣品進(jìn)行豬瘟病率分別為36.25%和38.75%。Chen等2009年同樣用RT-PCR和RT-LAMP法對(duì)可疑樣本檢測(cè)豬瘟病毒，檢出陽(yáng)性率分別為78%和89%。RT-LAMP法的敏感性較普通RT-PCR高。Le等[15]通過(guò)4 710份樣品證實(shí)Real-Time PCR方法敏感、特異、快速和高通量。Das等[16]采用Real-Time PCR對(duì)早期感染豬瘟病毒的血液樣品檢測(cè)，具有極高的靈敏度。Hoffmann等[17]將建立的檢測(cè)豬瘟病毒的Real-Time PCR技術(shù)與商業(yè)化試劑盒比較，在臨床應(yīng)用中顯示出良好的靈敏性和特異性。

4.3 基因芯片檢測(cè)技術(shù)

生物芯片技術(shù)是根據(jù)分子間特異性相互作用的原理，將生命科學(xué)領(lǐng)域中不連續(xù)的分析過(guò)程集成于芯片表面的微型生物化學(xué)分析系統(tǒng)，對(duì)細(xì)胞、蛋白和基因等進(jìn)行快速準(zhǔn)確地檢測(cè)。若細(xì)分的話，可分為基因芯片、蛋白質(zhì)芯片、細(xì)胞芯片和組織芯片，其中基因芯片是近年來(lái)的研究熱點(diǎn)。楊林[18]2005年通過(guò)基因測(cè)序，對(duì)分離的豬瘟野毒毒株進(jìn)行鑒定，并對(duì)E2基因進(jìn)行序列分析，在與傳統(tǒng)的石門(mén)毒株和疫苗毒株比較后，發(fā)現(xiàn)分離到的豬瘟野毒與疫苗毒存在一定差異，且E2基因部分序列接近Alfort，但與Brescia同源性最低。雖然基因芯片檢測(cè)技術(shù)優(yōu)點(diǎn)較多，但處于探索階段，高成本等制約因素仍是該技術(shù)大面積推廣亟需解決的難題。

5 動(dòng)物回歸試驗(yàn)

動(dòng)物回歸試驗(yàn)是最經(jīng)典和可靠的方法。通常是采集有豬瘟典型病變的組織，經(jīng)過(guò)碾磨、破碎、離心等處理后提取病毒，一方面可進(jìn)行豬瘟病毒分離鑒定，另一方面可以將病毒感染健康（SPF）豬，然后觀察有無(wú)豬瘟臨床癥狀。該方法處理過(guò)程比較復(fù)雜，耗時(shí)較長(zhǎng)，且回歸本體動(dòng)物只能在小范圍內(nèi)試驗(yàn)，以避免病原傳播的風(fēng)險(xiǎn)，不利于疾病防控。

6 其他相關(guān)診斷技術(shù)

隨著科技不斷進(jìn)步，分子生物學(xué)技術(shù)占據(jù)了半壁江山，在豬瘟診斷技術(shù)方面還包含一些不常用方法，例如家兔交互免疫試驗(yàn)、金標(biāo)卡診斷技術(shù)、核酸探針技術(shù)等。這些診斷技術(shù)或是處于開(kāi)發(fā)探索階段，或是不適合科學(xué)技術(shù)進(jìn)步的步伐而被淘汰。

7 展望

我國(guó)雖是養(yǎng)豬大國(guó)，但不是養(yǎng)豬強(qiáng)國(guó)。隨著養(yǎng)豬業(yè)迅速發(fā)展，養(yǎng)豬技術(shù)也不斷得到提高，但豬病卻越來(lái)越多、越來(lái)越復(fù)雜。借助于中國(guó)C株豬瘟疫苗，歐美一些發(fā)達(dá)國(guó)家已經(jīng)將豬瘟徹底消滅。在中國(guó)，嚴(yán)重困擾養(yǎng)豬業(yè)的豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、偽狂犬病、口蹄疫和豬流行性腹瀉等仍將長(zhǎng)期存在，如何有效控制甚至消滅這些傳染病，是我們獸醫(yī)工作者今后的工作重點(diǎn)。目前在我國(guó)，豬瘟雖沒(méi)有大面積暴發(fā)，但在全國(guó)范圍內(nèi)仍呈零散溫和發(fā)生，且容易導(dǎo)致基層獸醫(yī)人員誤診，因此，準(zhǔn)確診斷是控制和凈化豬瘟的基礎(chǔ)工作和重要前提。目前，部分經(jīng)驗(yàn)豐富的豬場(chǎng)專(zhuān)職獸醫(yī)技術(shù)人員可通過(guò)豬場(chǎng)疾病背景、生產(chǎn)數(shù)據(jù)分析、流行動(dòng)態(tài)、臨床癥狀和病理變化等現(xiàn)場(chǎng)資料進(jìn)行初步診斷，如需確診還是要借助于實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)。豬瘟診斷最常用的實(shí)驗(yàn)室方法包括ELISA和RT-PCR法。美國(guó)IDEXX公司有商品化ELISA抗體和抗原檢測(cè)試劑盒，但ELISA法容易出現(xiàn)假陽(yáng)性，準(zhǔn)確性和特異性均有待提高；RT-PCR法準(zhǔn)確度高，但需要采集臟器等組織樣品，對(duì)于活體豬只來(lái)說(shuō)采集扁桃體操作困難，且對(duì)豬只應(yīng)激大。如何制定一種操作便捷、特異性強(qiáng)、靈敏度高、可重復(fù)性好、適合中國(guó)養(yǎng)豬業(yè)使用的診斷技術(shù)是我們不斷追求的目標(biāo)。

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S854.43；S858.28

A

1673-4645(2017)05-0060-05

2016-11-02

北京三元種業(yè)科技股份有限公司自立課題（SYZYZ20150005）

許光勇，男，江西金溪人，在讀博士研究生，獸醫(yī)師，國(guó)家執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師，主要從事規(guī)模化豬場(chǎng)生產(chǎn)管理與豬病防控研究，E-m ail：vetbbsc@163.com