生殖道沙眼衣原體感染相關的生物學標志評估

韋絢 秦秀妹 黃靜 于路妹 李志勤

廣西桂林醫學院第二附屬醫院 1)婦產科 2)檢驗科 桂林 541001

生殖道沙眼衣原體感染相關的生物學標志評估

韋絢1)秦秀妹1)黃靜1)于路妹2)李志勤1)

廣西桂林醫學院第二附屬醫院 1)婦產科 2)檢驗科 桂林 541001

目的 探討可以評估生殖道沙眼衣原體感染相關的生物學指標。方法 選取2014-08—2015-12間診斷為生殖道沙眼衣原體感染的32例育齡婦女為感染組。選取同期無感染的32例育齡婦女為未感染組。采用ELISA法對比2組HD-5、TNF-α、IL-8、IL-1α、IL-6的表達。同時利用脂多糖(LPS)刺激體外培養的正常宮頸上皮細胞，對比LPS刺激后細胞與正常細胞不同時間點的HD-5、TNF-α水平變化。結果 感染組HD-5、TNF-α、IL-8、IL-1α、IL-6表達均顯著高于未感染組。LPS刺激后細胞在感染1d、2d后的HD-5、TNF-α水平均顯著高于正常細胞，差異均有統計學意義(P<0.05)。結論 沙眼衣原體屬于生殖道感染的重要病菌，應注意檢查及預防。

生殖道；沙眼；衣原體；感染；宮頸上皮細胞

沙眼衣原體是常見的人類致病菌[1]，且致病范圍十分廣泛，除生殖道疾病外甚至還可導致呼吸道、眼結膜等疾病[2]。近年來，隨著醫療水平的不斷進步，沙眼衣原體與人類生殖道感染的關系備受關注。部分沙眼衣原體可從下生殖道上行進而感染上生殖道，最終導致患者不孕、不育[3-5]。現對可以評估生殖道沙眼衣原體感染相關的生物學指標進行探討，以更好為臨床診斷與治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014-08—2015-12間在我院診斷為生殖道沙眼衣原體感染的32例育齡婦女為感染組，年齡22～52歲，平均33.2歲。選取同期進行體檢的無生殖道感染的32例育齡婦女為未感染組，年齡23～53歲，平均33.3歲。2組患者的基本資料對比，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。1.2 研究方法 (1)患者均使用無菌生理鹽水對陰道進行灌洗，停留1 min后抽回液體，保存于-80℃低溫醫用冰箱中。采用ELISA試劑盒(尚柏公司生產)統一檢測2組HD-5、TNF-α、IL-8水平以及IL-1α、IL-6的表達。嚴格按照說明書進行操作。(2)LPS刺激：用組織塊培養法培養由良性病變切除子宮患者的遠離鱗柱交界部的宮頸上皮組織5 d左右，并統一選取第4代細胞，接種在35 mm培養皿中，置入100 ng/mL的LPS進行刺激。分別收集0d、1d、2d后細胞營養液并分離上清液，保存于-80℃低溫醫用冰箱中，采用ELISA方法測定HD-5、TNF-α水平變化。

1.3 觀察指標 對比2組HD-5、TNF-α、IL-8、IL-1α及IL-6表達。比較LPS刺激后細胞與正常細胞在不同時間段HD-5及TNF-α水平。

2 結果

2.1 2組HD-5、TNF-α、IL-8、IL-1α、IL-6水平對比 感染組HD-5、TNF-α、IL-8、IL-1α、IL-6水平均顯著高于未感染組，比較差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 2組HD-5、TNF-α、IL-8、IL-1α、IL-6指標對比(例，

注：與未感染組相比，*P<0.05

2.2 LPS刺激后的細胞與正常細胞在不同時間段HD-5水平對比 0 d時2組HD-5水平無明顯差異，而1 d后、2 d后LPS刺激后細胞的HD-5水平均顯著高于正常細胞，比較差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 LPS刺激后細胞與正常細胞在不同時間段HD-5水平對比

注：與正常細胞相比，*P<0.05

2.3 LPS刺激后細胞與正常細胞在不同時間段TNF-α水平對比 0 d時2組TNF-α水平無明顯差異，而1 d后、2 d后刺激后細胞的TNF-α水平均顯著高于正常細胞，比較差異有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 LPS刺激后細胞與正常細胞在不同時間段TNF-α水平對比

注：與正常細胞相比，*P<0.05

3 討論

沙眼衣原體是目前全球范圍內主要性傳播疾病之一[6]，可通過性傳播以及圍產期傳播，會導致患者出現宮頸炎、子宮內膜炎、盆腔感染性疾病、新生兒肺炎、異位妊娠等[7]。沙眼衣原體會異化其他感染病原傳播，其中沙眼衣原體在女性患者中感染時的靶細胞為宮頸上皮細胞。由此，宮頸上皮細胞在作為機械屏障的同時還具有限制病原侵入黏膜下的作用[8]，還能分泌防御素5(human defensin5，HD-5)等直接在病原中產生作用，同時分泌IL-8、TNF-α等細胞因子對患者免疫反應進行調節[9]。有報道表明[10]，患者在感染沙眼衣原體后出現的免疫應答反應具干擾病原、抑制感染繼續進展的作用。而反復以及慢性感染會導致出現炎癥相關的組織損害與疤痕形成。因此，對HD-5、TNF-α等細胞因子進行深入探討研究，可明確沙眼衣原體感染機制，為臨床治療提供參考依據。

本次觀察發現：感染組HD-5、TNF-α、IL-8水平以及IL-1α、IL-6含量均顯著高于未感染組。其中HD-5屬于人類防御素之一，是先天性免疫系統中的重要因子。其主要位于細胞漿內，當外界出現感染后會主動釋放，從而達到抑制細菌生長的功效。IL-8屬于具有化學趨化作用的炎性因子，可通過誘導白細胞在感染部位進行聚集而達到抗菌的功效。與此同時，IL-1α與IL-6可在病原體感染的早期增強黏附分子與趨化因子的表達。而TNF-α主要作用是可顯著減少L-色氨酸，而L-色氨酸屬于病原生長所必需物質，因此能有效抑制沙眼衣原體感染以及生長[11]。此外，本文顯示感染組經LPS刺激后細胞在感染1 d后、2 d后HD-5、TNF-α水平均顯著高于正常細胞。筆者認為，經LPS刺激后正常宮頸上皮細胞上清液中HD-5水平明顯增加，提示正常宮頸上皮細胞在遭受病原刺激后可持續分泌HD-5進行抗菌。TNF-α經LPS刺激后分泌量呈時間依賴性增加，表明宮頸上皮細胞在發生感染后可在免疫損傷方面發揮一定作用。另有研究表明[12]，沙眼衣原體感染由于血清型較多且易發生變異，因此易產生耐藥，且通常合并一種或幾種性傳播疾病，由于臨床大部分藥物效果有限，可將HD-5列為陰道局部給藥的備選之一。

[1] 陳曦，劉朝暉.生殖道沙眼衣原體感染的流行病學現狀[J].中國性科學，2016，25(1)：95-97.

[2] 肖秀美，高爽，楊旭，等.2998例男性患者解脲脲原體、淋病奈瑟菌和沙眼衣原體感染調查分析[J].中國男科學雜志,2016,30(1):21-24.

[3] 陳煜岊，楊嵐.沙眼衣原體感染分子流行病學進展[J].中國微生態學雜志，2015，27(12)：1 480-1 482.

[4] 張建霞，劉芳，成凌，等.深圳市羅湖區2010-2014年生殖道沙眼衣原體感染流行特征[J].中國熱帶醫學,2015,15(11):1 407-1 408.

[5] 梅韜.莫西沙星、阿奇霉素、米諾環素治療女性生殖道沙眼衣原體感染臨床療效動態觀察[J].中國婦幼保健,2015,30(18):3 019-3 021.

[6] 劉小琴，陳小平，景尉，等.生殖道支原體和沙眼衣原體感染與女性不孕關系的探討[J].中國初級衛生保健，2014，28(3)：68-70.

[7] 龍梅，田翠蕓，王松峰，等.不孕癥患者盆腔粘連程度與陰道分泌物及腹腔液中支原體和衣原體感染的關系[J].新疆醫科大學學報,2015,38(8):988-990.

[8] 趙建宏，胡娟，陳影培，等.398例女性泌尿生殖道衣原體支原體檢測及支原體耐藥性分析[J].安徽醫學,2014,35(3):356-357.

[9] 吳磊，楊陽，唐振華，等.改良免疫層析法檢測泌尿生殖道沙眼衣原體感染的評價[J].檢驗醫學,2014,29(12):1 226-1 229.

[10]王振輝，楊麗霞，張春霞，等.TLR2介導沙眼衣原體感染早期免疫應答的機制研究[J].標記免疫分析與臨床,2015,22(9):921-923.

[11]王振輝，常曉彤，郝敏，等.Toll樣受體2(TLR2)和TLR4在沙眼衣原體生殖道感染介導的免疫應答[J].細胞與分子免疫學雜志,2015,31(10):1 336-1 341.

[12]鄭熠，胡權.生殖道沙眼衣原體感染的分子流行病學研究進展[J].國際流行病學傳染病學雜志,2016,43(1):58-61.

(收稿 2016-06-15)

Evaluation of biological markers associated with Chlamydia pneumoniae infection in genital tract

WeiXuan,QinXiuzhu,HuangJing,YuLumei,LiZhiqin.

DepartmentofObstetricsandGynecology,theSecondAffiliatedHospitalofGuilinMedicalCollege，Guilin541001，China

Objective To explore the biological marker of Chlamydia infection in genital tract. Methods In our hospital diagnosed as genital Chlamydia trachomatis infection of childbearing age women in 32 cases from the August 2014 to December 2015, remembered as the infection group. The other non reproductive tract infections 32 cases of women of childbearing age remember as the uninfected group. Using ELISA method and compared between the two groups HD-5, TNF-α, IL-8 level and IL-1α, IL-6 content. At the same time, the lipopolysaccharide in vitro stimulation of normal cervical epithelium under the package, compared with the LPS stimulated cells and normal cells at different time points of HD-5, TNF-α.Results The levels of HD-5, TNF-α, IL-8,IL-6 and IL-1α were significantly higher in the infection group than those in the uninfected group, and the levels of the infection group were significantly higher. After LPS stimulation, the levels of HD-5, TNF-IL-6 and 1d in LPS group were significantly higher than those in the normal group after infection with 2d.Conclusion Chlamydia pneumoniae is an important pathogen of reproductive tract infection, and should be paid attention to and prevention.

Genital tract; Chlamydia; Infection; Cervical epithelial cells

廣西壯族自治區衛生廳科研課題(Z2014337)

R446.5

A

1077-8991(2017)01-0007-03