Gli—1 Smo和Cripto—1在肺癌組織中的表達(dá)和相關(guān)性研究

摘要：目的 探討Gli-1，Smo和Cripto-1在肺癌中表達(dá)及其相關(guān)性。方法 采用免疫組化方法測(cè)定40例肺癌標(biāo)本及癌旁組織中Gli-1，Smo和Cripto-1三種蛋白的表達(dá)并分析Gli-1，Smo和Cripto-1的關(guān)系。結(jié)果 免疫組化結(jié)果顯示：Gli-1，Smo和Cripto-1在肺癌組織中高表達(dá)，在癌旁組織中不表達(dá)或者低表達(dá)，（P<0.05）三者在肺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁組織（P<0.05）。而且肺癌組織中Cripto-1的表達(dá)與Gli-1和Smo的表達(dá)成正相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論 Sonic hedgehog信號(hào)通路異常激活和Cripto-1高表達(dá)在肺癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，二者可能共同參與了肺癌的發(fā)生。

關(guān)鍵詞：Gli-1；Smo；Cripto-1；肺癌

肺癌是常見的惡性腫瘤之一，肺癌一經(jīng)發(fā)現(xiàn)就處于疾病的中晚期，喪失了手術(shù)機(jī)會(huì)，由于化療耐藥，肺癌目前有效率尚不足40%[1]。近期研究表明Gli-1和Smo在肺癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用[2-3]，Cripto-1作為表皮生長(zhǎng)因子的成員之一，也參與了多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展甚至侵襲轉(zhuǎn)移[4-5]。本文采用免疫組化的方法檢測(cè)肺癌組織及癌旁組織中Gli-1，Smo和Cripto-1，探討三種蛋白在肺癌的表達(dá)及Gli-1，Smo和Cripto-1的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集大連市第五人民醫(yī)院2008～2014年手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)肺癌為手術(shù)石蠟包埋標(biāo)本40例，其中男性28例，女性12例；平均年齡（56.3±5.4）歲；同時(shí)癌旁組織作為對(duì)照組。

1.2方法

1.2.1材料 Gli-1，Smo和Cripto-1單抗購(gòu)自美國(guó)Epitomics公司；SP免疫組化試劑盒、磷酸鹽緩沖液、中性樹膠、DAB顯色試劑盒、蘇木素染液購(gòu)、枸櫞酸鈉抗原修復(fù)液均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2.2免疫組化檢測(cè)肺癌組織及癌旁組織中Gli-1，Smo和Cripto-1蛋白的表達(dá)所有標(biāo)本經(jīng)10%中性甲醛固定，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，0.01 mol/L枸櫞酸鈉緩沖液抗原熱修復(fù)，內(nèi)源性過(guò)氧化物酶37℃封閉20 min；加一抗，4℃孵育過(guò)夜；加二抗37℃孵育30 min；加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）37℃孵育20 min；DAB顯色，蘇木素復(fù)染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，光學(xué)顯微鏡下檢測(cè)并拍照[2]。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次以上，采用SPSS16.0軟件處理，計(jì)量資料采用χ2檢驗(yàn)，Cripto-1與Gli-1，Smo蛋白表達(dá)的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析，以P<0.05表示有顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 Cripto-1，Gli-1，Smo免疫組化檢測(cè)結(jié)果 Cripto-1，Gli-1，Smo免疫組化檢測(cè)結(jié)果在肺癌組織中高表達(dá)，在癌旁組織中低表達(dá)或者不表達(dá)。Cripto-1在肺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為75%，明顯高于已癌旁組織（12.5%），兩者比較有顯著性差異（P<0.05）；Gli-1在肺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為65%，而癌旁組織的陽(yáng)性表達(dá)率僅為10%，兩組間比較有顯著差異（P<0.05）；Smo在肺癌組織和癌旁組織中陽(yáng)性表達(dá)率分別為70%，22%，二者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。

2.2 Cripto-1與Gli-1，Smo蛋白表達(dá)的相關(guān)性 Spearman相關(guān)分析顯示術(shù)前化療肺癌組織中Cripto-1的表達(dá)與Gli-1表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.663，P<0.05），其表達(dá)與Smo表達(dá)亦呈正相關(guān)（r=0.655，P<0.05），見表1。

3 討論

Sonic hedgehog信號(hào)通路是人類胚胎發(fā)育過(guò)程中的重要信號(hào)通路，Gli-1和Smo作為該通路的關(guān)鍵因子參與了多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展，包括乳腺癌，胰腺癌，食道癌，大腸癌等[6-8]。本研究結(jié)果顯示：Gli-1和Smo在癌旁組織不表達(dá)或者弱表達(dá)，其在肺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁組織（P<0.05）。

諸多研究發(fā)現(xiàn)Cripto-1在結(jié)腸癌、乳腺癌、胃癌和胰腺癌等多種惡性腫瘤組織中高表達(dá)，而在正常組織中不表達(dá)或者低表達(dá)[9]。我們研究表明Cripto-1在癌旁組織不表達(dá)或者弱表達(dá)，其在肺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁組織（P<0.05）。提示Cripto-1也在肺癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。

此外我們的研究表明肺癌組織中Cripto-1的表達(dá)與Gli-1和Smo表達(dá)成正相關(guān)（P<0.05）。提示Sonic hedgehog信號(hào)通路和Cripto-1密切相關(guān)。

綜上，Sonic hedgehog信號(hào)通路異常激活和Cripto-1高表達(dá)在肺癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，二者可能共同參與了肺癌的發(fā)生，二者內(nèi)在關(guān)系有待于進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]姚曉軍，劉倫旭.肺癌的流行病學(xué)及治療現(xiàn)狀[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2014，22（8）：1982-1986.

[2]黃美歐，姚洪瑩，劉濤，等.Gli-1在肺癌患者的癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J].中國(guó)民康醫(yī)學(xué)，2015，27（9）：83-84.

[3]姚洪瑩黃美歐劉濤程謨朝.Smo在肺癌患者的癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J].中國(guó)民康醫(yī)學(xué)，2015，27（10）：70-71.

[4]Watanabe K，Meyer MJ，Strizzi L，et al.Cripto-1 is a cell surface marker for a tumorigenic，undifferentiated subpopulation in human embryona carcinoma cells[J].Stem Cells，2010，28（8）：1303-1314.

[5]De Castro NP，Rangel MC，Nagaoka T，et al.Cripto-1：an embryonic genethat promotes tumorigenesis[J].Future Oncol，2010，6（7）：1127-1142.

[6]孫波，張蕾，李穎霞，等.Smo和Gli1蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J].世界華人消化雜志，2011，19：483-487.

[7]劉山，張倬，陳天佑.Smo小干擾RNA對(duì)人食管癌CAES-17細(xì)胞凋亡的影響[J].世界華人消化雜志，2014，22：2671-2678.

[8]何艷，凌暉.Sonic hedgehog信號(hào)通路在胃癌中的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)研究雜志，2014，43：134-136.

[9]楊瑩，康靜波.Cripto-1與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[J].安徽醫(yī)藥，2013，17（10）：1648-1649.

編輯/翟辰萬(wàn)