乳腺癌組織中Maspin、uPA的表達及意義

裴新紅，王 芳，于 湛

(鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院，鄭州 450052)

2003年6月～2006年11月，我們采用免疫組化法檢測了新的絲氨酸蛋白酶抑制劑基因(Maspin)蛋白、尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)在人乳腺癌組織中的表達，旨在進一步探討乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展機制。

1 材料與方法

1.1 材料 選擇我院手術(shù)切除的乳腺癌組織標(biāo)本79份(乳腺癌組)，均為女性，年齡32～67(47.1±11.33)歲。均經(jīng)病理證實，且術(shù)前均未行放化療。其中浸潤性乳腺癌53例，非浸潤性乳腺癌26例。另選乳腺纖維腺瘤組織標(biāo)本31份(腺瘤組)、正常乳腺組織標(biāo)本34份(正常組)，三組一般資料無統(tǒng)計學(xué)差異。主要試劑:鼠抗人Maspin單克隆抗體(英國Neomarkers公司)，兔抗人uPA多克隆抗體(武漢博士德生物工程有限公司)。

1.2 Maspin、uPA表達檢測 采用免疫組化SP法，試驗步驟均按試劑盒說明書進行。結(jié)果判斷標(biāo)準:Maspin以胞質(zhì)和(或)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色細顆粒為陽性細胞，高倍鏡下隨機觀察10個視野約1000個細胞或低倍鏡下隨機觀察10個視野約4000個細胞，計數(shù)陽性細胞，＜25%為陰性(-)，25% ～50%為弱陽性(±)，51% ～75%為陽性(+)，＞75%為強陽性(++)［1］。uPA以細胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色細顆粒為陽性細胞，同上法觀察計數(shù)陽性細胞數(shù)，＜10%為陰性(-)，≥10%為陽性。對二者的相關(guān)性進行分析。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件，率的比較采用χ2檢驗，采用Spearman相關(guān)性分析法分析Maspin和uPA表達的相關(guān)性。檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 Maspin、uPA表達 乳腺癌組、腺瘤組、正常組Maspin蛋白的陽性表達率分別為30.4%、67.7%、97.1%，乳腺癌組、腺瘤組明顯低于正常組，乳腺癌組明顯低于腺瘤組(P均＜0.05);uPA陽性表達率分別為 64.5、32.2%、26.5%，乳腺癌組、腺瘤組明顯高于正常組，乳腺癌組明顯高于腺瘤組(P均＜0.05)。

2.2 相關(guān)性分析 乳腺癌組織中Maspin蛋白表達與 uPA 表達呈負相關(guān)(r=-0.776，P=0.000)。

3 討論

Maspin基因是1994年Zon等用減數(shù)雜交技術(shù)對正常乳腺組織和乳腺癌組織進行比較時發(fā)現(xiàn)的，證實其為新的絲氨酸蛋白酶抑制劑基因。文獻報道，Maspin在正常乳腺上皮細胞內(nèi)有表達，但在大多數(shù)乳腺腫瘤細胞系中不表達，提示Maspin基因與乳腺癌的發(fā)生有關(guān)［2］。Maspin主要定位于細胞質(zhì)，也可定位于細胞表面［3］。Shi等將Maspin基因表達上調(diào)的轉(zhuǎn)基因小鼠與WAP-SV40T抗原小鼠雜交，證實這種二次雜交小鼠腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移明顯降低。邵志敏等［4］發(fā)現(xiàn)，乳腺肌上皮細胞分泌大量的Maspin蛋白，去除 Maspin后的人類肌上皮 HMS-1CM不再具有抑制乳腺癌細胞體外浸潤的能力，提示Maspin蛋白在乳腺肌上皮細胞抑制乳腺癌細胞體外浸潤能力方面起重要作用。本研究結(jié)果顯示，乳腺癌組、腺瘤組明顯低于正常組，提示Maspin作為腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移潛能的抑制因子在乳腺癌中表達的缺失，可用于乳腺癌遠處轉(zhuǎn)移和患者預(yù)后不良的預(yù)測［5］。

人uPA基因位于第10號染色體上，長度為7258 bp，由11個外顯子和10個內(nèi)含子組成，成熟的mRNA 長度為 2.4 kb［6］。uPA 是一種似纖溶酶的絲氨酸蛋白水解酶，由腫瘤細胞或其他細胞分泌，主要作用于生理病理條件下的細胞遷移和組織修復(fù)。本研究乳腺癌組、腺瘤組明顯高于正常組，提示uPA在腫瘤增殖與腫瘤復(fù)制過程中具有指示意義，可用于腫瘤早期的診斷，在腫瘤的診治過程中具有重要的臨床意義。本研究還發(fā)現(xiàn)乳腺癌組織中Maspin蛋白表達與uPA表達呈負相關(guān)，提示Maspin在乳腺癌中具有抑制腫瘤的作用。

Maspin低表達和uPA高表達在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，檢測Maspin、uPA的表達水平可用于乳腺癌病情及預(yù)后的判斷。

［1］丁耘峰，馮一中，平金良.Maspin在乳腺癌組織中的表達及臨床病理意義［J］.蘇州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2007，27(3):396-398.

［2］Luppi M，Morselli M，Bandieri E，et al.Sensitive detection circulating breast cancer cells by reverse transcriptase polymerase chain reaction of maspin gene［J］.Ann Oncol，1996，7(6):619-624.

［3］Blacque OE，Worrall DM.Evidence for a direct interaction between the tumor suppressor serpin，maspin，and typesⅠ andⅢ collagen［J］.Biol Chem，2002，277(13):10783-10788.

［4］邵志敏，沈鎮(zhèn)宙.乳腺肌上皮細胞抑制乳腺癌細胞體外浸潤能力的研究［J］.中華醫(yī)學(xué)雜志，1999，79(3):214-216.

［5］Cher ML，Biliran HR Jr，Bhagat S，et al.Maspin expression inhibits osteolysis，tumor growth，and angiogenesis in a model of prostate caner bone metastasis［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2003，100(13):7847-7852.

［6］Andreasen PA，Kjoller L，Christensen L，et al.The urokinase-type plasminogen activator system in cancer metastasis［J］.Int J Cancer，1997，72(1):1-22.