正交試驗優選消斑祛瘀片的提取工藝

摘要：目的 優選消斑祛瘀片的提取工藝。方法 采用正交試驗對提取工藝進行優選，以丹酚酸B、阿魏酸、干膏量為指標考察加水量、提取次數、加水倍數對提取工藝的影響最終確定當歸、丹參、白鮮皮、地膚子、蒼耳子等最佳提取工藝。結果 最佳提取工藝為加10倍量水，提取90min，提取2次。結論 為提取工藝的確定和下一步的研制工作提供了科學依據。

關鍵詞：正交試驗；提取工藝；優選

Abstract：Objective Optimization study on extraction technology of xiaoban quyu tablets. Methods Using the orthogonal experiment， optimization study on extraction technology， Dan phenolic acids B， ferulic acid and dry paste volume as index to investigation water added， extraction times， adding water multiples of extraction technology and finally determined angelica， salvia miltiorrhiza， cortex dictamni， kochia scoparia， fructus xanthii etc best water extraction process. Results The best extraction process is add 10 times water quantity， extraction 90min， extraction 2 times. Conclusion Offer scientific basis for extraction process and the next research work.

Key words：Orthogonal test； Extraction process； Optimization

消斑祛瘀片由老中醫驗方演變而來， 傳統醫學認為皮膚色斑是因肝腎不足、肝郁化火、脾胃虛弱，氣血不能上榮于面，火燥精滯而成，治療多以疏肝解郁、補腎、活血、健脾益氣為主，本方從肝下手，五臟共調，臨床上療效確切。

1 試驗材料與儀器

1.1儀器 高效液相色譜儀；二極管陣列檢測器、柱溫箱，色譜工作站，分析天平。

1.2試藥 丹酚酸B（808-9301）對照品、阿魏酸（110773-201411）對照品。所用乙腈、甲醇為色譜純，水為自制純水，其他為分析純。

2 方法與結果

2.1提取工藝的正交試驗設計 當歸、丹參、白鮮皮、地膚子、蒼耳子等以水回流提取，采用正交試驗考察加水量（A）提取時間（B）和提取次數（C）。正交表見表1。

2.2丹酚酸B、阿魏酸的含量測定方法

2.2.1色譜條件及系統適用性試驗 色譜柱：Agilent ZORBAX SB-Aq（4.6mm×250mm，5μm）；加Agilent SB-Aq C18保護柱（1.0mm×20mm，5μm），流動相乙腈-甲醇-0.1%磷酸水梯度洗脫（洗脫程序見表2），檢測波長316nm，流速1ml/min，柱溫：35℃，進樣量：20μl，系統適應性試驗見圖1，保留時間阿魏酸為23min，丹酚酸B為36min。

圖1 A 混合對照品HPLC色譜圖 B 樣品HPLC色譜圖

2.2.2線性關系考察 分別精密的量取上述混合標準品溶液4、8、12、16、20、30μl注入高效液相色譜儀，照已確定的色譜條件進行測定，記錄色譜峰面積，繪制標準曲線，按照峰面積的積分值（Y）對進樣量（X）采用線性回歸，計算后回歸方程分別為丹酚酸B Y=1158593.4255X-64756.7089，r=0.9996，線性范圍0.90～6.72μg。阿魏酸Y=5253182.5779X-16651.9231，r=0.9998，線性范圍0.04～0.30μg。

2.2.3供試品溶液制備 藥材的稱取嚴格按處方的比例，共9份，同時按照表1中正交表的加水回流提取，濾過，合并濾液，備用。然后精密量取上述溶液適量并置水浴蒸干，轉移到10ml容量瓶，甲醇定容，0.45μm濾膜濾過，取續濾液，即得。

2.3方法學考察

2.3.1精密度試驗 取丹酚酸B、阿魏酸對照品溶液，按照各自液相方法重復進樣6次，20μl/次，測定峰面積，得出RSD分別為0.56%、1.25%，表明儀器精密度良好。

2.3.2穩定性試驗 供試品溶液分別于0、1、2、4、8h各進樣一次，20μl/次，測定峰面積，得出RSD分別為0.38%、0.45%，表明供試品溶液在8h內穩定。

2.3.3重復性試驗 供試品溶液6份，分別按照色譜條件進行測定， RSD分別為0.38%、0.45%，表明方法重復性良好。

2.3.4加樣回收試驗 已知含量的供試品溶液取3份，分別精密加入丹酚酸B和阿魏酸對照品溶液按“2.2.3”項方法制備供試品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件進行測定，計算的丹酚酸B平均回收率為100.1%，RSD為1.85%，阿魏酸平均回收率為98.5%，RSD為2.25%。

2.4干膏量的測定 精密吸取水提濃縮液50ml，用80%乙醇醇沉，取上清液置于已干燥至恒重的蒸發皿中，水浴蒸干，干燥恒重，稱定重量，計算干膏量。

2.5結果 正交試驗安排及結果見表3，結果分析見表4。

根據本方配伍規律，確定以上指標的優先順序為：丹酚酸B>阿魏酸>干膏量。首先指標性成分比干膏量重要的多，丹酚酸B為君藥成分，重要性大于臣藥，記5分，阿魏酸記3分，干膏量記2分，總分10分。

3驗證試驗

按處方量稱取藥材3份，按選定的最佳提取工藝提取，測定各指標成分含量，表5。

4 討論

從以上試驗結果來看，第8組綜合得分最高。近年來中藥復方提取的研究很多，關鍵是如何選擇優選指標，以及對所選指標的評價，選擇君臣藥為主要考察指標，又加入水提醇沉干膏量這一指標，兼備中藥復方成分多復雜的特點，更合理有效的反映提取效果，為今后科研提供了一定參考。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2010年版一部[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010：286.

[2]張啟偉，張穎.液相色譜法測定丹參中丹酚酸B[J].中國中藥雜志，2001，12：848-849.

[3]陳雯，杜守穎，陸洋.多指標正交試驗優選仙靈骨葆膠囊中丹參、補骨脂提取工藝[J].中國中藥雜志，2009，14：1792-1794.

[4]金汝城，李貴文，馬素麗，等.當歸中阿魏酸提取工藝的優化研究[J].中成藥，2008，4：516-519.

編輯/安樺