黃芪三七合劑改善慢性腎衰竭模型大鼠營養狀態的研究

王 麗，馬 欣，喻 琴，樊均明

黃芪三七合劑改善慢性腎衰竭模型大鼠營養狀態的研究

王 麗，馬 欣，喻 琴，樊均明

目的觀察黃芪三七合劑對慢性腎衰竭(chronic renal failure，CRF)大鼠營養狀況的影響。方法將雄性SD大鼠隨機分為正常組(normal group，NOR組)、模型組(CRF組)、黃芪三七合劑組(astragalus and radix notoginseng，A＆R組)、纈沙坦組(valsartan group，Val組)4組。CRF組、A＆R組及Val組采用腺嘌呤灌胃方法建立大鼠CRF模型；建模后予以A＆R組黃芪三七合劑(3 mL/d)灌胃，Val組予以纈沙坦[20 mg/(kg·d)]灌胃，NOR組和CRF組予以同等體積生理鹽水灌胃，均連續4周。治療4周后檢測大鼠一般情況及攝食量、體質量、白蛋白、血紅蛋白、三酰甘油、總膽固醇、腎功能指標的變化。結果與CRF組比較，A＆R組攝食量與體質量顯著增加，白蛋白、血紅蛋白顯著升高(P＜0.05)，肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白顯著下降(P＜0.05)。結論黃芪三七合劑可明顯改善腺嘌呤致慢性腎衰竭模型大鼠的營養狀況。

黃芪三七合劑；慢性腎衰竭；營養不良

慢性腎衰竭(chronic renal failure，CRF)是嚴重危害人類健康的常見多發疾病，營養不良往往伴發于腎臟衰竭的過程中。目前CRF所致營養不良越來越受關注。營養不良的主要發病機制目前尚不完全清楚，但主要與攝入不足、蛋白丟失、合成降低等有關[1]，尋找有效的治療營養藥物尤為重要。中醫藥在CRF營養不良治療中具有明顯優勢。黃芪三七合劑是在中醫理論指導下制成的復方制劑，由黃芪、三七、牡蠣等藥物組成。多年來，采用黃芪三七合劑治療慢性腎臟病獲得良好療效[2-3]。艾娜等[4]在一項臨床研究中發現，黃芪三七復方結合西醫基礎治療能明顯提高慢性腎臟病(chronic kidney disease，CKD)3期患者的總有效率，改善生活質量。本研究旨在通過腺嘌呤建立大鼠CRF模型，探索黃芪三七合劑對CRF大鼠營養狀況的影響，進一步為開拓該方的臨床應用提供基礎證據。

1 材料與方法

1.1 材料 健康雄性SD大鼠70只，體質量200～220 g，10～16周齡，購自西南醫科大學無特定病原體動物實驗中心[SYXK(川)2013-065]。黃芪三七合劑主要試劑由生黃芪50 g、三七10 g、懷牛膝30 g、昆布30 g、煅牡蠣20 g、當歸10 g、生大黃3 g組成。藥物采購和制備由西南醫科大學附屬中醫醫院中藥制劑室完成。方劑制備成濃縮劑備用，由藥劑室負責一次性制備完成。最終每毫升藥液含生藥2.5 g。

1.2 方法

1.2.1 動物分組、模型建立及處理 隨機選取10只大鼠為正常組(normal group，NOR組)，予以同等體積生理鹽水灌胃，連續4周。其余大鼠參照文獻[5-6]采用腺嘌呤(300 mg/kg)灌胃4周的方法建立大鼠CRF模型，符合CRF模型條件的大鼠再隨機分為3個治療組:①模型組(CRF組)，予以同等生理鹽水灌胃，連續4周；②黃芪三七合劑組(astragalus and radix notoginseng group，A＆R組)，予以黃芪三七合劑3 mL/d(在預實驗中，A＆R組分為高、中、低劑量組，但中劑量組的腎臟保護功能最明顯，故在正式實驗中僅選用了中劑量組作為中藥治療組)灌胃，連續4周；③纈沙坦組(valsartan group，Val組)，予以纈沙坦20 mg/(kg·d)灌胃，連續4周。在造模期的前3周中，所有大鼠給予同等量飼料，每日均放置25 g飼料于鼠籠凹槽。從造模第4周起至治療結束，此期間大鼠采用自由飲食。整個實驗過程均自由飲水。造模結束末(治療前)及治療后每2周稱體質量及攝食量；于治療第4周末，禁食24 h后代謝籠收集24 h尿液，并腹主動脈采血檢測血清肌酐(serum creatinine，Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)、白蛋白(albumin，Alb)、血紅蛋白(hemoglobin，Hb)、總膽固醇(total cholesterol，TC)、三酰甘油(triacylglycerol，TG)水平。

1.2.2 檢測指標

1.2.2.1 一般情況 觀察大鼠精神狀況、毛發情況、活動度、攝食量及體質量變化。體質量差＝治療后第4周體質量－治療前體質量。

1.2.2.2 腎功能指標測定 采血3 mL，離心后取上層血清，全自動血清自動生物化學儀(Beckman CX7，美國Beckman公司)檢測BUN、Scr。24 h尿蛋白由全自動尿液分析儀(Clinitek Atlas，德國Bayer公司)分析。

1.2.2.3 生化指標檢測 Alb采用溴甲酚綠比色法，Hb采用氰化高鐵血紅蛋白比色法，TC測定采用膽固醇氧化酶-過氧化物酶偶聯法，TG測定采用甘油磷酸氧化酶-過氧化物酶偶聯法。

1.3 統計學處理 應用SPSS 13.0軟件，計量資料用均數±標準差(± s)表示，組間比較采用t檢驗及單因素方差分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 一般情況 造模期間死亡9只大鼠，共有51只大鼠符合CRF模型條件，隨機分配至CRF組(17只)、A＆R組(17只)及Val組(17只)3個治療組。NOR組大鼠精神可，行動活躍，飲水、進食正常，皮毛有光澤，無腹瀉，體質量增長快。CRF組大鼠食欲減退，活動度降低，皮毛晦暗；后期部分大鼠出現脫毛，甚至腹瀉，死亡4只。A＆R組大鼠精神可，皮毛光澤度及食欲較模型大鼠好，且體質量有明顯增加，無死亡。Val組大鼠無死亡，精神可，食欲較模型組有增加。

2.2 治療前、后各組攝食量及體質量變化 與NOR組比較，各治療組攝食量及體質量明顯降低。在治療第2周及第4周時，A＆R組較CRF組攝食量及體質量明顯升高，差異有統計學意義(P＜0.05)；第4周的體質量差，A＆R組較CRF組顯著性增加(P＜0.05，表1)。

2.3 治療前、后各組腎功能 實驗至治療后第4周時Scr、BUN及24 h尿蛋白:各治療組均較NOR組明顯增加(F值分別為447.53、257.80、83.64，P＜0.01)；A＆R組與CRF組比較，各指標明顯減小，差異有統計學意義(F值分別為671.51、130.38、39.54，P＜0.05)；A＆R組在治療后，Scr、BUN及24 h蛋白均比治療前明顯降低，差異有統計學意義(t值分別為12.35、7.64、10.32，P＜0.05)。見表1。

2.4 治療前、后各組Alb和Hb 實驗至治療后第4周時Alb和Hb，各治療組均較NOR組出現明顯降低(F值分別為34.21、68.43，P＜0.01)；與CRF組比較，A＆R組水平顯著升高，差異有統計學意義(F值分別為38.32、234.56，P＜0.05)；A＆R組與治療前比較差異也有統計學意義(t值分別為－7.59、－13.54，P＜0.05)。見表1。

2.5 治療前、后各組大鼠TC和TG 治療4周后TC和TG水平，與CRF組比較，A＆R組顯著升高(F值分別為28.45、24.65，P＜0.01)；A＆R組與治療前比較差異也有統計學意義(t值分別為－0.79、－0.80，P＜0.05)。見表1。

表1 各組治療前、后攝食量、體質量、Scr、BUN、24 h尿蛋白、Alb、Hb、TC、TG變化(± s)

表1 各組治療前、后攝食量、體質量、Scr、BUN、24 h尿蛋白、Alb、Hb、TC、TG變化(± s)

注:與NOR組比較，＃P＜0.01；與CRF組比較，?P＜0.05；與治療前比較，△P＜0.05

組 別攝食量(g)治療前 第2周 第4周體質量(g)治療前 第2周 第4周NOR組(10只) 33.32±2.21 34.12±1.21 36.21±2.52 257.65±12.54 288.11±22.54 311.21±19.17 CRF組(13只) 25.54±2.76＃ 22.94±2.16＃ 23.64±1.94＃ 200.89±9.51＃ 213.16±15.92＃ 220.72±11.09＃A＆R組(17只) 25.97±1.27＃ 27.28±0.96＃? 30.21±1.39＃? 202.61±11.04＃ 228.71±14.75＃ 252.62±12.43＃?Val組(17只) 25.25±1.74＃ 26.18±1.02＃? 27.53±1.23＃ 200.71±11.93＃ 222.64±11.13＃? 231.73±12.93?第4周體質量差(g) Scr(μmol/L)治療前 治療后BUN(mmol/L)治療前 治療后24 h尿蛋白(mg/24 h)治療前 治療后54.43±15.76 50.12±2.31 51.22±2.85 6.51±0.35 6.43±0.27 5.21±1.42 5.14±0.92 20.65±3.21＃ 191.14±22.46＃ 222.15±25.81＃ 17.89±3.51＃ 21.97±5.12＃ 55.12±5.32＃ 68.21±9.58＃49.18±5.17? 190.36±18.53＃ 137.28±17.96＃?△ 17.61±2.08＃ 13.25±3.15＃?△ 54.91±6.43＃ 42.18±5.26＃?△32.56±6.52? 191.26±21.61＃ 149.87±12.44＃?△ 17.73±2.12＃ 15.57±2.71＃?△ 54.98±5.12＃ 49.21±4.14＃?△Alb(g/L)治療前 治療后Hb(g/L)治療前 治療后TC(mmol/L)治療前 治療后TG(mmol/L)治療前 治療后35.11±2.01 36.68±1.93 146.71±4.83 148.25±5.97 1.51±0.31 1.68±0.33 0.85±0.11 0.82±0.17 28.16±2.78＃ 24.35±2.39＃ 90.43±3.78＃ 72.58±9.02＃ 1.36±0.48 1.05±0.39 0.78±0.18 0.70±0.19 27.38±1.02＃ 31.98±1.18＃?△ 91.05±4.75＃ 113.75±8.31＃?△ 1.32±0.32 1.41±0.18?△ 0.80±0.15 0.91±0.11?△28.43±1.21＃ 28.18±3.24＃? 90.13±6.28＃ 88.42±7.52＃ 1.35±0.56 1.21±0.42? 0.79±0.16 0.73±0.16

3 討論

營養不良是CRF的常見并發癥之一，其發病率達80%[7]。CRF患者營養不良本身不僅能加快病情發展，還能增加心腦血管疾病的發生率，從而使病死率增高。研究表明，營養狀況是預測CRF患者預后的主要指標，是導致其死亡的重要原因[8-9]。因此，若是在延緩腎功能進展的同時，注意改善患者的營養狀態，不僅能有效減緩患者病情發展，更能提高患者的生存質量。CRF患者往往存在低蛋白血癥[10]，此時若采用高蛋白飲食，定會加重腎臟負擔；如何在治療CRF改善腎功能的同時緩解營養不良，是一個尤為重要的問題。

中醫認為，CRF營養不良屬于“虛勞”范疇，CRF病位在腎，因外感、內傷多種因素導致腎受損，腎開闔失司，氣不化水，陽不化濁，氣血運行無力，血流瘀滯，水濕痰濁瘀毒不能下泄外達，聚于體內，蘊結臟腑，久之成毒，損傷脾、腎，耗傷機體而發病[11]。根據現代醫家和臨床、基礎研究認為，治療CRF應根據其本虛標實、虛實錯雜的病機辨證施治，黃芪三七合劑即是在此理論下凝練出的專利復方。方劑主要藥物包括黃芪、三七、當歸、牛膝、昆布、大黃。方中黃芪、三七為君藥，黃芪具補氣升陽、益衛固表、利水消腫功效，與當歸配伍，氣血雙補，能有效糾正腎衰竭患者的貧血；三七活血化瘀，與黃芪、當歸配伍，補而不滯，協助二藥改善患者貧血的癥狀。藥理學研究表明，大黃的活性成分樂丹寧有促進蛋白質合成的作用[12]。鄭昱[13]發現，聯用黃芪、當歸可以明顯增高肝細胞白蛋白基因轉錄活性，從而促進白蛋白的合成。另外，研究表明三七具有補血的作用，能促進各類血細胞的分裂與增殖，改善紅細胞膜功能，增加外周血中紅細胞的數量，能調控造血細胞分化基因的表達，因而具有顯著的造血功能[14]。前期臨床研究中發現黃芪三七合劑治療CKD療效顯著，能明顯提高CKD 3期患者的總有效率，改善生活質量，且可明顯改善CRF患者面色晦暗、疲軟無力癥狀，同時有很好提升血紅蛋白的作用[4]。本實驗中，CRF組大鼠食欲減退，活動度降低，皮毛晦暗，后期腹瀉；而應用黃芪三七合劑治療后，A＆R組大鼠精神狀態明顯改善，皮毛光澤度及食欲較CRF大鼠明顯增加，且腹瀉癥狀得到緩解。說明黃芪三七合劑治療后大鼠腸道功能有所恢復，吸收能力增加，大鼠的整體生理特征逐漸好轉，與臨床研究一致，這可能與提高蛋白合成、增加造血功效有關。

CRF營養不良的發生機制并不完全清楚，但飲食攝入的不合理為發生營養不良的重要因素，使得蛋白和能量的攝入不能滿足機體需要[15]。另外，CRF患者常常并發代謝性酸中毒，且體內毒素大量堆積，引起患者胃腸道功能紊亂，出現惡心、嘔吐、食欲缺乏等癥狀。有研究表明，CRF營養不良的主要原因包括蛋白、熱量攝入不足，而厭食是致其發生的主要因素[16]。本研究發現，應用黃芪三七合劑的大鼠攝食量明顯增加，伴隨體質量增加顯著，大鼠精神活動度均好于模型組，且Scr、BUN和24 h尿蛋白明顯降低。表明黃芪三七合劑在改善腎功能的同時，增加CRF大鼠食欲，飲食攝入得到保證。此外，本研究結果顯示，治療4周后，與模型組比較，A＆R組大鼠的Alb、Hb、TG及TC水平均顯著升高，這些指標均能代表營養狀況。表明黃芪三七合劑可促進蛋白質的合成，糾正低蛋白血癥，改善營養不良；同時，增加血紅蛋白水平，促進造血，改善腎性貧血。另外，本實驗中，應用黃芪三七合劑后，Scr、BUN及24 h尿蛋白均比治療前明顯降低，差異有統計學意義(P＜0.05)，說明黃芪三七合劑能保護腎功能、延緩腎臟病的發展。多項結果表明，黃芪三七合劑對慢性腎臟疾病營養不良的治療是通過多途徑、多靶點實現的。另外需要說明的是，在本實驗中，因為纈沙坦是臨床常用治療慢性腎臟疾病的藥物，故選用當做陽性對照組，但纈沙坦并無明顯改善CKD大鼠營養狀態的作用。

黃芪三七合劑可以較好地改善CRF大鼠的營養狀態，從而為黃芪三七合劑的臨床應用提供理論依據。

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Protective effect of astragalus and radix notoginseng on malnutrition rats with chronic renal failure

WANG Li1，MA Xin2，YU Qin2，FAN Junming2
(1.Research Center of Combine Traditional Chinese and Western Medicine，Affiliated Traditional Medicine Hospital，Xinan Medical University，Luzhou Sichuan 646001，China；2.Xinan Medical University，Luzhou Sichuan 646000，China)

Objective To investigate the effect of astragalus and radix notoginseng(A＆R) on malnutrition rats with chronic renal failure(CRF).Methods Male rats were divided randomly into four groups，which were normal group(NOR group)，CRF group，A＆R group and valsartan group(Val group).All the rats in CRF group，A＆R group and Val group were given adenine by gavage.Rats in A＆R group received A＆R(3 mL/d).Val group was received the valsartan[20 mg/ (kg·d)]，NOR group and CRF group received corresponding amount of saline.Renal function，blood serum albumin(Alb)，haemoglobin(Hb)，total cholesterol(TC)，triglyceride(TG)and renal functin were examined with automatic biochemical analyzer.Results The food intake and weight in A＆R group were higher than those in CRF group.The levels of Scr and BUN in CRF group were significantly lower than those in CRF group(P＜0.05)，and in A＆R group the levels of Alb，Hb，TG，TC were all higher than those in chronic kidney disease group(P＜0.05).Conclusion A＆R has a significant protective effect on malnutrition rats with chronic renal failure.

Astragalus and radix notoginseng；Chronic renal failure(CRF)；Malnutrition

R286

A

2095-3097(2016)06-0344-04

10.3969/j.issn.2095-3097.2016.06.007

2016-01-29 本文編輯:徐海琴)

四川省科技廳項目(14JC0150)；瀘州市科技局項目(2013CDLZ-S20)

646001四川瀘州，西南醫科大學附屬中醫醫院中西醫結合研究中心(王 麗)；646000四川瀘州，西南醫科大學(馬 欣，喻 琴，樊均明)

樊均明，E-mail:junmingfan＠163.com