補血生津顆粒質量標準建立

毛盛芳

（江西省南昌市洪都中醫院制劑中心，南昌 330008）

補血生津顆粒質量標準建立

毛盛芳

（江西省南昌市洪都中醫院制劑中心，南昌 330008）

目的 建立補血生津顆粒的質量標準。方法 用薄層色譜法(TLC)對補血生津顆粒中的黃芪、當歸進行定性鑒別，采用高效液相色譜法(HPLC)測定補血生津顆粒中當歸的主要活性成分阿魏酸的含量，結果 TLC法專屬性強，斑點清晰；HPLC法測當歸中阿魏酸的含量，條件適宜，分離效果好，阿魏酸在0.0382～0.382 ug范圍內呈良好的線性關系，平均回收率為94.0%，RSD值為0.37%。結論 所建立的方法專屬性強，操作簡單，穩定靈敏，重現性好，可作為補血生津顆粒的質量控制方法。

補血生津顆粒；質量標準；黃芪；當歸

補血生津顆粒是由黃芪、當歸、白芍、白術、熟地黃等八味中藥材組成，主要有益氣，補血，養血，生津等功效，用于治療氣血兩虧，面色萎黃，食欲不振，四肢乏力等癥。在骨折愈合、養血補血方面有著獨特的療效。為確保補血生津顆粒的質量，采用薄層色譜法對方中黃芪和當歸進行定性鑒別，以高效液相色譜法分析測定當歸藥材中阿魏酸的含量，方法專屬性強，操作簡單，穩定靈敏，重現性好，能有效地控制補血生津顆粒的質量。具體方法如下。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 Waters高液相色譜儀（2487檢測器、Empower工作站），Diamonsil C18 5um反相色譜柱 (4.6×250 mm)，Apollo C18 5um反相色譜柱 (4.6×250 mm)，FA2004電子分析天平，TG332A半微量分析天平、Sartorius BT25S電子天平、UV-2101紫外分光光度計、SK250H超聲清洗儀。

1.2 試藥 黃芪甲苷對照品（批號：110781-201309）為中國藥品生物制品檢定所提供。阿魏酸對照品（批號：110773-201313）購自中國藥品生物制品檢定所。補血生津顆粒批號：20150314、20150321、20150329（本院自制），硅膠G（青島海洋化工廠），D101型大孔樹脂柱（內徑1.5 cm，長12 cm） （上海摩速科學器材公司），乙腈、甲醇為色譜純；乙酸乙酯、磷酸為分析純；水為超純水，所用試劑均為分析純。

2 方法和結果

2.1 定性鑒別

2.1.1 黃芪薄層鑒別 取本品15 g，研細，加甲醇50 ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20 ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20 ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次20 ml，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘渣加水20 ml使溶解，通過D101型大孔樹脂柱（內徑1.5 cm，長12 cm），依次用水100 ml、40%乙醇100 ml洗脫，棄去洗脫液，繼續用70%乙醇100 ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液15 μl和對照品溶液5 μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13∶7∶2）10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

2.1.2 當歸薄層鑒別 取本品5 g，研細，加水30 ml，用0.5 mol/L的硫酸溶液調節PH至2～3，用乙酸乙酯提取3次，每次20 ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。另取阿魏酸對照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液15 μl和對照品溶液2～5 μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正已烷-三氯甲烷-冰醋酸（6∶4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鐵和1%鐵氰化鉀混合溶液（用時等量混合）。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-0.1%磷酸溶液（17∶83）為流動相，檢測波長為320 nm，柱溫為35℃。理論板數按阿魏酸峰計算應不低于3000。

2.2.2 溶液的制備 對照品溶液： 取阿魏酸對照品適量，精密稱定，置棕色容量瓶中，加甲醇制成每1 ml含阿魏酸10 μg的溶液，即得對照品溶液。供試品溶液：取本品研細，取約4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加水50 ml，超聲處理（功率250 W，頻率59 kHz）20分鐘，濾過，用少量水洗滌殘渣和濾器，合并濾液，用磷酸調PH值為1～2，再用乙酸乙酯振搖提取4次，每次25 ml，合并乙酸乙酯提取液，80℃水浴蒸干，殘渣加甲醇溶解至5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。陰性對照溶液：除當歸藥材外，取處方中其它各味藥材，按處方比例及生產工藝制成不含阿魏酸的陰性樣品，照上述供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液。

2.2.3 系統適用性試驗 分別精密吸取陰性對照溶液、對照品溶液和供試品溶液各20 μl，分別進行高效液相色譜實驗，并記錄色譜圖，見圖1、圖2、圖3。結果表明：本色譜條件下，阿魏酸主峰與其他組分峰完全分離，保留時間適宜；而不含阿魏酸的陰性溶液色譜中，在對照品相應位置無色譜峰，說明陰性樣品無干擾。

圖1 陰性對照溶液色譜圖

圖2 對照品溶液色譜圖

圖3 供試品溶液色譜圖

2.2.4 標準曲線和線形范圍 精密稱定阿魏酸對照品1.91 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇至刻度；精密量取1 ml、3 ml、5 ml、7 ml、10 ml，分別置10 ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。精密吸取上述溶液各20 μl，在上述色譜條件下測定峰面積，以進樣量（μg）為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程：y=6000000x-21404，R=0.9998。阿魏酸在0.0382～0.382 μg范圍內呈良好的線性關系，

2.2.5 穩定性試驗 取阿魏酸對照品溶液（9.55 ug/ml），按“2.2.1”色譜條件，每隔2 h進樣一次，測定阿魏酸峰面積，得到其峰面積的RSD為2.0%，結果表明阿魏酸峰面積在8 h內無明顯變化，阿魏酸對照品穩定性好。

2.2.6 重復性試驗 取同一批樣品精密稱定5份，按供試品溶液的制備方法進行制樣，按“2.2.1”項下方法進行檢測，樣品重復性良好，測得該批樣品阿魏酸含量分別為0.0136，0.0136，0.0135，0.0136，0.0137 mg/ g，RSD為0.37%。

2.2.7 精密度試驗 取同一濃度的阿魏酸對照品溶液（9.55 μg/ml），依照“2.2.1”項下方法重復進樣6次，分別測定阿魏酸的峰面積，求其六次峰面積的RSD值均為1.8%，證明儀器精密度良好。

2.2.8 回收率試驗 準確稱取已知含量 (0.0136 mg/g）的本品約0.5 g，共五份，分別加入一定量的對照品溶液，照“2.2.1”項下方法試驗，計算回收率，平均回收率為94.0%，符合要求。

2.2.9 樣品測定 分別取七批補血生津顆粒，按“2.2.1”項下方法測定，以標準曲線法計算樣品中阿魏酸的含量，結果見表1。

表1 七批樣品測定結果

3 討論

3.1 供試品溶劑的制備

3.1.1 溶劑的選擇 分別以甲醇和稀乙醇、水飽和的正丁醇、乙酸乙酯、乙醚4種溶劑提取供試品溶液，對其提取效果進行比較，結果用乙酸乙酯溶劑所提取的供試品溶液較純凈，色譜圖中雜峰少，樣品分離好，色譜圖中阿魏酸主峰峰面積大，峰形較好，基線平穩，出峰時間適宜。

3.1.2 超聲時間的比較 提取供試品溶液時，比較了超聲振蕩時間對阿魏酸含量的影響，分別超聲處理10、20、30 min，結果三種超聲時間中超聲20 min與超聲30 min含量結果基本一致，考慮到樣品中阿魏酸見光不穩定易分解，因此選擇超聲20 min作為提取條件。

3.2 流動相的選擇 分別采用乙腈-0.05 mol/l磷酸二氫鉀溶液（15∶85）和乙腈-0.1%磷酸溶液（17∶83）作為流動相，比較出峰情況，結果發現以乙腈-0.1%磷酸溶液（17∶83）為流動相的主峰保留時間適宜，峰形較好。故選擇乙腈-0.1%磷酸溶液（17∶83）為本方法的流動相。

4 結論

采用薄層色譜法對方中黃芪、當歸進行定性鑒別，方法操作簡單，專屬性強，能有效控制制劑質量。

采用高效液相色譜法測定當歸的含量，方法穩定、靈敏，重現性良好，故可作為質量標準。

根據“2.2.9”樣品測試結果，同時考慮到當歸藥材產地、采收季節的差異及批量生產中各種因素的影響，我們制定本品每袋含阿魏酸不得少于0.10 mg。

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Quality Standards Establishment on Buxue Shengjin Granule

MAO Chengfang
(Preparations Center,Hongdu Hospital of TCM,Nanchang 330008,China)

Objective To establish the quality standards of Buxue Shengjin granule.Methods Using thin layer chromatography (TLC),qualitative identification of astragalus and angelica in Buxue Shengjin granule was carried out,and high performance liquid chromatography (HPLC)was developed for the determination of main active ingredient ferulic acid of angelica sinensis in Buxue Shengjin granule.Results The TLC method is specific,and the spots are clear.HPLC method for angelica ferulic acid content,the condition is appropriate,the separation effect is good,within the scope of ferulic acid in 0.0382~0.382 ug,has good linear relationship,the average recovery is 94.0%,and RSD values is 3.7%.Conclusion The method is specific,simple,sensitive and stable,reproducible,and can control the quality of Buxue Shengjin granule.

Buxue Shengjin granule;quality standards;chemistry of Chinese materia medica;thin layer chromatography

10.3969/j.issn.1672-2779.2016.23.063

1672-2779（2016）-23-0138-03

李海燕 本文校對：張 潔

2016-07-31）