CD147在不明原因自然流產(chǎn)患者絨毛組織的表達(dá)*

唐傳玲， 滕曉明， 車 映， 李大金

(1同濟(jì)大學(xué)附屬第一婦嬰保健院，上海 201204； 2復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院，上海 200011)

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CD147在不明原因自然流產(chǎn)患者絨毛組織的表達(dá)*

唐傳玲1， 滕曉明1， 車 映1， 李大金2△

(1同濟(jì)大學(xué)附屬第一婦嬰保健院，上海 201204；2復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院，上海 200011)

目的： 分析CD147在不明原因自然流產(chǎn)患者絨毛組織中的表達(dá)水平，并探討其生物學(xué)功能。方法:收集人早孕期正常和不明原因自然流產(chǎn)婦女的絨毛組織，采用免疫組織化學(xué)、RT-PCR 和Western blotting法檢測CD147的表達(dá)，比較CD147在正常早孕與不明原因自然流產(chǎn)婦女絨毛組織的表達(dá)差異。體外分離純化獲得正常人早孕期滋養(yǎng)細(xì)胞，采用免疫細(xì)胞化學(xué)驗(yàn)證CD147在滋養(yǎng)細(xì)胞的表達(dá)，引入抗CD147中和性抗體處理人滋養(yǎng)細(xì)胞，采用BrdU增殖實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)分析滋養(yǎng)細(xì)胞增殖和侵襲能力的變化。結(jié)果:正常早孕期絨毛組織和滋養(yǎng)細(xì)胞高表達(dá)CD147，不明原因自然流產(chǎn)絨毛組織CD147的mRNA和蛋白表達(dá)水平均低于正常早孕期絨毛組織。抗CD147中和性抗體處理原代人滋養(yǎng)細(xì)胞后，滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖能力未發(fā)生明顯變化，侵襲能力下降。結(jié)論:人絨毛組織CD147的異常低表達(dá)可能與不明原因早期妊娠失敗相關(guān)，CD147通過調(diào)控滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲能力參與正常妊娠的維持。

不明原因自然流產(chǎn)； CD147； 滋養(yǎng)細(xì)胞； 細(xì)胞增殖； 細(xì)胞侵襲

自然流產(chǎn)是指妊娠早期胚胎發(fā)育自然終止、丟失的病理過程。排除環(huán)境因素，染色體異常，母方生殖道解剖、內(nèi)分泌、免疫、感染因素和血栓形成傾向，以及父方因素的自然流產(chǎn)稱為不明原因自然流產(chǎn)(unexplained spontaneous abortion， USA)。USA在連續(xù)發(fā)生3次和3次以上反復(fù)自然流產(chǎn)人群中的比例高達(dá)50%以上，嚴(yán)重影響女性的生殖健康。雖然目前臨床上自然流產(chǎn)的治療和預(yù)防取得了很大進(jìn)展，但其發(fā)病機(jī)制仍未完全闡明。

CD147是basigin基因表達(dá)的一個(gè)跨膜糖蛋白，屬于免疫球蛋白超家族成員。CD147在許多細(xì)胞和組織中表達(dá)，參與介導(dǎo)細(xì)胞間識(shí)別、細(xì)胞生長分化以及組織重建等生理過程。研究發(fā)現(xiàn)，CD147可以通過腫瘤細(xì)胞間的相互作用誘導(dǎo)基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)的產(chǎn)生，從而降解基質(zhì)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長和浸潤，因此又被稱為細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer，EMMPRIN)[1]。CD147在多種腫瘤細(xì)胞高表達(dá)，除激活MMPs外，還可活化多種促炎介質(zhì)和細(xì)胞因子，在腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移中起著重要作用[2]。

妊娠初期，滋養(yǎng)細(xì)胞具有與腫瘤細(xì)胞類似的增殖和侵襲行為[3]。大量研究已證實(shí)，MMPs在早孕期絨毛組織和蛻膜組織廣泛表達(dá)，在滋養(yǎng)細(xì)胞入侵子宮蛻膜及子宮螺旋動(dòng)脈重塑中具有重要作用[4]。亦有文獻(xiàn)報(bào)道，作為MMPs誘導(dǎo)因子的CD147表達(dá)于人早期囊胚和足月胎盤[5-6]，子癇前期及子癇患者胎盤組織中CD147表達(dá)水平下降[7]。然而目前關(guān)于CD147表達(dá)與不明原因自然流產(chǎn)的關(guān)系并未見報(bào)道。本研究通過收集臨床標(biāo)本觀察CD147在正常早孕和不明原因自然流產(chǎn)患者絨毛組織中的表達(dá)水平，體外分離人早孕期滋養(yǎng)細(xì)胞，初步探討CD147表達(dá)水平對滋養(yǎng)細(xì)胞增殖和侵襲能力的影響。

材 料 和 方 法

1 材料

1.1 人體組織標(biāo)本的采集 經(jīng)復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)及患者本人知情同意，絨毛組織取自年齡在25～35歲、孕7～12周自愿行人工流產(chǎn)術(shù)終止妊娠的正常妊娠婦女和USA婦女。正常妊娠入選標(biāo)準(zhǔn)為超聲檢查宮腔內(nèi)孕囊見原始心管博動(dòng)，未見盆腔積液；既往無自然流產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)史，無遺傳、解剖、內(nèi)分泌方面的異常、感染及抗磷脂綜合征。本次妊娠期間無陰道流血、腹痛等先兆流產(chǎn)癥狀和體征。USA入選標(biāo)準(zhǔn)為超聲檢查宮腔內(nèi)見孕囊，未見胚芽或原始心管搏動(dòng)；既往流產(chǎn)次數(shù)≥2次，流產(chǎn)時(shí)間為孕7～12周；排除母體染色體、生殖道解剖、內(nèi)分泌方面的異常，生殖道感染，血栓形成傾向以及男方精液方面的異常。

1.2 主要試劑 MatrigelTMBasement Membrane Matrix 購自BD Bioscience；小鼠抗人CD147單克隆抗體購自Abcam；小鼠抗人細(xì)胞角蛋白7(cytokeratin 7，CK7)和波形蛋白(vimentin)單克隆抗體、小鼠IgG、通用ABC免疫組化染色試劑盒、DAB顯色液購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；RNA提取試劑盒、PrimeScriptTMRT-PCR試劑盒、CD147及GAPDH的引物購自TaKaRa；RIPA裂解液、BCA蛋白濃度測定試劑盒、蛋白上樣緩沖液購自杭州碧云天生物科技有限公司；小鼠抗人GAPDH抗體購自Santa Cruz；標(biāo)記辣根過氧化物酶的羊抗小鼠IgG II 抗購自上海康成生物公司；SuperECL Plus發(fā)光液購自Thermo Scientific。

2 方法

2.1 免疫組織化學(xué)分析絨毛組織CD147的表達(dá) 絨毛組織石蠟切片常規(guī)脫蠟、抗原修復(fù)、滅活內(nèi)源性過氧化物、封閉后，滴加小鼠抗人CK7、CD147單克隆抗體及小鼠IgG(1∶50)，4℃孵育過夜；次日按試劑盒說明依次加入生物素化II抗、辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素化生物素反應(yīng)試劑(ABC法)；DAB避光顯色，蘇木素復(fù)染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。實(shí)驗(yàn)重復(fù)5次。

2.2 RT-PCR分析絨毛組織CD147的mRNA轉(zhuǎn)錄水平 早孕絨毛組織以預(yù)冷的PBS洗滌剪碎后按照TaKaRa RNA提取試劑盒說明書提取總RNA，采用PrimeScriptTMRT-PCR Kit 進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。以上述反應(yīng)所得cDNA為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)(cDNA 2 μL，Premix Taq 25 μL，上、下游引物各1 μL，加DEPC水調(diào)整反應(yīng)體系為50 μL)。反應(yīng)條件為94 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 35 s，共28個(gè)循環(huán)；72 ℃ 7 min，4 ℃保存。CD147的上游引物序列為5’-GACTGGGCCTGGTACAAGATCAC-3’，下游引物序列為5’-GCCTCCATGTTCAGGTTCTCAA-3’，預(yù)計(jì)擴(kuò)增產(chǎn)物片段長度為128 bp；GAPDH的上游引物序列為5’-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3’，下游引物序列為5’-TGGTGAAGACGCCAGTGGA-3’，預(yù)計(jì)擴(kuò)增產(chǎn)物片段長度為138 bp。PCR產(chǎn)物經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳，凝膠掃描成像系統(tǒng)記錄產(chǎn)物的電泳結(jié)果。用AlphaEase FC軟件對RT-PCR產(chǎn)物的電泳條帶進(jìn)行分析。各組CD147與相應(yīng)GAPDH電泳條帶的光密度比值代表其相對表達(dá)量。

2.3 Western blotting法分析絨毛組織CD147的表達(dá)水平 早孕絨毛組織以預(yù)冷的PBS洗滌剪碎后，加入適量RIPA裂解液充分勻漿，冰上放置30 min。經(jīng)4 ℃、12 000 r/min離心20 min，收集上清至離心管中，用BCA蛋白濃度測定試劑盒進(jìn)行蛋白定量。取50 μg 蛋白樣品加入相應(yīng)體積的蛋白上樣緩沖液，100 ℃變性10 min。12 000 r/min離心5 min 后上樣，進(jìn)行蛋白電泳，轉(zhuǎn)膜，50 g/L脫脂奶粉封閉1 h，分別加入小鼠抗人CD147單克隆抗體(1∶1 000稀釋)、小鼠抗人GAPDH抗體(1∶2 000 稀釋)。4 °C孵育過夜后，PBS充分洗滌，加入相應(yīng) II 抗(1∶2 000 稀釋)，室溫孵育1 h，用SuperECL Plus發(fā)光液在暗室中壓片曝光，顯影定影后膠片保存。掃描儀掃描膠片，采用Quantity One分析軟件對條帶進(jìn)行密度掃描分析。2.4 滋養(yǎng)細(xì)胞的分離與培養(yǎng) 將早孕期正常絨毛組織用含抗生素的PBS充分洗滌、剪碎后采用胰酶消化和密度梯度離心兩步法分離、純化滋養(yǎng)細(xì)胞[8]。用此方法分離的滋養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)抗角蛋白和抗波形蛋白抗體免疫組織化學(xué)方法鑒定，純度達(dá)90%～95%。分離得到的滋養(yǎng)細(xì)胞加入含20% 胎牛血清和1%青、鏈霉素的DMEM-high glucose培養(yǎng)液，種植于預(yù)先包被Matrigel的培養(yǎng)板，置于37 °C、5%CO2孵育箱中培養(yǎng)。2.5 免疫細(xì)胞化學(xué)分析滋養(yǎng)細(xì)胞CD147的表達(dá) 細(xì)胞生長密度約70%時(shí)，4%多聚甲醛固定20 min，1% Triton X-100通透細(xì)胞膜15 min，3% H2O2孵育15 min以去除內(nèi)源性過氧化物酶的活性，含3% BSA封閉30 min。棄封閉液后，分別加小鼠抗人CK7、vimentin、HLA-G、CD147單克隆抗體及同型對照小鼠IgG(1∶50)，4 ℃孵育過夜。次日PBS浸泡3～5次后，按ABC試劑盒說明書操作，依次加入生物素化 II 抗、辣根過氧化物酶標(biāo)記的生物素反應(yīng)試劑，DAB避光顯色，蘇木素復(fù)染，去離子水返藍(lán)，中性樹膠封片，于Olympus倒置顯微鏡下讀片并拍照。胞漿棕褐著色者為陽性細(xì)胞，以Image-Pro Plus 6.0軟件分析染色強(qiáng)弱。2.6 BrdU摻入法檢測滋養(yǎng)細(xì)胞增殖 新鮮分離的原代滋養(yǎng)細(xì)胞以每孔2×104的密度種植于預(yù)先包被Matrigel的96孔板中，經(jīng)無血清培養(yǎng)液培養(yǎng)12 h同步化后，加入溶媒(PBS)和抗CD147中和性抗體[9-10]。培養(yǎng)48 h后，每孔加入BrdU 20 μL繼續(xù)培養(yǎng)16 h。固定后每孔依次加入100 μL試劑盒預(yù)稀釋的BrdU抗體及羊抗小鼠IgG(1∶2 000)室溫孵育，洗板，加入底物顯色后經(jīng)酶標(biāo)儀讀取450和590 nm雙波長的吸光度(A)值。每組設(shè)5復(fù)孔，重復(fù)3次。以處理組A值減去其空白對照之差與對照組相應(yīng)A值差的比值表示增殖指數(shù)。

2.7 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲 將Transwell小室(8 μm孔徑、Corning)濾膜表面包被Matrigel，放入24孔培養(yǎng)板中，于37°C孵箱放置30 min使其凝固，使其形成上、下2個(gè)小室。上室加入新鮮分離的原代滋養(yǎng)細(xì)胞1×105，在下室加入600 μL含10%FBS的DMEM培養(yǎng)液。經(jīng)無血清培養(yǎng)液培養(yǎng)12 h同步化后，加入溶媒(PBS)、抗-CD147中和性抗體[9-10](用含1% 胎牛血清的DMEM配制)。置培養(yǎng)板于37 °C、5%CO2培養(yǎng)箱中孵育48 h，以棉簽輕輕拭去上室濾膜內(nèi)面的細(xì)胞，保留定向遷移至濾膜下表面的細(xì)胞。甲醇固定，蘇木素染色，置顯微鏡觀察，于高倍鏡(×200)下每孔隨機(jī)選擇5個(gè)視野拍照并計(jì)數(shù)細(xì)胞。獨(dú)立實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次。侵襲指數(shù)為每高倍鏡視野中實(shí)驗(yàn)組遷移至下表面的細(xì)胞數(shù)與對照組遷移至下表面的細(xì)胞數(shù)的比值。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，采用SPSS 15.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。應(yīng)用配對樣本t檢驗(yàn)(paired-samplet-test)或單因素方差分析(one-way ANOVA)進(jìn)行2組間或多組間樣本均數(shù)的比較和統(tǒng)計(jì)分析，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 人正常早孕絨毛組織CD147的表達(dá)

對CD147在人正常早孕絨毛組織的表達(dá)進(jìn)行免疫組化驗(yàn)證，可見CK和CD147蛋白陽性染色呈現(xiàn)棕紅色，主要分布于細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞；獨(dú)特型抗體小鼠IgG并未著色，表明人正常早孕絨毛組織表達(dá)CD147，見圖1。

Figure 1. The expression of CD147 in human first-trimester villous tissues (×200).

圖1 人早孕期絨毛組織CD147的表達(dá)

2 CD147在人早孕流產(chǎn)絨毛組織的表達(dá)水平

收集早孕期原因不明自然流產(chǎn)和正常妊娠婦女的絨毛組織各5例，分別通過免疫組化、RT-PCR和Western blotting法檢測CD147的表達(dá)水平。免疫組化結(jié)果顯示，流產(chǎn)絨毛組織滋養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量明顯減少，CD147蛋白的陽性染色顆粒明顯減少。RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，流產(chǎn)絨毛組織CD147的mRNA水平明顯低于正常早孕絨毛組織。Western blotting實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了上述結(jié)果，流產(chǎn)絨毛組織的CD147蛋白表達(dá)水平較正常早孕絨毛組織明顯下降，見圖2。

Figure 2. The expression levels of CD147 were lower in the villous tissues from the patients with early unexplained spontaneous abortion than those from the women with normal pregnancies. Mean±SD.n=3.*P<0.05vsnormal.

圖2 CD147在人早孕流產(chǎn)絨毛組織的表達(dá)水平下降

3 原代人滋養(yǎng)細(xì)胞的鑒定與CD147的表達(dá)

原代分離的早孕期滋養(yǎng)細(xì)胞在預(yù)先包被Matrigel的培養(yǎng)板上呈不規(guī)則的多邊形，喜遷移、聚集生長。細(xì)胞免疫化學(xué)結(jié)果顯示，滋養(yǎng)細(xì)胞CK7、HLA-G高強(qiáng)度著色，vimentin不著色，CD147中強(qiáng)度著色,表明人滋養(yǎng)細(xì)胞表達(dá)CD147,見圖3。

Figure 3. The expression of CD147 in the primary human trophoblasts (×200).

圖3 原代人滋養(yǎng)細(xì)胞CD147的表達(dá)

4 CD147抗體處理對原代人滋養(yǎng)細(xì)胞增殖和侵襲的影響

為進(jìn)一步分析CD147是否參與調(diào)控滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖和侵襲行為，我們采用抗CD147中和性抗體封閉CD147的功能，觀察原代滋養(yǎng)細(xì)胞增殖與侵襲能力的變化。BrdU增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，抗CD147抗體處理滋養(yǎng)細(xì)胞后，細(xì)胞的增殖能力沒有明顯變化。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，抗CD147抗體處理滋養(yǎng)細(xì)胞后，細(xì)胞的侵襲能力下降，且呈現(xiàn)濃度依賴趨勢，見圖4。

Figure 4. The effect of CD147 suppression by CD147 antibody on the proliferation and invasion of primary human trophoblasts. Mean±SD.n=3.*P<0.05vs0 mg/L group.

圖4 CD147抗體對原代人滋養(yǎng)細(xì)胞增殖和侵襲的影響

討 論

妊娠初期，滋養(yǎng)細(xì)胞的一個(gè)重要功能就是入侵母體子宮，以提供胚胎后續(xù)發(fā)育所需要的各種營養(yǎng)物質(zhì)。滋養(yǎng)細(xì)胞增生活躍，具有侵襲特性，能有效地避免機(jī)體免疫系統(tǒng)的攻擊，與腫瘤細(xì)胞類似，但同時(shí)受到機(jī)體精細(xì)調(diào)節(jié)系統(tǒng)的嚴(yán)格控制，時(shí)間限制在植入窗，空間僅限于子宮內(nèi)膜和子宮淺肌層。滋養(yǎng)細(xì)胞的這種特殊行為對胚胎著床、胎盤發(fā)育并建立恰當(dāng)?shù)哪柑リP(guān)系至關(guān)重要。研究表明，滋養(yǎng)細(xì)胞和母體細(xì)胞可通過細(xì)胞表面分子的相互作用，調(diào)控母胎界面組成細(xì)胞的生物學(xué)行為，促進(jìn)胚胎植入。CD147是細(xì)胞表面的跨膜糖蛋白，在介導(dǎo)細(xì)胞識(shí)別、細(xì)胞分化、組織重建等功能中起著重要的作用。CD147可以與多種細(xì)胞表面分子相結(jié)合，如親和素蛋白(cyclophilins，CyP)、單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(monocarboxylate transporters，MCTs)、小窩蛋白(caveolin 1，Cav-1)等，介導(dǎo)細(xì)胞生物學(xué)功能[11]。本研究中，我們通過免疫組化檢測也證實(shí)了CD147在人絨毛組織和原代滋養(yǎng)細(xì)胞有較高水平表達(dá)，可能參與調(diào)節(jié)滋養(yǎng)細(xì)胞的生物學(xué)行為和胚胎著床，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[12]。

胚胎植入是個(gè)非常復(fù)雜的過程，起始于囊胚與母體子宮內(nèi)膜黏附，直至胎盤形成。人類胚胎發(fā)育到4～6 d 形成囊胚，囊胚外圍的扁平細(xì)胞即為滋養(yǎng)細(xì)胞。人類胚胎在囊胚階段，CD147的表達(dá)上調(diào)[5]。早在1998年就有文獻(xiàn)報(bào)道[13]，CD147基因缺陷的小鼠胚胎絕大部分不能著床，繼而死亡；而同期正常小鼠胚胎的滋養(yǎng)層細(xì)胞高表達(dá)CD147，表明CD147在胚胎發(fā)育和植入過程中具有重要作用。但由于人類胚胎標(biāo)本研究的倫理問題，CD147在人類生殖方面的功能研究鮮有報(bào)道。本研究中，我們收集正常早孕和不明原因流產(chǎn)婦女的絨毛組織，通過免疫組化，RT-PCR及Western blotting實(shí)驗(yàn)比較CD147在2組人群中的表達(dá)差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不明原因流產(chǎn)婦女絨毛組織的CD147表達(dá)水平較正常早孕婦女顯著下降，提示CD147可能參與滋養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)行為的調(diào)控，從而影響妊娠的結(jié)局。為了進(jìn)一步研究CD147表達(dá)水平對滋養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，我們收集正常早孕自愿終止妊娠婦女的絨毛組織，分離培養(yǎng)得到原代滋養(yǎng)細(xì)胞，用不同濃度的抗-CD147抗體抑制其生物活性，分析滋養(yǎng)細(xì)胞增殖和侵襲能力的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著抗-CD147抗體濃度的增加，滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖指數(shù)未見明顯改變、侵襲指數(shù)顯著下降，表明CD147參與對滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲行為的調(diào)控。

胚胎成功著床到建立正常母-胎血液循環(huán)，需要具有高侵襲力絨毛外細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞首先降解細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)，繼而侵襲至蛻膜深部，并向子宮間質(zhì)及螺旋動(dòng)脈腔內(nèi)呈侵襲性生長，取代子宮螺旋動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞，協(xié)助胎盤血管重鑄。MMPs在這個(gè)過程中具有重要作用。隨著胚胎著床過程的進(jìn)展，MMPs尤其是MMP-2和MMP-9的表達(dá)上調(diào)，滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲力增加。而CD147能夠激活MMPs，在誘導(dǎo)其功能中起著重要的作用[10]。CD147還可以與整合素家族α3β1、α6β1形成蛋白復(fù)合物[11]。整合素是廣泛分布于細(xì)胞表面的跨膜糖蛋白，是一個(gè)細(xì)胞表面受體家族，屬于黏附分子大家族，能與其他細(xì)胞黏附因子相互作用，也是細(xì)胞外基質(zhì)的主要受體，介導(dǎo)細(xì)胞黏附和細(xì)胞間信號轉(zhuǎn)導(dǎo)[14]。對于CD147通過何種機(jī)制和信號通路調(diào)節(jié)多種MMPs的表達(dá)和活性，進(jìn)而調(diào)控滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲行為，我們?nèi)孕枰M(jìn)一步的研究來闡明。

綜上所述，本文研究發(fā)現(xiàn)CD147表達(dá)水平下降，可引起滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力下降，進(jìn)而參與不明原因自然流產(chǎn)的發(fā)病過程。不明原因自然流產(chǎn)是妊娠常見的一種并發(fā)癥，且發(fā)病率逐年升高，是導(dǎo)致女性不育的一個(gè)重要原因。滋養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)功能下降是導(dǎo)致自然流產(chǎn)的重要發(fā)病機(jī)制。因此，深入研究圍著床期和孕期CD147分子自身的表達(dá)調(diào)控以及其對滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲行為的調(diào)控機(jī)制，可為胚胎種植失敗和自然流產(chǎn)的治療提供潛在的靶點(diǎn)。

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(責(zé)任編輯： 陳妙玲， 羅 森)

Expression of CD147 in villous tissues of patients with unexplained spontaneous abortion

TANG Chuan-ling1, TENG Xiao-ming1, CHE Ying1, LI Da-jin2

(1FirstMaternityandInfantHospitalAffiliatedtoTongjiUniversity,Shanghai201204,China;2HospitalofObstetricsandGynecology,FudanUniversity,Shanghai200011,China.E-mail:djli@shmu.edu.cn)

AIM: To analyze the expression levels of CD147 in villous tissues of patients with unexplained spontaneous abortion and to investigate its biological function in human primary trophoblastsinvitro. METHODS: The villous tissues were collected from the women with normal early pregnancy and unexplained spontaneous abortion. The expression levels of CD147 were determined by immunohistochemical staining, reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) and Western blotting. The primary trophoblasts were prepared by the trypsin-DNase I digestion and culturedinvitro. CD147 expression in the primary trophoblasts was detected by immunocytochemical staining. The primary trophoblasts were treated with anti-human CD147 neutralizing antibody, and then the cell proliferation and invasion abilities were evaluated by BrdU incorporation assay and Matrigel-coated Transwell assay, respectively. RESULTS: CD147 was expressed in the first-trimester villous tissues and human primary trophoblasts. The mRNA and protein levels of CD147 were lower in the villous tissues from the patients with unexplained spontaneous abortion than those from the women with normal pregnancies. The trophoblast invasion decreased significantly accompanied with no evident change in proliferation after treatment with anti-human CD147 neutralizing antibody. CONCLUSION: The abnormal low expression of CD147 in human villous tissues may correlate with early unexplained spontaneous abortion. CD147 plays a role in the regulation of trophoblast invasion and participates in the maintenance of successful pregnancy.

Unexplained spontaneous abortion; CD147; Trophoblasts; Cell proliferation; Cell invasion

1000- 4718(2016)11- 2067- 06

2016- 05- 25

2016- 08- 23

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No. 81300505)；國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)婦幼司公益性行業(yè)科研專項(xiàng)衛(wèi)生科研專項(xiàng)資助項(xiàng)目(No. 201402004)

R392

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2016.11.025

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△通訊作者 Tel: 021-63457331； E-mail: djli@shmu.edu.cn