高磷刺激下尿毒癥患者甲狀旁腺細胞增生的臨床研究

洪艷，宋丹

(無錫市第二人民醫院腎內科，江蘇 無錫 214000)

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高磷刺激下尿毒癥患者甲狀旁腺細胞增生的臨床研究

洪艷，宋丹

(無錫市第二人民醫院腎內科，江蘇 無錫 214000)

目的：探討尿毒癥時高磷通過局部環氧化酶2(cyclooxygenase 2，COX2)途徑對甲狀旁腺細胞增生和功能亢進的刺激效果。方法：對19例行甲狀旁腺切除術的尿毒癥患者甲狀旁腺組織進行研究。通過免疫組化和免疫共染色法的方法觀察增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)和COX2的表達和分布。將培養的原代甲狀旁腺細胞分為正常對照和高磷干預組，用Western印跡法和RT-PCR法，分別測定甲狀旁腺激素(iPTH)表達水平。結果：62枚尿毒癥甲狀旁腺結節中均觀察到COX2和PCNA陽性細胞高表達。高磷刺激下，體外原代培養的甲狀旁腺細胞中，甲狀旁腺激素分泌顯著增加， PCNA和COX2蛋白及基因表達也顯著增加。結論：尿毒癥時高磷會通過局部環氧化酶2(COX2)途徑對甲狀旁腺細胞增生和功能亢進產生明顯的刺激。

尿毒癥；甲狀旁腺激素；細胞增生；高磷血癥

尿毒癥患者容易并發甲狀旁腺功能亢進，導致甲狀旁腺增生[1]。研究發現，環氧化酶(cyclooxygenase，COX) 在癌前期病變及惡性腫瘤中會存在高表達現象，是導致腫瘤細胞增生的重要因素之一[2]。本研究中，筆者選擇19例行甲狀旁腺切除術的尿毒癥患者甲狀旁腺組織進行研究，探討尿毒癥時高磷通過局部環氧化酶2(cyclooxygenase 2，COX2)途徑對甲狀旁腺細胞增生和功能亢進的刺激效果。現將本研究相關結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

選擇19例行甲狀旁腺切除術的尿毒癥患者甲狀旁腺組織進行研究，實驗組織均來自本院2012年12月至2013年12月19例行甲狀旁腺全切除加自體前臂移植術的毒癥患者。

1.2 方法

兔抗人COXl、兔抗人COX2、鼠抗人增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)試劑盒均購自上海研謹生物科技有限公司，利用免疫組化和免疫共染法觀察增殖細胞核抗原(PCNA) 以及COX2的表達和分布情況。對實驗所用組織進行原代培養，并制備細胞懸液備用。分別予以正常磷和高磷干預，檢測其甲狀旁腺激素(parathyroid hormone，iPTH)水平。利用 Western印跡法和實時PCR方法檢測實驗組織，觀察 COX2和PCNA的表達情況。

1.3 統計學分析

2 結果

手術一共獲得62枚尿毒癥甲狀旁腺結節。

2.1 COX2表達與分布情況分析

較之正常組織，尿毒癥患者甲狀旁腺組織中COX2的陽性指數顯著增大，其中結節性增生甲狀旁腺組織顯著低于彌漫性增生甲狀旁腺組織，經比較差異有統計學意義(P<0.05)，具體如圖1所示。

2.2 COX2與甲狀旁腺增生關系分析

甲狀旁腺細胞增生與COX2表達之間存在一定的關系，彌漫性增生甲狀旁腺組織中， COX2陰性細胞中21.50%呈PCNA陽性，COX2陽性細胞中80.60%呈PCNA陽性，經比較差異有統計學意義，(P<0.05)，具體如圖2所示。

2.3 高磷對甲狀旁腺細胞分泌功能的影響分析

隨著培養時間的增加，兩組組細胞上清iPTH水平均出現上升現象，12 h之后，高磷組iPTH水平開始維持顯著高于對照組的狀態(P<0.05)。具體如圖3所示：

2.4 高磷對甲狀旁腺細胞COX2和PCNA蛋白及mRNA表達的影響分析

經實時定量PCR檢測和Westem印跡檢測，均顯示高磷組甲狀旁腺細胞中COX2和PCNA的蛋白表達顯著高于正常磷組(均P<0.05)。具體如圖4所示。

3 討論

甲狀旁腺功能亢進是慢性腎臟病患者透析后出現的常見并發癥，常導致患者鈣、磷和骨代謝異常[3-4]。甲狀旁腺主要調節人體鈣和磷的代謝，隨著尿毒癥病情的加重，引起其甲狀旁腺增生，導致其調節功能出現紊亂，繼發性甲狀旁腺功能亢進[5-7]。有學者通過研究發現[8]，尿毒癥患者的主動脈鈣化程度和自身的血鈣、血磷代謝異常之間會呈現出正相關關系，且與甲狀旁腺激素水平之間呈現出正相關關系。引起血液中甲狀旁腺激素異常，而甲狀旁腺激素水平升高會引起骨質脫鈣，這也是引起全身關節疼痛和骨骼縮短的病因。研究發現[9]，在甲狀旁腺功能亢進的發生過程中，高磷以及成纖維細胞生長因子(FGF) 會參與其中。還有學者通過研究發現[10]，人甲狀旁腺組織中會出現COX2的表達。本次研究結果顯示，62枚尿毒癥甲狀旁腺結節中均觀察到COX2和PCNA陽性細胞高表達。在正常的甲狀旁腺組織中，極少存在COX2陽性細胞，但在尿毒癥甲旁亢患者甲狀旁腺組織中則出現COX2的高表達現象。且COX2在彌漫性增生甲狀旁腺組織中的表達要明顯高于其在結節性增生甲狀旁腺組織中的表達。有學者通過研究[11]，分析環氧化酶2(COX2)抑制劑塞來昔布(celecoxib)對尿毒癥大鼠甲狀旁腺(PG)異常增生的影響，發現選擇性COX2抑制劑塞來昔布可以顯著抑制尿毒癥大鼠甲旁亢和甲狀旁腺增生。張倩[12]也通過研究發現，在很多癌前病變及腫瘤組織中均能發現COX2與mPGES1呈現出協同高表達的情況，該通路代謝產生的PGE2的受體EP2表達增加。且表達的陽性率越高，腫瘤的惡性程度越高。對于慢性腎衰竭患者而言，大多會出現高磷、低鈣等情況，在這些因素的持續刺激下，患者的甲狀旁腺便會從正常低分化狀態不斷向著增生狀態發展，導致甲狀腺細胞增生等的出現，甚至導致單克隆結節等[13]。本次研究結果還顯示，體外原代培養甲狀旁腺細胞中，高磷狀態下，iPTH分泌會出現顯著的增加，并顯著上調PCNA及COX2蛋白、基因表達。即表明，在甲狀旁腺局部會出現COX2異常代謝的情況，并有可能與早中期甲狀旁腺組織增生的發生、發展過程存在一定的關系，并參與其中。甲狀旁腺組織結節性增生的出現會導致增生現象的活躍，并大多為單克隆樣增生[14]。而在結節性和彌漫性增生的甲狀旁腺組織中，絕大多數COX2陽性細胞均同時表達PCNA。這一結果還進一步表明，COX2的表達與甲狀旁腺細胞增生有關，并參與其中。另外，還有學者通過研究報道[15]，除高磷刺激之外，缺乏維生素D以及低鈣等因素也可能會導致COX2出現異常代謝。人體中的血鈣通過與細胞膜上的鈣敏感受體胞外進行結合可以對胞質內的花生四烯酸予以有效調節，從而對花生四烯酸上游途徑磷脂酶A2 活性產生影響。但是，其是否會對下游COX2代謝途徑產生影響還需要進一步分析研究。因此，本研究還存在一定的不足之處，還需要在今后的研究中予以進一步補充和完善。

綜上所述，尿毒癥時高磷會通過局部環氧化酶2(COX2)途徑對甲狀旁腺細胞增生和功能亢進產生明顯的刺激，局部COX2異常代謝異常可能會導致尿毒癥患者出現甲狀旁腺細胞增生。

[1] Cunningham J,Locatelli F,Rodriguez M.Secondary hyperparathyroidism：pathogenesis，disease progression,and therapeutic options [J].Clin J Am Soc Nephrol,2011,6(4):913-912.

[2] Müller-Decker K,Fürstenberger G.The cyelooxygenase-2-mediated pmstaglandin signaling is causally related to epithelial carcinogenesis[J].Mol Carcinog,2007,46(8):705-710.

[3] 趙勁,陳曉玲,張俊峰,等.鹽酸司維拉姆對骨化三醇沖擊治療尿毒癥繼發性甲狀旁腺功能亢進患者血磷的影響[J].海南醫學,2012,23(18):37-38.

[4] 葛益飛,任海濱,劉佳,等.甲狀旁腺全切除加前臂移植術治療尿毒癥繼發性甲狀旁腺功能亢進癥[J].中華腎臟病雜志,2013,29(1):16-20.

[5] 陳麗君.血液透析濾過和血液灌流聯合血液透析對尿毒癥患者血清鈣磷及甲狀旁腺激素清除的影響[J].中國綜合臨床,2012,28(5):511-514.

[6] 馬錦華,唐曉虹,蘇振國,等.甲狀旁腺次全切除術治療尿毒癥繼發性甲狀旁腺功能亢進[J].實用醫學雜志,2011,27(11):2007-2009.

[7] 李建秋,李雪鋒,周薇薇,等.海螵蛸顆粒劑干預尿毒癥血透患者鈣磷代謝的臨床研究[J].中國中西醫結合腎病雜志,2012,13(3):246-247.

[8] 周亞偉.尿毒癥患者甲狀旁腺激素水平及鈣磷代謝紊亂與主動脈鈣化的相關性分析[J].齊齊哈爾醫學院學報,2013,34(17):2577-2578.

[9] Silver J,Kilav R,Naveh-Many T.Mechanisms of secondary hyperparathyreidism[J].Am J Physiol Renal Physiol,2002,283(3):F367-376.

[10]Bell CD,Vidal S,Kovacs K,etal.Cox-2 expression in the oxyphilic cells of the normal,hyperplastic,and adenomatous parathyroid gland[J].Endocr Pathol,2004,15(1):29-38.

[11]邱君思,張倩,盧燕雯,等.選擇性環氧化酶2抑制劑抑制尿毒癥大鼠甲狀旁腺異常增生[J].中華腎臟病雜志,2012,28(2):127-132.

[12]張倩.選擇性環氧化酶2下游通路mPGES1-PGE2-EP2在慢性腎衰竭甲狀旁腺異常增生中的作用研究[D].上海：復旦大學,2010.

[13]李紅芬,賈俊亞,閆鐵昆,等.III型鈉磷協同轉運子PiT-1在高磷飲食尿毒癥大鼠心肌損害中的作用[J].中華腎臟病雜志,2013,29(9):687-691.

[14]李海明,張倩,盧燕雯,等.高磷通過局部環氧化酶2途徑刺激尿毒癥患者甲狀旁腺細胞增生[J].中華腎臟病雜志,2012,28(1):5-9.

[15]Bourdean A,Soubcrbielle JC,Bonnet P,etal.Phospholipase-A2 action and araehidonic acid metabolism in calcium-mediated parathyroid hormone secretion[J].Endocrinology,1992,130(3):1339-1344.

(學術編輯：劉紅)

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作者投稿系統：http：//noth.cbpt.cnki.net

郵箱：xuebao@nsmc.edu.cn

Clinical research on high phosphorus stimulate uremia parathyroid cell hyperplasia

HONG Yan,SONG Dan

(RenalDepartment，WuxiNo.2People’sHospital,Wuxi214000,Jiangsu,China)

Objective：To explore the stimulating effect of uremia high phosphorus by topical cyclooxygenase 2(COX2) pathway of hyperthyroidism on proliferation and function of parathyroid cells.Methods：19 cases of parathyroid tissue of uremic patients underwent parathyroidectomy were selected to study.Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and the expression and distribution of COX2 were observed by immunohistochemistry and immuno CO staining method.And culture of human parathyroid cells in primary,after the normal and high phosphorus intervention,detection of the parathyroid hormone (iPTH) level;and the expression was observed in the COX2 and PCNA by Western blotting and real-time PCR method.Results：62 pieces of uremia parathyroid nodules were observed in the high expression of COX2 and PCNA positive cells.Primary culture in vitro of parathyroid cells,high phosphorus conditions.There is a significant increase in iPTH secretion,expression and the significant increase in PCNA and COX2 protein,gene.Conclusion：There is obvious stimulation of uremia high phosphorus will by topical cyclooxygenase 2 (COX2) pathway on proliferation and function of parathyroid cell hyperfunction.

Uremia;Parathyroid hormone;Cell proliferation;Hyperphosphatemia

10.3969/j.issn.1005-3697.2016.02.17

南京醫科大學科技發展基金面上項目(2013NJMU190)

2015-05-15

洪艷(1985-)，女，碩士，主治醫師。E-mail：hong1985yan@163.com

時間：2016-4-25 11∶31

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20160425.1131.034.html

1005-3697(2016)02-0208-03

R582+.1

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