我國豬源牛病毒性腹瀉病毒的感染現狀及檢測技術

祖立闖，李嬌，謝金文，李峰，沈志強，

（1.山東綠都生物科技有限公司，山東濱州256600；2.山東省濱州畜牧獸醫研究院，山東濱州256600）

我國豬源牛病毒性腹瀉病毒的感染現狀及檢測技術

祖立闖1，李嬌1，謝金文2，李峰2，沈志強1，2

（1.山東綠都生物科技有限公司，山東濱州256600；2.山東省濱州畜牧獸醫研究院，山東濱州256600）

牛病毒性腹瀉病毒的宿主范圍廣泛，除感染牛外，還可以感染豬、羊、鹿及其它野生動物。豬感染BVDV后會出現類似慢性豬瘟的臨床癥狀和病理變化，同時由于BVDV與豬瘟病毒的交叉反應性，BVDV還可降低豬瘟疫苗的免疫效果，豬群中BVDV的感染不但增加了BVD的防控難度，還使豬瘟的防控難上加難。筆者查閱相關文獻資料并結合自身多年臨床工作經驗，將我國豬源BVDV的發病概況以及常用檢測技術進行了全面的總結與概述，以期為我國豬源BVDV綜合防控措施的制定提供參考依據。

豬；牛病毒性腹瀉病毒；感染現狀；檢測技術

牛病毒性腹瀉（Bovine viral diarrhea,BVD）是由牛病毒性腹瀉病毒（Bovine viral diarrhea virus, BVDV）引起的多種動物易感的傳染病[1]。BVDV與豬瘟病毒、羊邊界病病毒同屬于黃病毒科（Flaviridae）瘟病毒屬（Pestivirus），三者具有免疫學交叉反應[2]。世界動物衛生組織將BVD列入必須報告的動物疾病名錄，但僅將其作為牛報告疾病名錄，這樣可能使人們忽略BVDV還可引起豬、羊、鹿以及其它野生動物等感染發病[3]。豬感染BVDV后表現出類似慢性豬瘟的臨床癥狀和病理變化，增加了臨床中豬瘟鑒別診斷的難度，且豬感染BVDV后產生的抗BVDV抗體對豬瘟病毒具有一定的抑制作用，對豬瘟疫苗的免疫產生干擾作用，降低豬瘟疫苗的免疫效果[4]，故豬群中BVDV的感染不但增加BVD的防控難度，還使豬瘟的防控難上加難。鑒于此，筆者查閱相關文獻資料并結合自身多年臨床工作經驗，將我國豬源BVDV的流行與發生情況以及常用檢測技術進行全面的總結與概述，以期為我國豬源BVDV綜合防控措施的制定提供參考。

1 病原特征

BVDV為單股、正鏈RNA病毒，在分類學上屬于黃病毒科瘟病毒屬，BVDV成熟的病毒粒子為球形或圓形顆粒，有囊膜，大小為40～60 nm。病毒基因組全長約12.5 kb，包含單一開放閱讀框（ORF），ORF兩側分別為5'-UTR和3'-UTR。根據5'-UTR序列，BVDV可分為BVDV-1和BVDV-2兩個基因型[5]。

2 我國BVDV發病情況

如表1所示，自從王新平等[6]于1995年在吉林成功分離鑒定出第一株豬源BVDV后，我國研究學者先后在廣西、山東、福建、青海等地感染的病例中陸續檢測出BVDV陽性核酸或分離鑒定出病毒，目前豬源BVDV已在我國養豬密集地區呈地方性發生與流行。

表1 我國部分地區BVDV發病情況

3 我國BVDV流行病學調查情況

如表2所示，自2004年至2014年豬源BVDV在我國不同地區豬群中的感染率在0～80.48%之間，表明豬源BVDV已在我國豬群中呈散發性、地方性流行，個別地區的陽性感染率較高，豬源BVDV在我國豬群中的流行現狀不容忽視，應加強重視。

表2 我國部分地區BVDV流行病學調查概況

4 檢測技術

豬感染BVDV后，表現出類似豬瘟的臨床癥狀和病理變化，且臨床中BVDV常與豬瘟病毒混合感染，僅憑臨床特征很難實現豬源BVDV與豬瘟病毒的鑒別診斷，故對于豬源BVDV的確診需借助實驗室診斷技術。隨著現代免疫學和分子生物學技術的快速發展與推廣應用，豬源BVDV的實驗室診斷技術得到了快速發展和完善，目前常用的豬源BVDV診斷技術主要有病毒分離鑒定、RT-PCR、熒光定量RT-PCR、ELISA等。

4.1 病毒分離鑒定

該方法是將疑似BVDV感染的臨床病料接種BVDV易感細胞，再通過細胞病變觀察、生物學特性鑒定、電鏡觀察、中和試驗、RT-PCR檢測、序列分析等方法對分離毒株進行鑒定。楊小燕等[9]采集福建省疑似豬瘟病毒感染的仔豬病料，將其接種MDBK細胞72 h后可產生明顯的細胞病變，該分離毒株可被BVDV陽性血清中和，對氯仿、乙醚、胰酶、酸敏感，不耐熱，RT-PCR可檢測出325 bp BVDV片段，該片段的核苷酸序列與BVDV NADL株標準種毒的同源性為89.02%，表明分離毒株為豬源BVDV。鄧宇等[8]將BVDV陽性仔豬病料樣品接種MDBK細胞，該毒株在MDBK細胞上盲傳至13代未出現細胞病變，在直接免疫熒光試驗中與BVDV陽性血清呈陽性反應，電鏡觀察顯示病毒粒子略呈圓形、有囊膜、直徑約50 nm，5'-UTR序列進化分析顯示病毒屬于BVDV-1型，表明成功分離鑒定1株豬源非致病變型BVDV-1。病毒分離鑒定方法一直是BVDV診斷方法的“金標準”，但該方法中涉及到細胞培養、電鏡觀察、RT-PCR等方法，試驗周期較長，操作較復雜，往往受到試驗條件和專業技術人員水平等限制。

4.2 RT-PCR方法

RT-PCR方法檢測快速、操作簡單、敏感性和特異性較高，是最常用的動物疫病快速確診技術，目前在BVDV的快速診斷中得到了推廣應用。朱紫祥等[19]建立的豬源BVDV PCR診斷方法檢測豬源BVDV、豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、PK15細胞，只有豬源BVDV為陽性，其余均為陰性，具有較高的特異性。鄧宇等[20]建立的豬源BVDV套式PCR檢測方法能從BVDV標準毒株、豬源BVDV毒株中擴增198 bp的特異性片段，擴增豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒均為陰性，敏感性可檢測到0.195 fg RNA模板量，具有敏感、特異和穩定等特點，可用于豬源BVDV的臨床診斷和流行病學調查。RT-PCR方法特異、靈敏、快速，適合于一般實驗室使用。

4.3 熒光定量RT-PCR方法

實時熒光定量PCR是在常規PCR技術基礎上發展起來的一種核酸定量檢測技術，與常規PCR方法相比具有能夠準確定量、敏感性更強、不需要核酸電泳等優點。鄧宇等[21]建立的豬源BVDV實時熒光定量PCR檢測方法檢測豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒均為陰性，最低可檢測到每個反應相當于10拷貝的標準品DNA，重復性試驗的批內變異系數為0.20%～0.95%，與常規RT-PCR方法的符合率為86.7%，具有特異、敏感、快速、重復性好等優點，可用于豬感染BVDV的監測。熒光定量RT-PCR方法能夠對樣品中的病毒核酸進行定量檢測，但該方法對儀器設備、試驗試劑、操作人員技術水平等要求均較高，一般實驗室由于受試驗條件限制較難開展。

4.4 ELISA方法

ELISA方法具有操作簡單、檢測快速、高通量、價格低廉、敏感性和特異性高等優點，成為當前動物疫病診斷中最常用的血清學檢測技術。曾亮明等[18]建立的豬源BVDV ELISA抗體檢測方法中最佳包被質量濃度為31.25 μg/L，最佳封閉液為10%馬血清，待檢血清的最佳稀釋度為1∶50，該方法檢測豬瘟病毒、偽狂犬病病毒、豬圓環病毒2型、豬繁殖與呼吸綜合征病毒陽性血清均為陰性，與中和試驗方法的符合率為97.9%，該方法特異性強、符合率高、重復性好，適合用于豬源BVDV的血清學抗體監測。ELISA方法簡單、快速、特異、敏感、經濟，非常適合于臨床大規模樣品的檢測。

5 結語

豬群中BVDV的感染增加了動物疫病流行的復雜化，對豬群危害很大。同時由于BVDV與CSFV的交叉反應性，以及BVDV感染與CSFV感染的臨床相似性，給豬瘟的診斷和防治提出了新的課題，增加了豬瘟綜合防控的難度，引起了研究學者的極度重視，尤其引起了已經消滅或控制了豬瘟國家的極大關注。豬感染牛病毒性腹瀉的原因很多，很重要的一點就是生物污染問題。一些豬瘟細胞疫苗的生產過程中使用大量的胎牛血清，制備血清的胎牛常常含有BVDV病原，在細胞的生產過程中，有些血清滅活不徹底導致BVDV在細胞生成，用這樣的細胞制備的豬瘟疫苗存在生物安全問題。此外，飼喂污染BVDV的飼料也可以成為豬源BVDV的感染來源，一些牛的臟器等廢料被加工成飼料，牛群中BVDV普遍存在，造成了BVDV的污染來源。豬源BVDV感染目前尚沒有較好的治療方法，只能采取以預防為主的綜合性防控措施，故全面掌握我國不同地區豬群中BVDV的感染現狀以及常規檢測技術對我國不同地區豬源BVDV綜合防控措施的制定至關重要。豬源BVDV已在我國豬群中呈散發性、地方性流行，個別地區的陽性感染率較高，其流行現狀不容忽視。豬源BVDV的幾種常規檢測技術各有優缺點，研究人員可根據不同地區豬源BVDV的感染情況以及自身試驗條件合理選擇其中的一種，或者選擇幾種聯合使用，務必確保診斷結果及時、準確，對于BVDV陽性感染豬應逐步淘汰、凈化，進而保障我國養豬業的健康、穩定與可持續發展。

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（編輯：郭玉翠）

讀書能讓人長壽

【英國《泰晤士報》網站8月5日報道】題：尋找長壽的新方式？選一本書試試吧

研究發現，愛讀書的人比不愛讀書的人具有明顯的“生存優勢”。而且他們似乎比愛看雜志或報紙的人更長壽。研究人員指出，在長達數百頁的閱讀過程中，讀者一直追隨作者的思路、人物或情節，而不會忘記誰是甘道夫或者為什么全世界的工人要聯合起來。這種“深度閱讀”所付出的智力努力讓大腦一直保持活躍，并幫助人們在未來的生活中更好地作出決定。

此外，書籍還能增強“同情心、社會認知和情商”。此前的研究表明，“同情心、社會認知和情商”與延長壽命有關，也許是因為它們可以緩解壓力。

耶魯大學的公共健康專家進行了一項長期調查，在過去11年中，他們跟蹤記錄了3 600名50歲以上男性和女性的健康與閱讀習慣。研究期間，超過1/4的研究對象死亡。研究表明，每天讀書的時間越長（哪怕只有半小時），壽命就越長。數據顯示，截至1/5的研究對象死亡時，愛讀書的人比不愛讀書的人平均壽命長近2歲。

這種效果也許是可以預期的，因為愛讀書的人往往更富有，教育程度也更高。因此，他們可能選擇更好的飲食、避免吸煙，并做一些有益健康的事。

不過，即使在研究人員將這些因素從數據中剔除后，愛讀書本身似乎仍能對健康產生顯著影響。

研究報告發表在英國《社會科學與醫學》月刊上。

（轉自參考消息[N]，2016-08-08）

S858.285.3

A

1002-1957(2016)05-0078-03

2016-07-14

山東省現代農業產業技術體系生豬創新團隊項目（SDAIT-06-022-15）

祖立闖（1981-），男，黑龍江賓縣人，助理研究員，碩士，主要從事動物疫病診斷技術研究.E-mail：zulichuang2008@126.com