北疆地區豬偽狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗體檢測與分析

劉鴿，于會舉，張培生，張倩，劉功成，屈勇剛，楊慧敏

（石河子大學動物科技學院，新疆石河子832003）

北疆地區豬偽狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗體檢測與分析

劉鴿，于會舉，張培生，張倩，劉功成，屈勇剛，楊慧敏

（石河子大學動物科技學院，新疆石河子832003）

為了解2014年2月至2016年4月新疆北疆地區豬偽狂犬病病毒野毒感染情況，試驗從北疆地區的17個規模化豬場（克拉瑪依、沙灣、石河子、瑪納斯4個不同區域）采集血樣932份，采用間接酶聯免疫吸附試驗（ELISA）法檢測豬偽狂犬病病毒gE蛋白抗體水平，結果發現有139份陽性血清，平均陽性率為14.91%。對4個不同區域PRV gE蛋白抗體分析發現，瑪納斯區域的平均陽性率最高，為18.27%。試驗對豬場的PRV gE蛋白抗體檢測呈陽性的個體進行分析發現，瑪納斯區域的陽性個體平均S/N值最大，為0.269 1。研究表明，雖然北疆地區PRV gE蛋白抗體陽性率較低，但各豬場普遍存在PRV，希望該試驗對北疆乃至全疆各豬場PR的預防和凈化工作有所幫助。

PRV；ELISA；抗體檢測；陽性率

豬偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）是引起豬偽狂犬病（Pseudorabies,PR）的病原。PR具有急性、熱性和高度接觸性傳染的特點，危害十分嚴重。豬是PRV的自然宿主，自然界中只有豬是該病毒的唯一宿主[1]，豬感染PRV后能引起腦脊髓炎癥、自身發熱，并且容易引起妊娠母豬流產和仔豬死亡，且仔豬死亡率非常高，達到有發病無一幸免的可怕程度[2]。PR在全球范圍內流行很廣，將該病從豬場根除難度很大，對養豬業的危害不容忽視[3]。國際獸醫局（OIE）將之列為B類動物傳染病，因為評定標準名稱不同，我國將之列為二類動物傳染病[4-5]。20世紀90年代，西方發達國家大多制定并啟動了根除PR計劃。在歐洲一些國家，常采用豬偽狂犬病病毒gE蛋白抗體ELISA（酶聯免疫吸附試驗）的檢測方法對待測豬進行監測，方便對豬群進行PR的預防和及時凈化豬場PRV[6-7]。目前，全球范圍內都在積極預防和凈化豬場的PRV。

由于南疆地區是少數民族聚集區，豬肉消費量相對較少，北疆地區養豬量占全疆養豬量的絕大部分，所以了解北疆地區的豬病情況對評估全疆的豬病有一定的參考價值。為了調查北疆地區豬群PRV野毒感染情況，本試驗在2014年2月至2016年4月期間內從北疆地區的17個規模化豬場（克拉瑪依、沙灣、石河子、瑪納斯4個不同區域）采集血樣932份，在新疆石河子大學動物科技學院動物傳染病實驗室用間接ELISA法檢測其抗體情況，希望對北疆乃至全疆各豬場PR預防和凈化工作有所幫助。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 血樣來源2014年2月至2016年4月從北疆地區的17個規模化豬場的不同類別豬（0～10 d、11～20 d、21～30 d仔豬，后備母豬，經產母豬，種公豬）中共采集血樣932份。

1.1.2 試驗儀器和材料豬偽狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗體檢測試劑盒（武漢科前生物生產，批號：20130101），微量移液器、恒溫培養箱、自動酶標儀（美國Bio Tek儀器有限公司生產），獸用采血器。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品采集用一次性獸用采血器從豬的前腔靜脈采血3~4 mL/頭，待血清析出，將采血器和血樣放到有冰袋的保溫箱內帶回實驗室處理。每份移取1 mL左右血清到滅菌的EP管（1.5 mL）中，一定要逐管準確對應標記，在離心機中離心（條件：4 000 r/min，時間為8~10 min），即刻檢測或放到-20℃冰箱中保存備用。放入冰箱備用的血清也要盡快對其檢測，避免時間過長而影響試驗結果。

1.2.2 豬偽狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗體檢測法嚴格按照豬偽狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗體檢測試劑盒使用說明書操作。在室溫條件下，將濃縮洗滌液搖動1~3 min，20倍稀釋。將待檢血清和對照血清各按1∶1稀釋。各取稀釋好的待檢血清和對照血清100 μL于包被板微孔中，陰、陽對照各設兩孔，37℃恒溫箱中孵育45 min后，抗原抗體結合，先洗滌再加酶標記物100 μL，37℃恒溫箱中孵育20 min，每孔各加50 μL底物A、B，室溫避光顯色15 min后，每孔加50 μL終止液，混勻后盡快（最好10 min內之內，時間過長會影響結果的準確性）測各反應孔中的OD630nm值，判定結果。

1.2.3 判定結果的標準用酶標儀測OD630nm值。本試驗成立的條件是陰性對照平均OD630nm值與陽性對照平均OD630nm值之差必須≥0.3。

S代表各樣品孔OD630nm值大小，N代表陰性對照各孔平均OD630nm值大小。

若S/N≤0.35，樣品判為gE抗體陽性；若0.4≥S/N＞0.35，樣品判為可疑；若S/N＞0.4，樣品判為gE抗體陰性。

1.2.4 統計分析用SPSS軟件、Excel軟件對試驗數據進行統計分析，計算gE抗體陽性率、可疑率、陰性率及平均S/N值。

2 試驗結果

2.14 個區域豬場的豬偽狂犬病病毒gE抗體陽性率、可疑率、平均S/N值

豬場A～D在克拉瑪依區域，E～I在沙灣區域，J～M在石河子區域，N～Q在瑪納斯區域。932份血清中檢出gE抗體陽性139份，陽性率14.91%；檢出可疑血清5份，可疑率為0.54%。豬場A~Q中，只有A、C、D、I、L場檢測出可疑血清，可疑率分別為1.43%、0.70%、5.00%、2.86%、1.32%，均小于10%。豬場A~Q的gE抗體陽性率依次為：14.29%、17.46%、10.56%、10.00%、12.00%、12.12%、17.86%、16.28%、8.57%、11.11%、25.00%、17.11%、18.42%、13.04%、21.43%、21.95%、16.67%，不難發現其中最大值為25%，最小值是8.57%。A~Q豬場的平均S/N值分別為：0.481 2、0.431 8、0.501 5、0.482 7、0.491 5、0.490 1、0.431 5、0.437 8、0.501 1、0.503 1、0.409 8、0.431 8、0.428 7、0.483 1、0.413 2、0.411 2、0.435 1，這些值都＞0.4，其中最大值為0.503 1，最小值為0.409 8。結果見表1。

表1 北疆地區豬偽狂犬病病毒gE蛋白抗體ELISA檢測結果

試驗不同區域的17個豬場的PRV gE蛋白抗體檢測平均陽性率：克拉瑪依13.08%，沙灣13.37%，石河子17.91%，瑪納斯18.27%。結果發現，瑪納斯的PRV gE蛋白抗體檢測平均陽性率最高，為18.27%；而石河子的僅次于瑪納斯，為17.91%；克拉瑪依的最低，為13.08%，但都高于10%。

不同的試驗區域豬場的平均S/N值為：克拉瑪依0.474 3，沙灣0.470 4，石河子0.443 4，瑪納斯0.435 7。可以發現，該4個區域的平均S/N值均＞0.4，且均<0.500 0，其中克拉瑪依和沙灣的平均S/N值較接近，分別為0.474 3、0.470 4，瑪納斯的平均S/N值最小，為0.435 7。

對北疆地區試驗豬場的PRV gE蛋白抗體檢測呈陽性的個體進行分析發現，其陽性個體平均S/N值：克拉瑪依與瑪納斯的結果相差較大，分別為0.225 8、0.269 1。對比發現，沙灣和石河子的陽性個體平均S/N值極為接近，分別為0.241 2和0.245 9；其中最大值在瑪納斯區域為0.269 1，但都小于0.300 0。結果見表2。

表2 北疆4個不同區域17個豬場的PRV gE蛋白抗體分析

2.2 試驗豬場不同類型豬群的PRV gE蛋白抗體水平

對北疆地區的17個規模化豬場PRV gE蛋白抗體檢測發現，PRV gE蛋白抗體平均陽性率為14.91%，試驗統計結果發現0～10 d、11～20 d、21～30 d仔豬，后備母豬，經產母豬，種公豬的PRV gE蛋白抗體陽性率依次為5.88%、7.06%、22.35%、26.88%、9.4%和5.06%。各類型豬群中，PRV gE蛋白抗體陽性率最低是種公豬群，為5.06%；PRV gE蛋白抗體陽性率最高的豬群是后備母豬，為26.88%，其次為21～30 d仔豬22.35%。該試驗統計結果如表3。

表3 各試驗豬場不同類型豬群PRV gE蛋白抗體水平

3 討論

3.1 北疆地區PRV gE蛋白抗體陽性率較低

用PRV gE蛋白ELISA抗體檢測試劑盒對采自北疆地區的932份血清進行檢測，發現有139份陽性血清，陽性率為14.91%，比張魯安在2005年報道的10.1%高[8]，而與張倩等在2013年對青島市的一些豬場檢測的15.42%接近[9]。所有試驗豬場中有3個豬場的PRV gE蛋白抗體陽性率高于20%，分別為25.00%、21.43%、21.95%，其余豬場的PRV gE蛋白抗體陽性率都小于20%，最低的為8.57%。PRV在新疆北疆地區的豬場普遍存在，并沒有哪個豬場的PRV gE蛋白抗體陽性率為0，這說明，雖然北疆地區PRV gE蛋白抗體陽性率較低，但各豬場PRV存在率為100%。

3.2 加強豬場管理和預防疾病工作，積極凈化豬場PR

從試驗結果發現，PR在北疆地區流行較廣，每個豬場都有PR野毒感染的情況。所以，應加強各規模化豬場的飼養管理和疾病預防工作，做好豬場的日常消毒工作，盡早并定期對豬群進行PR檢測，一年要進行2次，甚至更多，及時發現被PRV感染的豬，尤其是種母豬和種公豬被PRV感染時應及早淘汰。因為PRV可在豬群中橫向和垂直傳播，必須及早淘汰PRV感染豬，防止豬場健康豬群感染PRV。

3.3 用基因缺失苗對豬群進行免疫

目前，國內外有效果較好的基因缺失苗用于PR的免疫接種，常有PRV存在的豬場可以對豬群進行科學的全免，合理的免疫是預防PR的有效措施之一。免疫后，用PRV gE蛋白ELISA抗體檢測法評估豬群的免疫效果，及時淘汰感染PRV的豬和免疫耐受豬。

[1]白文彬，于康震.動物傳染病診斷學[M].北京：中國農業出版社，2002：70-45.

[2]殷震，劉景華.動物病毒學[M].第2版.北京：科學出版社，1997：329-340，998-1002.

[3]陳溥言.獸醫傳染病學[M].第5版.北京：中國農業出版社，1980：218-220.

[4]于大海，崔硯林.中國進出境動物檢疫規范[M].北京:中國農業出版社，1997：103-115.

[5]世界動物衛生組織.陸生動物診斷實驗和疫苗手冊[M].第5版.農業部獸醫局譯，2004：45-50.

[6]van nes A.Mathematieal modelling of Pseudorabies virus(syn. Aujeszk's disease virus)outhreaks aids eradieation programmes: a review[J].Vet Q,2001,23(1):21-26.

[7]Pensaert M,Labarque.Aujeszky's disease vaeeination and Differentiation of vaecinated from infectedpigs[J].Dev Biol(Basel), 2004,119:243-254.

[8]張魯安.新疆豬偽狂犬病流行病學調查及病毒株的分離鑒定[D].楊凌：西北農林科技大學，2005.

[9]張倩，楊培培，劉明團.青島地區豬偽狂犬病血清學調查[J].山東畜牧獸醫，2013（12）：53-54.

（編輯：柳青）

高強度有氧運動能延緩衰老

【英國《每日郵報》網站8月1日報道】題：耐力運動能減緩衰老嗎？

如果真有什么能鼓勵你去健身房，或許就是這個了。一項新研究稱，高強度有氧運動可以減緩衰老進程

隨著人逐漸變老，我們每條DNA鏈的保護性端粒會磨損和變短。但新研究發現，耐力訓練能保護這些端粒，讓它們逃離變短的命運。

研究結果顯示，此類體力活動能生成強化和延長端粒的化學物質，從而使我們能更長久地保持青春。這項研究由比利時的幾家機構開展，其結果發表在本月出版的英國《科學進展》雜志上。

研究人員讓10名志愿者騎健身車45分鐘。他們采集每名志愿者運動前后的血樣和肌肉活組織，然后在兩個半小時后再次采集。

研究人員分析結果后發現，一種導致端粒變長的酶的含量增加了。這意味著染色體（以及染色體內的DNA）能得到更好的保護。

我們的DNA被包裹在染色體內。每條染色體的兩端各有一個保護性端粒。在我們的一生中，細胞不斷分裂和復制。但在這個分裂過程中，端粒變短，能覆蓋的染色體區域變小。這導致我們的細胞開始老化和衰弱。最終，細胞分裂完全停止，我們走向死亡。

許多科學家還認為，有些人生來端粒較長，因此他們或許注定能活得更久。

在探尋如何保護染色體的行動中，此類研究—盡管是小規模的—為醫學界帶來了令人興奮的消息。

（轉自參考消息[N]，2016-08-04）

S858.285.3

A

1002-1957(2016)05-0100-03

2016-05-18

新疆石河子市農業科技攻關項目（2013NY04）

劉鴿（1986-），男，山東淄博人，在讀碩士研究生，主要從事動物傳染病的診斷與防治工作.E-mail:1539881644@qq.com

屈勇剛（1971-），男，陜西渭南人，副教授，主要從事動物傳染病診斷與防治工作.E-mail:quyonggang@shzu.edu.cn