豬原發(fā)性水皰病與塞尼卡病毒A

郭效珍，何啟蓋

（華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國家重點實驗室，湖北武漢430070）

豬原發(fā)性水皰病與塞尼卡病毒A

郭效珍，何啟蓋

（華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國家重點實驗室，湖北武漢430070）

自2007年加拿大發(fā)生豬原發(fā)性水皰病（PIVD）并認為與塞尼卡病毒A（Senecavirus A,SVA）有關(guān)，隨后巴西和美國先后暴發(fā)該病，其特征是感染豬可出現(xiàn)水皰性變化和新生仔豬死亡[1]。該病與口蹄疫（FMD）、豬水皰病（SVD）、豬水皰疹（VES）及水皰性口炎（VS）極為相似，臨床上很難區(qū)分[2]。在2016年國際豬病會議（IPVS）中成為討論交流的熱點疾病之一。本文簡要綜述了該病的研究現(xiàn)狀，希望對同行有幫助。

1 流行情況

豬原發(fā)性水皰病早前在澳大利亞、新西蘭和美國就有報道，但是直到2007年加拿大暴發(fā)PIVD，才將SVA與豬原發(fā)性水皰病聯(lián)系到一起。巴西和美國分別于2014年和2015年先后暴發(fā)該病[3]。

2015年初，巴西暴發(fā)SVA，對暴發(fā)該病的5個豬場進行調(diào)查，有的病豬發(fā)病第1周臨床癥狀表現(xiàn)為肌無力、昏睡、流涎、皮膚充血、神經(jīng)癥狀和腹瀉等，癥狀持續(xù)3～10 d。有的仔豬突然死亡，死亡率可達20%～30%。剖檢10頭突然死亡的仔豬發(fā)現(xiàn)，腎臟點狀出血、間質(zhì)性肺炎、舌和冠狀墊潰瘍、舌炎，組織學(xué)變化見膀胱尿路上皮細胞球狀變性等。比較有趣的是，神經(jīng)癥狀死亡的仔豬免疫組織化學(xué)方法（IHC）檢測發(fā)現(xiàn)，SVA分布于腦部脈絡(luò)層的上皮細胞和周圍血管內(nèi)皮細胞中，推測可能是通過改變血管上皮細胞的完整性，進而感染神經(jīng)脈絡(luò)層，隨后傳遞到相鄰的神經(jīng)纖維網(wǎng)從而導(dǎo)致神經(jīng)癥狀的產(chǎn)生。同時，IHC結(jié)果表明所有感染仔豬的尿道上皮細胞中均能檢測到SVA，提示尿液可能是該病的一種傳播方式和豬場感染的污染源。此外，IHC和RT-PCR鑒定發(fā)現(xiàn)SVA存在于腹瀉仔豬的腸道，表明SVA可以在腸道上皮細胞增殖。該研究表明，SVA是一種泛嗜性病毒，在感染早期造成多系統(tǒng)性疾病[4]。

自2015年7月，豬原發(fā)性水皰病在美國愛荷華州和南達科塔暴發(fā)，隨后在其它州市也有報道?；疾∝i臨床表現(xiàn)為，由于腳墊和蹄冠水皰破損而導(dǎo)致的急性跛行，伴隨食欲不振和發(fā)熱。眼觀病理變化主要表現(xiàn)為蹄冠充血、皮膚水皰破裂導(dǎo)致潰瘍，鼻口部和口腔產(chǎn)生水皰。愛荷華州立大學(xué)獸醫(yī)診斷實驗室檢測發(fā)現(xiàn)SVA陽性，而FMDV（口蹄疫病毒）、VSV（水皰性口炎病毒）和SVDV（豬水皰病病毒）陰性。

對美國和巴西發(fā)生水皰病和新生仔豬死亡的豬場，采集臨床樣品和環(huán)境樣品進行SVA檢測，包括豬群病變部位，環(huán)境中從人行通道、排氣扇等采集的拭子，鼠糞便及鼠小腸等，結(jié)果老鼠和蠅類飛蟲中都攜帶SVA，表明它們在SVA的傳播中發(fā)揮重要作用[5]。

2 臨床癥狀與病理學(xué)特點

SVA感染后豬只蹄部形成水皰（圖1，摘自Nestor Montiel等，EID，2016）。2015年巴西仔豬感染SVA后的病理變化（圖2，摘自Raquel A.Leme等，EID，2016），眼觀多灶點舌炎（圖2-A），蹄冠處形成潰瘍（圖2-B），病理組織學(xué)顯示舌上皮細胞球樣變性（標尺：20 μm）（圖2-C），膀胱尿路上皮細胞SVA陽性（圖2-D）（標尺：10 μm）。

圖1 美國SVA案例的病變

圖2 巴西SVA案例的病變

3 病毒特點

塞尼卡病毒A（SVA），原名塞尼卡谷病毒，是一種無囊膜的單股正鏈RNA病毒，屬于小RNA病毒科?；蚪M約7.2 kb，編碼4個結(jié)構(gòu)蛋白（VP1-4）和7個非結(jié)構(gòu)蛋白（2 A-C，3 A-D），其中VP1被公認為是小RNA病毒科免疫原性最強的蛋白[1]。

愛荷華州立大學(xué)獸醫(yī)診斷實驗室將SVA毒株VP1和全基因組測序發(fā)現(xiàn)，所有的新分離毒株之間同源性高達99%～100%，但是與早期SVA（1988—2001年）序列差異顯著。美國SVA毒株與巴西SVA毒株同源性達97%～98%。進化樹分析表明，SVA在近30年來已發(fā)生變異，致病性增強[2]。

2015年，我國廣東某豬場暴發(fā)了豬水皰性疾病，表現(xiàn)為感染豬只鼻部和口腔形成潰瘍，厭食、跛行，新生仔豬急性死亡，后證實是感染塞尼卡病毒A所致。從陽性病料中成功擴增獲得SVA全基因組，并命名為CH-01-2015，該病毒與其它8株分離自加拿大、巴西和美國的SVA同源性高達94.4%～97.1%，這是中國關(guān)于該病毒的首次報道[6]。

4 SVA病例的復(fù)制

根據(jù)科赫法則，分離到的SVA接種豬群可以成功復(fù)制PIVD。9周齡豬（29頭）鼻腔接種SVA15-41901 SD毒株（5×107pfu/頭），感染前5 d，對其中12頭豬（Dex-SVA）注射地塞米松，定期采集血清和水皰液進行PCR、SVA抗體檢測和病毒分離，分別于感染后2、4、6、8、10 d隨機選擇SVA感染豬進行剖檢。感染后3 d，所有豬只血清PCR檢測，SVA陽性，感染后5 d，取自水皰液處的棉拭子呈陽性。感染后5 d，剩余的27頭豬（感染后2 d已經(jīng)剖殺了2頭）中有24頭在蹄冠和趾間形成水皰，10 d后部分豬只下唇和鼻口部糜爛，而注射地塞米松的豬只呈現(xiàn)更為嚴重的水皰。間接免疫熒光試驗檢測顯示，所有豬只于感染后15 d血清抗體轉(zhuǎn)陽。水皰液中可以分離到SVA[3]。

5 病原檢測

5.1 PCR技術(shù)

SVA的診斷主要依靠PCR檢測與臨床病變相結(jié)合。PCR檢測包括常規(guī)PCR和實時熒光定量PCR兩種。PCR主要擴增VP1和VP3基因[7]。

5.2 新型RNA原位雜交技術(shù)

原位雜交技術(shù)可以檢測組織切片中特異的RNA或DNA序列。新型的原位雜交RNA-based顯色技術(shù)（RNAScope）與雜交信號放大系統(tǒng)相結(jié)合來檢測SVA。美國明尼蘇達大學(xué)獸醫(yī)診斷實驗室保存的30份SVA PCR檢測陽性，且由福爾馬林固定的石蠟包埋組織。樣本取自發(fā)生水皰病的母豬和急性死亡的仔豬。探針靶向SVA的VP1基因。雜交信號呈現(xiàn)紅色，隨后蘇木精復(fù)染。同時設(shè)立10份陰性對照。水皰病組織檢測結(jié)果顯示，SVA存在于患病母豬的表皮組織，主要位于表皮棘細胞層，小泡性損傷。對于新生仔豬急性死亡案例檢測結(jié)果顯示，皮膚、脾臟、肝臟、心臟、小腸和淋巴結(jié)ISH-RNA檢測均呈陽性，對照組檢測陰性。雖然PCR和ISH-RNA檢測均呈陽性，但是急性死亡仔豬呈現(xiàn)的唯一病理變化就是壞死性舌炎，且該部位可以檢測到SVA。ISH-RNA是用于SVA快速診斷的一個有效手段[8]。

綜上所述，SVA與最近豬場暴發(fā)的PIVD關(guān)系密切，臨床上與給養(yǎng)豬生產(chǎn)造成巨大威脅的FMD癥狀極為相似，所以在對臨床上出現(xiàn)水皰為特征的疾病檢測時，應(yīng)將SVA與FMD、SVD、VES及VS作鑒別診斷。

[1]Gimenez-Lirola L G,Rademacher C,Linhares D,et al.J Clin Microbiol[J],2016,54(8):2082-2089.

[2]Guo B,Rademacher C,Zheng Y,et al.Yoon Identification of novel Senecavirus A from pigs with vesicular disease in the US[C].24th International Pig Veterinary Society Congress(IPVS),2016:109.

[3]Montiel N,Buckley A,Guo B,et al.Vesicular Disease in 9-weekold Pigs Experimentally Infected with Senecavirus A[C].24th International Pig Veterinary Society Congress(IPVS),2016:110.

[4]Leme R A,Oliveira T E,Alcantara B K,et al.Emerg Infect Dis[J],2016,22(7):1238-1241.

[5]Joshi L R,Mohr K A,Clement T,et al.J Clin Microbiol[J], 2016,54(6):1536-1545.

[6]Wu Q,Zhao X,Chen Y,et al.Genome Announc[J],2016,4(1): e01509-15.

[7]Bracht A J,O'Hearn E S,Fabian A W,et al.PLoS One[J], 2016,11(1):e0146211.

[8]Resende T,Marthaler D,Vannucci F,et al.Novel RNA-based in situ hybridization for detection of Senecavirus A in pigs[C]. 24th International Pig Veterinary Society Congress(IPVS), 2016:109.

（編輯：柳青）

S858.285.3

A

1002-1957(2016)05-0061-02

2016-07-28

國家生豬現(xiàn)代產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系（CARS-36）

郭效珍（1989-），女，山東濰坊人，在讀博士研究生，主要從事豬傳染病診斷與致病機制研究. E-mail:guoxiaozhen@webmail.hzau.edu.cn

何啟蓋，教授，博士生導(dǎo)師.E-mail:he628@mail.hzau.edu.cn