傳染性喉氣管炎病毒gD蛋白多克隆抗體制備與運用

張曉彩，趙妍，張雪梅，劉勝旺

（中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所，獸醫生物技術國家重點實驗室，禽呼吸道病創新團隊，哈爾濱 150001）

傳染性喉氣管炎病毒gD蛋白多克隆抗體制備與運用

張曉彩，趙妍，張雪梅，劉勝旺*

（中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所，獸醫生物技術國家重點實驗室，禽呼吸道病創新團隊，哈爾濱 150001）

雞傳染性喉氣管炎（Infectious laryngotracheitis，ILT）是由傳染性喉氣管炎病毒（Infectious laryngotracheitis virus，ILTV）引起的一種急性接觸性上部呼吸道病。ILTV表面糖蛋白gD能刺激機體產生良好體液和細胞免疫應答，編碼該蛋白的gD基因是ILTV主要抗原性基因之一。以ILTV-LJS09株基因組為模板，PCR擴增gD基因主要抗原區域（54～344 aa）及gD基因，分別亞克隆至pGEX-6P-1和pCAGGS載體，構建原核表達載體pGEX-6P-1-gD163/1032和真核表達載體pCAGGS-gD。利用純化ILTV、原核表達純化獲得重組蛋白r-gD和真核質粒pCAGGS-gD，對新西蘭大白兔進行免疫與加強免疫，制備兔抗ILTV gD多克隆抗體。通過間接免疫熒光試驗確定ILTV gD多克隆抗體和ILTV感染的雞肝癌細胞表達蛋白發生反應，表明制備的ILTV gD多克隆抗體能識別ILTV天然抗原表位，最佳稀釋度為1 ? 1 000；用ILTV感染的LMH細胞培養物進行Western Blot分析，在40 ku左右出現一條特異性條帶，與預期ILTV gD蛋白大小相符。激光共聚焦定位感染雞肝癌細胞中ILTV gD蛋白，發現ILTV gD蛋白主要表達于感染細胞胞漿及融合細胞交界處。

ILTV gD蛋白；原核表達與純化；真核表達；多克隆抗體；細胞定位

張曉彩,趙妍,張雪梅,等.傳染性喉氣管炎病毒gD蛋白多克隆抗體制備與運用[J].東北農業大學學報,2016,47(5):69-75.

Zhang Xiaocai,Zhao Yan,Zhang Xuemei,et al.Preparation of polyclonal antibodies against gD protein of ILTV and application[J].Journal of Northeast Agricultural University,2016,47(5):69-75.(in Chinese with English abstract)

雞傳染性喉氣管炎（Infectious laryngotracheitis，ILT）是由雞傳染性喉氣管炎病毒（Infectious laryngotracheitis virus，ILTV）引起的一種急性呼吸道傳染病[1]。……