白曲霉酸性蛋白酶在黑曲霉中表達

李杰，吳婷，馬南，王欣，楊建樂，李健友，張會

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，哈爾濱 150030）

白曲霉酸性蛋白酶在黑曲霉中表達

李杰，吳婷，馬南，王欣，楊建樂，李健友，張會

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，哈爾濱 150030）

研究分析固態(tài)發(fā)酵酸性蛋白酶生產(chǎn)菌株及其產(chǎn)品，ITS序列鑒定結(jié)果表明，該菌株為曲霉屬，質(zhì)譜分析結(jié)果表明其產(chǎn)品為Aspergillus saitoi酸性蛋白酶Aspergillopepsin I（EC.3.4.23.18）。根據(jù)Aspergillus saitoi酸性蛋白酶Aspergillopepsin I基因序列pep1（GI：473517）設(shè)計引物，以固態(tài)發(fā)酵酸性蛋白酶生產(chǎn)菌株基因組DNA為模板，利用PCR技術(shù)擴增獲得pep1基因。序列分析結(jié)果表明，擴增片段與白曲霉Aspergillus kawachii酸性蛋白酶基因組序列相似性為99%，其編碼蛋白與白曲霉Aspergillus kawachii酸性蛋白酶（GAA90749.1）相似性為100%，將該基因命名為pepB。構(gòu)建黑曲霉表達載體pSZHG-pepB，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化黑曲霉CICC2462，篩選得到在glaA位點發(fā)生同源重組純合轉(zhuǎn)化子。經(jīng)搖瓶發(fā)酵后，對產(chǎn)物進行SDS-PAGE、酶活檢測以及酸性蛋白酶酶學(xué)性質(zhì)和酶穩(wěn)定性研究。結(jié)果表明，純合同源重組菌株經(jīng)SDS-PAGE檢測時在47 ku左右處有明顯目的蛋白條帶，其發(fā)酵產(chǎn)物酸性蛋白酶酶活達5 543 U·mL-1，為出發(fā)菌株152倍。對菌株所產(chǎn)酸性蛋白酶酶學(xué)性質(zhì)研究發(fā)現(xiàn)，該酶最適反應(yīng)溫度為50℃，最適反應(yīng)pH 3.0，在4℃和25℃條件下，酶在pH 3.0～4.0時較穩(wěn)定。

酸性蛋白酶；黑曲霉；同源重組；分泌表達

李杰,吳婷,馬南,等.白曲霉酸性蛋白酶在黑曲霉中表達[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2016,47(5):29-35.

Li Jie,Wu Ting,Ma Nan,et al.Expression of acid protease fromAspergillus kawachiiinAspergillus niger[J].Journal of Northeast Agricultural University,2016,47(5):29-35.(in Chinese with English abstract)

酸性蛋白酶主要源于動物器臟(胃蛋白酶等)和微生物分泌，能在較低pH（最適pH 2.0～4.0）環(huán)境中將蛋白質(zhì)水解為氨基酸和小肽酶類[1-3]。酸性蛋白酶潛能開發(fā)受到關(guān)注?！?br>