豬血清中葡萄糖轉運蛋白2發育性變化研究

楊雪梅，顧以韌，曾凱，陶璇，梁艷，楊躍奎，鐘志君，陳曉暉，呂學斌

（1.四川省畜牧科學研究院，四川成都610066；2.動物遺傳育種四川省重點實驗室，成都610066）

遺傳育種

豬血清中葡萄糖轉運蛋白2發育性變化研究

楊雪梅1，2，顧以韌1，2，曾凱1，2，陶璇1，2，梁艷1，2，楊躍奎1，2，鐘志君1，2，陳曉暉1，2，呂學斌1，2

（1.四川省畜牧科學研究院，四川成都610066；2.動物遺傳育種四川省重點實驗室，成都610066）

采用ELISA（酶聯免疫吸附試驗）方法檢測了不同體重梯度的川藏黑豬配套系和杜長大豬血清中葡萄糖轉運蛋白2的含量變化，并分析其與肌內脂肪含量的關系。結果表明：川藏黑豬在90 kg、110 kg和130 kg體重時血清中的葡萄糖轉運蛋白2含量分別為56.33、54.51和54.28 μg/L，肌內脂肪含量分別為3.72%、4.41%和4.96%；杜長大豬血清中的葡萄糖轉運蛋白2含量則分別為47.28、49.11和47.82 μg/L，肌內脂肪含量分別為2.00%、2.50%和2.61%，葡萄糖轉運蛋白2相同豬種不同體重間和110 kg、130 kg體重不同豬種間差異均不顯著，90 kg體重不同豬種間差異顯著（0.01＜P＜0.05）。相關性分析顯示，葡萄糖轉運蛋白2與肌內脂肪含量呈極顯著正相關（P＜0.01），提示葡萄糖轉運蛋白2可能是通過血液來實現對豬肌內脂肪的整體調控。

川藏黑豬配套系；杜長大豬；肌內脂肪含量；葡萄糖轉運蛋白2

葡萄糖是大多數生物獲取能量的主要來源。維持血糖穩定對于哺乳動物的代謝和內環境穩定來說至關重要。所有組織中，尤其是大腦細胞，需要葡萄糖的持續穩定供應，如果血液中葡萄糖濃度過低就會引起驚厥，喪失意識等反應，嚴重的話可能引起腦部不可逆的損傷[1]。大多數的哺乳動物細胞通過協同擴散的方式來轉運糖類，葡萄糖轉運蛋白家族蛋白參與這一過程，它是一類介導葡萄糖攝取的膜蛋白。肌內脂肪含量是豬肉嫩度和食用品質的重要決定因素，豬肉產品中大部分的揮發性風味成分如直鏈醛、醇、烴和酮類也主要是由肌內脂肪加熱時產生的[2]，是衡量豬肉品質的一個重要指標。

本研究以四川省畜牧科學研究院培育的優質豬配套系—川藏黑豬和瘦肉型的杜長大豬為研究對象，采用ELISA（酶聯免疫吸附試驗）方法測定其90 kg、110 kg和130 kg體重梯度時血清樣本中葡萄糖轉運蛋白2含量，并研究其含量與肌內脂肪含量的關系，以揭示不同豬種血清中葡萄糖轉運蛋白2的發育性變化規律及其對肌內脂肪沉積的影響。

1 材料和方法

1.1 試驗動物及采樣

試驗豬采用的川藏黑豬配套系以及外三元杜長大豬均由四川省畜牧科學研究院科研實驗豬場提供，于2013年在四川省畜牧科學研究院科研實驗豬場進行試驗。隨機挑選川藏黑豬和杜長大豬各12頭（每個梯度4頭），共計24頭，設置90 kg、110 kg和130 kg 3個體重梯度。所有試驗豬于同一時間開始組建群體，35日齡斷奶，采用相同營養水平和飼喂方式，達到要求體重時進行屠宰，屠宰前停食24 h，自由飲水。采集前腔靜脈血，室溫放置15 min后離心10 min，吸取血清。采集倒數3～4肋骨間對應處的背最長肌樣品進行肌內脂肪含量測定。

1.2 肌內脂肪含量測定

屠宰后采集倒數3～4肋骨間背最長肌樣品10 g左右，樣品處理和操作嚴格按照豬肌肉品質測定技術規范（NY/T 821—2004）進行，采用全自動快速索氏抽提儀（瑞士，Buchi）進行抽提，抽提儀程序設置為萃取2 h，淋洗5 min，干燥20 min。每個樣品重復2次。

1.3 ELISA測定葡萄糖轉運蛋白2含量

血清中葡萄糖轉運蛋白2含量的測定嚴格按照豬葡萄糖轉運蛋白2 ELISA試劑盒操作說明進行：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔和待測樣品孔，在酶標包被板上標準品孔中準確加樣50 μL，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40 μL，然后再加待測樣品10 μL（樣品最終稀釋度為5倍），用封板膜封板后置37℃溫育30 min，小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 s后棄去，如此重復5次，拍干。加入酶標試劑50 μL（空白孔除外），37℃溫育30 min，再洗板5次后分別加入顯色劑A和B各50 μL，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 min后加終止液50 μL，終止反應（此時藍色立刻轉為黃色）。在加終止液后15 min內用450 nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值），每個樣品做3個重復。以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

1.4 統計分析

運用Excel進行數據的統計分析，結果以平均數±標準誤表示，均數間的比較用SPSS 13.1的TTest和Pearson Correlation程序進行顯著性和相關性分析。

2 結果與分析

2.1 肌內脂肪含量

由表1可知，同一品種不同體重梯度間，肌內脂肪含量隨著屠宰體重的增加而升高。川藏黑豬90 kg、110 kg和130 kg體重梯度時的肌內脂肪含量分別為3.72%、4.41%和4.96%，其中90 kg與110 kg梯度間肌內脂肪含量差異達顯著水平（P＜0.05），與130 kg梯度間肌內脂肪含量差異極顯著（P＜0.01），而110 kg與130 kg梯度間肌內脂肪含量差異不顯著（P＞0.05）；杜長大豬90 kg、110 kg和130 kg梯度時肌內脂肪含量分別為2.00%、2.50%和2.61%，各體重梯度間肌內脂肪含量差異均不顯著（P＞0.05）。相同體重梯度不同豬種間，90 kg和110 kg梯度時的兩豬種間的肌內脂肪含量差異均達顯著水平（P＜0.05），而130 kg梯度時兩豬種間肌內脂肪含量差異極顯著（P＜0.01）。

表1 川藏黑豬和杜長大豬不同體重梯度的肌內脂肪變化

2.2 葡萄糖轉運蛋白2含量

由表2可知，川藏黑豬90 kg、110 kg和130 kg梯度時的葡萄糖轉運蛋白2含量分別為56.33、54.51和54.28 μg/L，杜長大豬90 kg、110 kg和130 kg的葡萄糖轉運蛋白2含量分別為47.28、49.11和47.82 μg/L，品種內不同體重梯度間差異均不顯著（P＞0.05）。不同豬種間，葡萄糖轉運蛋白2含量在90 kg體重梯度時均表現為川藏黑豬高于杜長大豬，差異顯著（0.01＜P＜0.05），110 kg和130 kg體重間差異不顯著。

表2 川藏黑豬和杜長大豬不同體重梯度的葡萄糖轉運蛋白2變化

2.3 葡萄糖轉運蛋白2水平與肌內脂肪含量的相關性分析

相關性分析表明，葡萄糖轉運蛋白2水平與肌內脂肪含量的Pearson相關系數為0.584（表3），呈極顯著正相關（P＜0.01）。

表3 葡萄糖轉運蛋白2與肌內脂肪含量的相關性分析（n=4）

3 討論

3.1 肌內脂肪含量對肉質的影響

肉質受很多因素的影響，其中肌內脂肪含量對肉的感官品質、加工品質、營養品質以及風味的影響較為顯著，是肉質的重要決定因素之一。肌內脂肪在一定的含量范圍內，肌肉中的脂肪越多，則肉的多汁性越好[3]。先前的研究表明，中國地方豬種與外種豬相比具有肉質優勢一個重要原因就是肌內脂肪含量更加豐富，一般高出2個百分點左右[4]。而在不同豬肉的專家小組主觀評定中，含有我國地方豬種血緣的雜種豬肉更加細嫩多汁、鮮香味濃，口感優于外種豬[5]。川藏黑豬配套系是四川省畜牧科學研究院采用現代遺傳育種技術，利用國內外兩類優質遺傳資源培育而成的優質豬配套系。本研究結果顯示兩豬種的肌內脂肪含量均隨體重的增加而升高，川藏黑豬配套系的肌內脂肪沉積能力顯著高于杜長大豬，表明川藏黑豬配套系的口感和風味比杜長大豬更佳，肉質更好。

3.2 葡萄糖轉運蛋白2含量對肌內脂肪沉積的影響

肌內脂肪沉積是反映豬肉質優良的一個重要指標，本研究就肌內脂肪含量與葡萄糖轉運蛋白2的關系進行研究發現，豬血清中的葡萄糖轉運蛋白2含量在相同豬種不同體重梯度間無顯著差異，在不同豬種間，表現為川藏黑豬的葡萄糖轉運蛋白2水平高于杜長大豬，在90 kg體重梯度時差異顯著，110 kg、130 kg體重梯度時差異不顯著，與此相對應的是川藏黑豬配套系的肌內脂肪含量高于杜長大豬，相關性分析表明，豬葡萄糖轉運蛋白2水平與肌內脂肪含量呈正相關（P=0.584）。葡萄糖轉運蛋白2對脂肪代謝具有重要的調控功能，無論體內或體外的試驗均證明，血液循環中游離脂肪酸對葡萄糖刺激的胰島素分泌有重要的作用，游離脂肪酸升高會增加葡萄糖刺激的胰島素分泌，因此，葡萄糖轉運蛋白2能間接反映豬肌內脂肪含量。我們推測川藏黑豬配套系和杜長大豬的肌內脂肪沉積受到血液中的葡萄糖轉運蛋白2的調控，也說明豬肌內脂肪的沉積與其在血清中含量密切相關。

本研究通過對不同豬種血清中葡萄糖轉運蛋白2水平的發育性變化及其與肌內脂肪沉積關系的研究，初步揭示了葡萄糖轉運蛋白2可能通過血液完成對豬肌內脂肪沉積的調控，為深入研究豬脂肪沉積能力的形成機理提供了基礎數據，并有助于促進對人類肥胖的研究。

[1]江誠，謝俊，陳海峰.葡萄糖轉運蛋白的轉運機制研究[J].基因組學與應用生物學，2015，34（7）：1372-1377.

[2]黃業傳，賀稚非，李洪軍，等.皮下脂肪和肌內脂肪對豬肉風味的作用[J].中國農業科學，2011，44（10）：2118-2130.

[3]陳國順.子午嶺野家雜種豬和合作豬肉質特性比較及風味揮發性成分的提取與分析[D].甘肅：甘肅農業大學，2004.

[4]張永泰.中國地方豬種的肉質優勢[J].養豬，2003（2）：50.

[5]孫玉民，羅明.畜禽肉品學[M].濟南：山東科學技術出版社，1993：300.

（編輯：郭玉翠）

午睡不宜超過40分鐘

【俄羅斯連塔網3月24日報道】題：午睡超過40分鐘對健康不利

午睡時間過長可能導致代謝綜合征，例如胰島素敏感性下降。美國醫學研究人員將在第65屆美國心臟病學會年會上通報上述研究結果。

午睡超過40分鐘將大大增加與代謝紊亂相關的疾病的發病率，導致血壓、血糖和膽固醇水平上升，使腰部更容易堆積脂肪。

醫學專家通過對21次試驗的結果進行綜合分析，得出了白天過于疲倦或嗜睡與代謝紊亂有關的結論。這21次試驗總計有307 237名亞洲人和歐洲人參加，是該領域全球范圍內規模最大的一次研究。

專家們想知道試驗參加者是否午睡、午睡時間多長，隨后將收集到的數據與反映人體健康狀況的醫學資料（2型糖尿病和肥胖癥等代謝綜合征患者的病史）相比較。

結果顯示，午睡時間與患代謝綜合征的風險存在關聯。午睡時間少于40分鐘的人，患代謝綜合征的幾率較低；午睡時間超過1.5小時的人，患這類疾病的幾率提高50%。（不過，午睡時間少于30分鐘的人，患代謝綜合征的幾率降低得并不明顯。）

本次研究并未發現午睡時長與肥胖之間有直接關聯。但既然午睡時長與出現代謝綜合征的風險有關聯，而代謝綜合征與肥胖有關聯，這就意味著午睡時間過長可間接引起肥胖。

此前，醫學專家也曾發現，午睡時間超過1小時會加大罹患心血管疾病和糖尿病的風險。

（轉自參考消息[N]，2016-03-25）

The Research on Developmental Changes of Glucose Transporter Type 2 in Serum of Pigs

YANGXuemei1，2,GUYiren1，2,ZENGKai1，2,TAOXuan1，2,LIANGYan1，2,YANGYuekui1，2, ZHONGZhijun1，2,CHENXiaohui1，2,LVXuebin1，2
(1.Sichuan Animal Science Academy,Chengdu 610066,China; 2.Animal Breeding and Genetics Key Laboratory of Sichuan Province,Chengdu 610066,China)

Detect the glucose transporter type 2 content of Chuanzang Black Swine Hybrid and DLY pigs by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)and analyze its relationship with intramuscular fat content.The results showed that the glucose transporter type 2 content of Chuanzang Black Swine Hybrid of 90 kg,110 kg,130 kg bodyweight respectively were 56.33 μg/L,54.51 μg/L and 54.28 μg/L,and intramuscular fat content respectively were 3.72%,4.41%and 4.96%;glucose transporter type 2 content of DLY respectively were 47.28 μg/L,49.11 μg/L and 47.82 μg/L,and intramuscular fat content respectively were 2.00%,2.50%and 2.61%.There was no significant difference in different bodyweight of the same breeds and different breeds of the same bodyweight（110 kg,130 kg）of glucose transporter type 2(P＞0.05).There was significant difference of the different breeds of 90 kg bodyweight（0.01＜P＜0.05）.Correlation analysis showed that glucose transporter type 2 and intramuscular fat content had a significant positive correlation,which prompt glucose transporter type 2 may be achieved the overall regulation of intramuscular fat through blood.

Chuanzang Black Swine Hybrid;DLY;intramuscular fat content;glucose transporter type 2

S828

A

1002-1957(2016)03-0065-03

2016-04-20

四川省科技計劃項目（2014NZ0092）；四川省基本科研業務費專項資金（SASA2013A03）；四川省基本科研業務費專項資金（SASA2013B02）；國家生豬產業技術體系-綜合試驗站（CARS-36）；四川省財政運行專項（SASA2014CZYX001）

楊雪梅（1981-），女，四川閬中人，助理研究員，碩士，研究方向為豬的遺傳育種.E-mail：544859309＠qq.com

呂學斌（1965-），男，研究員，博士，研究方向為豬的遺傳育種.E-mail：lvxuebin＠21cn.com