一起豬瘟的診治

魏鳳，張文通，李峰，王金良，苗立中，劉吉山，沈志強，

（1.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東濱州256600；2.山東省畜禽用蜂膠疫苗研究開發(fā)推廣中心，濱州256600；3.山東綠都生物科技有限公司，濱州256600）

一起豬瘟的診治

魏鳳1，2，張文通3，李峰1，王金良1，苗立中1，劉吉山1，沈志強1，3

（1.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東濱州256600；2.山東省畜禽用蜂膠疫苗研究開發(fā)推廣中心，濱州256600；3.山東綠都生物科技有限公司，濱州256600）

豬瘟（Classical Swine Fever,CSF）是由豬瘟病毒（Classical Swine Fever Virus,CSFV）引起的一種豬的急性、熱性、高度接觸性病毒傳染病。未免疫豬群表現(xiàn)發(fā)熱、厭食、腹瀉與便秘相間，衰竭、死亡等典型癥狀；免疫豬群出現(xiàn)無癥狀或癥狀不明顯的亞臨床感染。豬瘟的特征性病理變化為淋巴結周邊出血、脾臟邊緣性出血性梗死、腎臟密集出血點、盲腸和結腸部位出現(xiàn)“紐扣狀”潰瘍等。針對該病我國雖然采取了廣泛的免疫措施并取得了比較好的效果，但由于個別疫苗質(zhì)量把關不嚴、豬瘟病毒變異等因素影響，該病仍在全國范圍內(nèi)流行[1-4]。2016年1月，山東某養(yǎng)豬場20日齡左右仔豬發(fā)生了疑似豬瘟病例，現(xiàn)將診斷過程介紹如下。

1 發(fā)病情況

2016年1月初山東某養(yǎng)豬場20日齡左右仔豬發(fā)生了以淋巴結出血、脾臟邊緣出血、腎臟點狀出血、腸道出血、喉頭出血等為病理特征的病例。該豬場同圈仔豬發(fā)病率100%，死亡率25%。豬場母豬一年免疫兩次豬瘟疫苗，仔豬未免疫豬瘟疫苗。

2 臨床癥狀

患病仔豬主要表現(xiàn)體溫升高，在41℃左右；厭食或食欲減退；嗜睡；個別仔豬顫抖等。

3 病理變化

剖檢病死仔豬發(fā)現(xiàn)：淋巴結出血、脾臟邊緣出血、腎臟點狀出血、腸道出血、喉頭出血等組織器官病變。

4 實驗室診斷

4.1 病料處理

取病死仔豬扁桃體、脾臟、淋巴結組織。將采集的病料剪碎，添加3倍滅菌生理鹽水，用勻漿器研磨制成懸液；懸液反復凍融3次；低速離心取上清液。上清液-80℃冰箱凍存?zhèn)溆谩?/p>

4.2 病毒RT-PCR鑒定

4.2.1 引物設計根據(jù)GenBankAY663656的mRNA序列，利用Prime 5.0軟件，設計擴增長度約1 065 bp的CSFV E2基因。引物合成單位為生工生物工程（上海）股份有限公司。擴增CSFV E2的引物序列如下。

上游引物：5′-ATGGTAACTGGGGCACAAGG-3′；下游引物：5′-TCACACCACCAAGACAACAA-3′。

4.2.2 病毒RNA基因組提取Trizol法提取病毒RNA。詳細操作方法如下：上述4.1中-80℃凍存的上清液為提取病毒RNA基因組的樣本；取1.5 mL EP管（注：提取RNA所用到的EP管均需DEPC處理）1個，先加入250 μL上清液，再加入750 μL Trizol試劑，渦旋混勻，室溫靜置5 min；再加入200 μL氯仿，然后上下顛倒搖動數(shù)次，室溫靜置10 min；以4℃12 000 r/min離心10 min；取上層液體400 μL加入至另一新的1.5 mL EP管中，再加入異丙醇（預冷的）200 μL，混勻于-20℃放置30 min；以4℃12 000 r/min離心10 min；棄上清液，用75%乙醇溶液（預冷的）洗滌沉淀；以4℃12 000 r/min離心10 min；棄上清液，將該EP管放置室溫或37℃溫箱干燥10 min；加入30 μL含DEPC的滅菌水，得到的溶液即為病毒的RNA基因組。

4.2.3 病毒的RT-PCR反轉(zhuǎn)錄步驟為：取1.5 mL EP管（注：提取RNA所用到的EP管均需DEPC處理）1個，加入RNA提取物10 μL、下游引物（20 μmol/L）2 μL，70℃水浴10 min；取出后再加入5× first stand buffer 4 μL、dNTP（10 mmol/L）3 μL、MMLV酶1.0 μL，放置42℃水浴60 min；取出后放置70℃水浴15 min，得到的溶液即為cDNA。

PCR體系：cDNA 4 μL、上游引物（20 μmol/L）和下游引物（20 μmol/L）各0.5 μL、10×PCR Buffer 2.5 μL、dNTP（10 mmol/L）1.0 μL、滅菌水16.5 μL。

PCR反應程序：94℃3 min、94℃45 s、55℃45 s、72℃1 min，35個循環(huán)，72℃10 min。

PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳：將PCR產(chǎn)物用瓊脂糖凝膠（濃度為1%）電泳檢測。電泳結果與設計擴增大小片段相符（設計片段大小為1 065 bp）。結果見圖1。

圖1 豬瘟病毒的RT-PCR

回收該RT-PCR產(chǎn)物，連接到pMD-T載體，然后送往生工生物工程（上海）股份有限公司進行測序。將測序的核苷酸序列在NCBI里進行Blast。結果顯示與豬瘟病毒毒株同源性最高達99%。

5 治療及體會

（1）采取隔離措施。禁止發(fā)病舍與其他舍之間人和物的流動。

（2）消毒措施。對發(fā)病舍及四周進行嚴格消毒。

（3）緊急接種措施。對發(fā)病舍及整個豬場豬群緊急接種正規(guī)廠家豬瘟高效細胞苗（發(fā)病舍每頭接種4頭份，其他豬群每頭接種2頭份）。間隔2周再加強免疫1次（按照豬瘟高效細胞苗使用說明書推薦劑量進行免疫）。

（4）對發(fā)病仔豬肌肉注射正規(guī)廠家生產(chǎn)的黃芪多糖和長效土霉素（按照藥物說明書使用）。

通過采取上述措施，兩周后豬場發(fā)病仔豬死亡率已大幅下降，僅零星死亡。發(fā)病仔豬食欲及飲欲明顯得到好轉(zhuǎn)。

該豬場母豬曾1年2次用豬瘟脾淋苗進行豬群免疫，仍出現(xiàn)仔豬發(fā)生豬瘟現(xiàn)象。這可能與豬瘟脾淋苗質(zhì)量不合格有關。建議該豬場免疫豬瘟疫苗后進行免疫監(jiān)測，測其抗體水平，以確保豬群豬瘟疫苗免疫合格。

[1]單虎，李明義，沈志強.現(xiàn)代獸醫(yī)獸藥大全[M].北京：中國農(nóng)業(yè)大學出版社，2011：304-307.

[2]蔡寶祥.家畜傳染病學[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1999：147-151.

[3]蔡奕琪，朱燕秋，王悅彬.2001—2008年豬瘟抗體和豬瘟病毒監(jiān)測結果分析[J].養(yǎng)豬，2009（3）：73-74.

[4]韓慶功，崔艷紅，張智勇.ELISA檢測技術在豬瘟診斷中的應用[J].生物技術通報，2007（5）：76-83.

（編輯：柳青）

孫思邈的“順時氣”養(yǎng)生法

初唐著名醫(yī)學家、百歲老人孫思邈，有“孫真人”“藥王”之稱。他結合自己長期的實踐經(jīng)驗，提出在不同的季節(jié)里，應有不同的生活方式。他在《千金要方》中說：“衣食寢處皆適，能順時氣者，始盡養(yǎng)生之道。”

春季，生之氣

可晚睡早起，多在戶外。心情要舒暢，可踏青問柳，登山賞花，陶冶性情。

飲食上可吃些麥、蔥、花生、香菜等辛甘發(fā)散之品。春天減衣服不要太快，即“春捂”。但衣服可穿薄一點，頭腳不要穿戴太厚。

夏季，長之季

可以晚睡早起，使志無怒。要注意心神的保養(yǎng)、精神的調(diào)攝，以達到“心靜自然涼”的效果。

飲食上宜食清淡、少油膩、易消化之品，切忌貪涼飲冷。宜用清心瀉火消暑之品，如苦瓜、赤豆、綠豆、西瓜等。

秋季，收之氣

應早睡早起，多曬太陽，注意養(yǎng)“收之氣”。

多吃些蜂蜜、百合、蓮子、銀耳等清補潤燥之品。晨起要按摩，順應陽氣；入夜后不要出聲誦讀，以防寒氣侵襲。無禁忌癥的話，每天讓機體“凍一凍”，即“秋凍”，可提高抗病能力，如進行冷水浴等。

冬季，藏之氣

宜早睡晚起，應養(yǎng)“藏之氣”，保持一種知足常樂的心理狀態(tài)。

多吃溫熱之物，如羊肉、雞肉、狗肉等。素體陰虧者，宜進食阿膠、龜肉、鰻魚、黑木耳等滋補陰液之品及用藥酒防寒侵。不要過度活動，最好待日出后活動。注意保暖，但不要過度溫暖，“冬日凍腦”對提高人體的適應能力、抵抗力是有幫助的。

（轉(zhuǎn)自《健康養(yǎng)生》2015-5期鄺棗園/文）

長壽老人炎癥水平低

日本慶應義塾大學百壽綜合研究中心和英國紐卡斯爾大學公布的一項研究發(fā)現(xiàn)：長壽老人體內(nèi)的炎癥水平較低，且端粒較長。

研究人員以684名百歲老人及其536名85～99歲高齡家屬為對象，檢測分析了他們的造血、代謝、肝腎功能以及細胞老化（端粒體長度）等生化指標，從中發(fā)現(xiàn)兩個共同特征，即端粒體更長和體內(nèi)不容易發(fā)炎。隨著年歲增長，那些長壽老人與普通老人相比，端粒體能保持更長的長度，他們80來歲時的端粒體長度與60來歲時的平均長度相等。同時，在百歲老人及其直系子孫體內(nèi)，隨著年歲增長而增多的炎癥標志物出現(xiàn)得更少。

日本研究團隊另一項涉及1 554名高齡老人及其子女的研究也顯示：體內(nèi)炎癥標志物最少的老人，認知功能和生活自理能力也更強。抑制慢性炎癥有助于人們放緩衰老速度。

研究人員表示：炎癥是驅(qū)動人類衰老進程的重要因素之一，他們希望能從抑制炎癥的角度，開發(fā)出能有效改善老人生活質(zhì)量的方法。

（轉(zhuǎn)自《晚晴·環(huán)球老年》姚力杰/文）

S858.285.3

A

1002-1957(2016)04-0108-02

2016-05-30

山東省農(nóng)業(yè)科學院院地科技合作引導計劃項目（214 YDHZ32）；山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術體系生豬創(chuàng)新團隊項目（SDAIT-06-022-15）

魏鳳（1979-），女，河南遂平人，助理研究員，碩士，主要從事生物制品研究工作.E-mail：xuehan2008@126.com