雌激素受體基因多態性在海南地方豬中的分布

葉玉秀，孫瑞萍，劉海隆，晁哲

（1.海南省農業科學院畜牧獸醫研究所，海南海口571100；2.海南省家畜家禽工程技術研究中心，海口571100）

雌激素受體基因多態性在海南地方豬中的分布

葉玉秀1，2，孫瑞萍1，2，劉海隆1，2，晁哲1，2

（1.海南省農業科學院畜牧獸醫研究所，海南海口571100；2.海南省家畜家禽工程技術研究中心，海口571100）

通過PCR-RFLP方法對90頭海南五指山豬和70頭臨高豬進行ESR基因型檢測。結果發現，在ESR基因的PvuⅡ-RFLP位點上，五指山豬以BB和AB基因型為主，在臨高豬中該位點A等位基因和B等位基因頻率分別是0.12和0.88。該結果為海南地方豬的雜交選育提供理論依據。

ESR；PCR-RFLP；五指山豬；臨高豬

繁殖力是影響養豬業生產效率的最重要因素之一，產仔數的提高將大幅增加肉豬的產量，給養豬業帶來巨大的經濟效益，雌激素受體基因（ESR）是已發現的控制豬產仔數的主效基因[1]。雌激素受體主要存在于卵巢、睪丸、胎盤等組織器官中，它是一種與特定激素應答DNA元件相結合的激活轉錄因子家族中的一種核酸受體，具有轉錄調控蛋白質的功能，參與雌性脊椎動物性腺基因的表達與調控。結合了配體的ESR與雌激素應答元件相互作用可以改變受雌激素調控基因的轉錄，進一步影響雌性第二性征、生殖力、繁殖周期、妊娠維持等，從而影響胚胎發育和系統分化[2]。20世紀90年代，Rothschild等[3]發現ESR基因中存在一個變異位點，該位點可以被限制性內切酶PvuⅡ識別，產生3種基因型分別命名為AA、AB和BB。此后的大量研究證實，ESR基因存在PvuⅡ酶切位點，且該位點多態性與豬產仔數密切相關。優良等位基因在不同的豬群中有較大差異，有的群體A等位基因占優勢，有的則是B等位基因占優勢，這可能與豬的品種、樣本數量及環境差異有關。五指山豬原產于海南省五指山區，由于其體小、靈活、頭尖長、體形似鼠，俗稱“老鼠豬”、“五腳豬”，是我國著名的小型豬種之一。臨高豬是海南豬中的一個重要類群，主要分布在海南臨高縣、儋州市以及澄邁縣、東方市和昌江縣的部分地區，屬于中偏小型地方豬[4]。五指山豬和臨高豬作為海南地方豬的代表，具有耐熱、耐粗飼、抗逆性強、肉質鮮美等優點，適于放牧飼養。本研究檢測了ESR基因中PvuⅡ酶切位點多態性在五指山豬和臨高豬中的分布情況，為這兩個海南地方豬種的選育與雜交利用提供參考數據。

1 材料與方法

1.1 試驗時間與地點

試驗于2016年4月15日至6月8日在海南省農業科學院畜牧獸醫研究所進行。

1.2 試驗材料

90頭五指山豬來自海南國家級五指山豬保種場，70頭臨高豬來自海南省農業科學院畜牧獸醫研究所永發科研基地。2015年采集血液和耳組織后利用基因組提取試劑盒提取基因組DNA，-20℃保存。

1.3 引物合成

擴增ESR基因的引物序列信息如表1所示，引物由上海生工生物工程技術服務有限公司合成。

表1 擴增引物序列信息

1.4 PCR-RFLP

PCR反應總體系為25 μL，其中模板DNA 1 μL（50 ng），引物0.5 μL（5 μmol/L），dNTP 0.5 μL（10 mmol/L），10×PCR buffer 2.5 μL，Mg2+2.0 μL（25 mmol/L），Taq DNA聚合酶1 μL（1 U/μL），加滅菌后的去離子水補足25 μL。PCR程序為：94℃預熱4 min；94℃變性40 s，61℃退火40 s，72℃延伸40 s，共34個循環；72℃延伸7 min。

ESR基因酶切反應體系：總體系為10 μL，其中PCR產物6 μL，10×buffer 1 μL，限制性內切酶PvuⅡ0.5 μL（10 U/μL），滅菌的去離子水2.5 μL。反應條件為37℃酶切過夜，經4%瓊脂糖凝膠電泳檢測并記錄酶切結果。

1.5 數據統計

根據群體遺傳學理論直接計算得到基因型和等位基因頻率。

2 結果與分析

2.1 PCR-RFLP分析結果

ESR基因擴增的目的片段長度為120 bp，經檢測與預期結果一致（圖1）。ESR基因擴增片段包含1個突變位點，該突變引起PvuⅡ酶切位點的改變，酶切產物中只含有120 bp一個條帶的是AA基因型，含有65 bp和55 bp兩個條帶（這兩個條帶長度接近，在瓊脂糖凝膠電泳中分辨不出來）的是BB基因型，產物中含有120 bp、65 bp和55 bp三個條帶的是AB基因型。詳見圖1。

圖1 豬ESR基因電泳檢測結果

2.2 ESR基因在海南地方豬中的基因型分布

在海南五指山豬和臨高豬中檢測了ESR基因PvuⅡ酶切位點的基因型頻率和等位基因頻率。由表2可知，在試驗檢測的五指山豬中，A等位基因頻率為0.17，B等位基因頻率為0.83；在臨高豬中，A等位基因和B等位基因頻率分別是0.12和0.88。

表2 ESR基因在海南地方豬中的分布

3 討論

隨著基因工程技術的發展，分子標記輔助選擇在家畜育種上得以應用，并取得一定進展，特別是對于產仔數等遺傳力低的數量性狀，往往是受多基因控制的，通過常規表型選擇進展緩慢。已發現的控制豬產仔數的基因或標記有雌激素受體基因（ESR）、促卵泡素β亞基基因（FSHβ）、催乳素受體基因（PRLP）和表皮生長因子基因（EGF）等[6]，其中ESR基因是最受關注的。研究顯示，ESR基因中的PvuⅡ酶切位點在中外豬種中均表現出多態性，不同豬種的基因頻率和基因型頻率各有差異，有些群體甚至缺失某種基因型。在國外豬種（杜洛克豬、長白豬、約克夏豬、皮特蘭豬等）中，A等位基因頻率高于B等位基因頻率；在中國地方豬種（二花臉豬、梅山豬、淮豬、藏豬等）中，B等位基因頻率高于A等位基因頻率[7]。本研究在海南五指山豬和臨高豬中檢測發現，B等位基因為優勢等位基因，進一步證明中國地方豬B等位基因頻率高于國外豬品種。

Rothschild等[3]最先發現不同豬種中ESR基因存在PvuⅡ酶切多態性，并且有利基因型使豬每胎的產仔數和產活仔數提高1.5頭和1頭。隨后，國內許多學者以ESR基因的PvuⅡ酶切位點為研究對象，在不同地方豬種中進行檢測分析。丁家桐等[8]對90頭姜曲海豬、梅山豬、二花臉豬ESR基因多態性進行研究發現，不同基因型間總產仔數和產活仔數差異極顯著，BB基因型母豬一胎總產仔數和產活仔數均高于AA基因型母豬。與此相反，在淮豬、萊蕪豬等豬種中研究發現，AA基因型是有利基因型，其產仔數高于BB基因型[9]。不同的研究結果一方面是由于不同品種、不同樣本量及不同環境造成的，另一方面說明ESR基因中的PvuⅡ酶切位點并不是功能突變。根據遺傳標記與功能突變之間的關系，可以把已發現的遺傳標記分為以下3種類型：1）直接標記（direct markers），是導致基因功能突變的位點；2）連鎖不平衡標記（LD markers），是在整個群體范圍內與功能突變處于連鎖不平衡狀態的標記；3）連鎖平衡標記（LE markers），是指在家系與功能突變處于連鎖不平衡狀態，但在群體范圍內卻仍處于連鎖平衡狀態的標記[10]。只有找到直接標記或連鎖不平衡標記，才能真正應用于標記輔助選擇，提高選種效率。海南地方豬中五指山豬產仔數較低，平均每胎8頭左右，如何通過標記輔助選擇提高海南五指山豬的繁殖性能是我們今后重點研究的方向。

4 結論

ESR基因中的PvuⅡ酶切位點在海南五指山豬和臨高豬中的優勢等位基因是B。

[1]Rempel L A,Nonneman D J,Wise T H,et al.Association analyses of candidate single nucleotide polymorphisms on Reproductive traits in swine[J].J Anim Sci,2010,88(1):1-15.

[2]唐現文，韓大勇，周春寶，等.蘇姜豬四至六世代雌激素受體（ESR）基因PvuⅡ多態性分析[J].浙江農業學報，2013，25（5）：965-970.

[3]Rothschild M F,Larson R G,Jacobson C,et al.Pvu II polymorphisms at the porcine oestrogen receptor locus(ESR)[J]. Anim Genet,1991,22(5):448.

[4]晁哲，孫瑞萍，劉海隆，等.FSHβ和FUT1基因多態性在海南臨高豬中的分布[J].養豬，2015（6）：60-62.

[5]Linville R C,Pomp D,Johnson R K,et al.Candidate gene analysis for loci affecting litter size and ovulation rate in swine[J]. J Anim Sci,2001,79(1):60-67.

[6]徐小波，馮宇，陸志強，等.二花臉豬繁殖性狀候選基因的多態性分析[J].浙江農業學報，2015，27（9）：1519-1523.

[7]胡建偉，楊曉瓊，余永華.中外豬種ESR基因多態性與繁殖性狀相關研究[J].上海畜牧獸醫通訊，2014（2）：20-23.

[8]丁家桐，葛紅山，姜勛平，等.豬雌激素受體基因與產仔數和乳頭數的關系研究[J].南京農業大學學報，2002，25（2）：79-81.

[9]李慶崗，吳義景，楊勇，等.美系大白豬雌激素受體基因多態性與繁殖性狀的相關分析[J].養豬，2015（4）：65-68.

[10]晁哲，鄭心力，孫瑞萍，等.豬Lbx2基因的克隆、序列分析及表達[J].中國畜牧獸醫，2013，40（8）：26-30.

（編輯：郭玉翠）

吃植物油并不比動物脂肪健康

【法新社巴黎4月12日電】據今天發表的一項對基本飲食建議構成挑戰的研究稱，用植物油取代人類飲食中的動物脂肪似乎并不能降低發生心臟病的危險，甚至反而可能增加這種危險。

該研究稱，在一項由近1萬人參加的實驗中，把飽和的歐米伽6脂肪改為不飽和的歐米伽6脂肪確實使血液中膽固醇含量降低，但并未達到使心臟病死亡率下降的預期。

事實上，根據這項發表在醫學期刊《英國醫學雜志》上的研究稱，那些膽固醇含量降低較多的人“死亡的風險更高，而不是更低”。

50多年來，肉類、黃油、奶酪及奶油中的動物脂肪一直被視為飲食中的洪水猛獸—它們被認為會增加動脈阻塞性膽固醇的風險，后者可能導致心臟病和中風。

1961年，美國心臟病協會曾建議用植物油代替飽和脂肪—這種觀點仍然流行，盡管有一些研究開始對這種理論提出質疑。

世界衛生組織也建議，飽和脂肪應該低于總攝入能量的10%。在迄今為止的幾十年里，世人一直以疑慮的眼光看待全脂牛奶和咸豬肉，并用雞肉替代豬肉，用源于植物的人造黃油和烹飪油替代黃油。但在過去幾年里，研究人員開始動手戳破有關“脂肪有害”的理論。

這項由國家衛生研究院的克里斯托弗·拉姆斯登領導的新研究，對45年前一項隨機對照組的實驗數據進行了重新分析。該實驗的對象是明尼蘇達州州立精神病院和養老院中的9 423名住院者。這是一類通常被認為具有高度可靠性的實驗，在實驗中，實驗對象被隨機分組。

在這項明尼蘇達州的研究中，有一部分實驗對象攝入的飽和脂肪被玉米油替代，而其他人的飲食則含有大量動物脂肪。《英國醫學雜志》在一篇說明文章中稱：“不出所料，富含亞油酸（一種存在于植物油中的脂肪酸）的飲食降低了膽固醇的水平。”但“這并沒有帶來存活率的上升。實際上，膽固醇下降更多的實驗對象，死亡風險更高。”

（轉自參考消息[N]，2016-04-14）

山靜日長

唐子西詩云：“山靜似太古，日長如小年。”余家深山之中，每春夏之交，蒼蘚盈階，落花滿徑，門無剝啄，松影參差，禽聲上下。午睡初足，旋汲山泉，拾松枝，煮苦茗啜之。隨意讀《周易》《國風》《左氏傳》《離騷》《太史公書》及陶杜詩、韓蘇文數篇。從容步山徑，撫松竹，與麛犢共偃息于長林豐草間。坐弄流泉，漱齒濯足。既歸竹窗下，則山妻稚子，作筍蕨，供麥飯，欣然一飽。弄筆窗前，隨大小作數十字，展所藏法帖、墨跡、畫卷縱觀之。興到則吟小詩，或草《玉露》一兩段，再烹苦茗一杯。出步溪邊，邂逅園翁溪叟，問桑麻，說粳稻，量晴校雨，探節數時，相與劇談一晌。歸而倚杖柴門之下，則夕陽在山，紫綠萬狀，變幻頃刻，恍可入目。牛背笛聲，兩兩來歸，而月印前溪矣。

（轉自《視野》2015年第5期，[宋]羅大經/文）

Distribution of Polymorphism of ESR Gene in Hainan Native Pig Breeds

YE Yuxiu1,2,SUN Ruiping1,2,LIU Hailong1,2,CHAO Zhe1,2
(1.Institute of Animal Science and Veterinary Medicine,Hainan Academy of Agricultural Sciences,Haikou 571100,China;2.Hainan Provincial Engineering Research Center for Livestock and Poultry Cultivation,Haikou 571100,China)

PCR-RFLP was used to analyze the polymorphism of ESR gene in 90 Wuzhishan pigs and 70 Lingao pigs.The main results were as follows:At the PvuⅡ-RFLP locus of ESR gene,BB and AB genetype were major in Wuzhishan pig.The frequencies of allele A and B in Lingao pigs were 0.12 and 0.88,respectively.This study could be provided some useful genetic basis principles for growth and development,system selection of Hainan native pig breeds.

ESR;PCR-RFLP;Wuzhishan pig;Lingao pig

S828

A

1002-1957(2016)04-0079-03

2016-07-03

國家自然科學基金項目（31560628）；海南省省屬科研院所技術開發研究專項（KYYS-2015-02）；海南省工程技術研究中心建設專項（SQ2016JSZX0022）

葉玉秀（1985-），女，湖北武漢人，畜牧師，碩士，主要從事動物遺傳育種與繁殖研究.E-mail：yuxiuye12@126.com

晁哲（1984-），男，河南許昌人，副研究員，博士，主要從事動物遺傳育種與繁殖研究.E-mail：chaozhe.cn@126.com