“募絡(luò)配穴”針刺干預(yù)對(duì)急性缺氧應(yīng)激損傷的保護(hù)作用*

李永平，曹志東，張 瑩，王文娟，灑玉萍，武 娟

(青海大學(xué)，青海 西寧 810000)

?

“募絡(luò)配穴”針刺干預(yù)對(duì)急性缺氧應(yīng)激損傷的保護(hù)作用*

李永平，曹志東，張 瑩，王文娟，灑玉萍，武 娟

(青海大學(xué)，青海 西寧 810000)

目的 探討手厥陰心包經(jīng)“募絡(luò)配穴”針刺干預(yù)對(duì)急性缺氧應(yīng)激損傷的影響及其作用機(jī)制。方法 采用常壓密閉缺氧和高原低壓缺氧實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，觀察穴位針刺干預(yù)對(duì)常壓密閉缺氧實(shí)驗(yàn)小鼠存活時(shí)間；檢測(cè)高原低壓缺氧實(shí)驗(yàn)大鼠血清LD、MDA含量和LDH、SOD 活性，并觀察對(duì)模型大鼠心臟組織顯微結(jié)構(gòu)的影響。結(jié)果 針刺干預(yù)膻中、內(nèi)關(guān)有明顯的抗缺氧作用，與對(duì)照組比較，可顯著延長(zhǎng)常壓缺氧小鼠的存活時(shí)間，降低大鼠血清LD、MDA含量、LDH活性，升高SOD活性，改善心肌組織結(jié)構(gòu)。結(jié)論 針刺膻中、內(nèi)關(guān)，具有提高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物缺氧耐受的作用， 能預(yù)防高原缺氧對(duì)機(jī)體的損傷，可能與血清SOD活性提高、膜脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量降低、機(jī)體乳酸積累減少有關(guān)。為“募絡(luò)配穴”治療缺氧相關(guān)疾病提供了依據(jù)。

募絡(luò)配穴 針刺 干預(yù) 缺氧 保護(hù)

配穴法為針灸療效的關(guān)鍵因素之一，為臨床醫(yī)生針灸組方常用的方法，體現(xiàn)了穴位之間的相互聯(lián)系及穴位的特異性療效。募穴是臟腑之氣匯聚于胸腹部的腧穴，絡(luò)穴溝通表里兩經(jīng)，主治表里兩經(jīng)病證。募穴和絡(luò)穴在臨床上單獨(dú)應(yīng)用可以治療相應(yīng)臟腑的病證，查閱文獻(xiàn)未見兩者配伍應(yīng)用的報(bào)道。本研究根據(jù)中醫(yī)經(jīng)絡(luò)理論對(duì)急性缺氧的認(rèn)識(shí)，立足“氣虛血瘀”的基本病機(jī)，選擇最先受累的臟器心為研究抓手，取手厥陰心包的募穴膻中和絡(luò)穴內(nèi)關(guān)配伍，組成“募絡(luò)配穴法”，探討“募絡(luò)配穴”針刺干預(yù)對(duì)急性缺氧的影響及其作用機(jī)制。探明募絡(luò)配穴的協(xié)同效應(yīng)，為這一新的的配穴方法臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。為高原缺氧研究提供新的干預(yù)措施。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

KM小鼠24只，雌雄各半，體重20±2 g，購(gòu)自甘肅中醫(yī)學(xué)院科研實(shí)驗(yàn)中心，許可證號(hào)SCXK(甘)2011-0001；SD大鼠42只，雌雄各半，體重200±20 g，購(gòu)自西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)SCXK(陜)2012-003。

1.1.2 主要試劑

LD試劑盒、LDH試劑盒、SOD試劑盒、MDA試劑盒(南京建成生物工程公司)；鈉石灰(上海納輝干燥試劑廠)。

1.1.3 主要儀器

RT-6000型酶標(biāo)儀、RT-3000自動(dòng)洗板機(jī)(深圳雷杜)，TU-1810紫外分光光度計(jì)(普析通用)，TGL16臺(tái)式冷凍離心機(jī)(湖南湘儀)，TH-86-150-WA超低溫保存冰箱(北京天寒)，YDS-10型液氮罐(成都金鳳)。

1.2 方法

1.2.1 穴位針刺干預(yù)對(duì)常壓密閉缺氧小鼠存活時(shí)間的影響

取小鼠24只，適應(yīng)飼養(yǎng)3日后分為：①空白對(duì)照組；②非穴位針刺組；③穴位針刺組，非穴位針刺組選擇一個(gè)非穴位部位每天針刺1次，穴位針刺組根據(jù)“動(dòng)物針灸穴位圖譜”選擇膻中、內(nèi)關(guān)每天采用傳統(tǒng)補(bǔ)法針刺并留針10 min，于末次針刺后 1 h將各組小鼠分別放入裝有5 g鈉石灰的125 mL廣口瓶中(每瓶只放1只小鼠)，用凡士林涂抹封閉，使之不漏氣，立即計(jì)時(shí)至小鼠停止呼吸為止，記錄小鼠存活時(shí)間。

1.2.2 穴位針刺干預(yù)對(duì)急性高原缺氧模型大鼠相關(guān)生化指標(biāo)的影響

取42只SD大鼠，適應(yīng)飼養(yǎng)3日后分為：低海拔對(duì)照組(12只、在青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院中醫(yī)藥省級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng))；高海拔急性缺氧組(共30只，運(yùn)往青海省果洛州達(dá)日縣造模，海拔：4100m)。高海拔急性缺氧組又分為缺氧模型組、非穴位針刺組(非穴位部位針刺)、穴位針刺組(毫針針刺膻中穴、內(nèi)關(guān)穴)，每組10只。非穴位針刺組、穴位針刺組在西寧(海拔：2250m)先針刺7 d，然后將缺氧實(shí)驗(yàn)大鼠運(yùn)至青海省果洛州達(dá)日縣(海拔：4100m)行實(shí)地自然環(huán)境造模。在缺氧造模的同時(shí)繼續(xù)針刺治療。針刺干預(yù)3 d即用20%烏拉坦(20g 溶于100mL 蒸餾水，劑量：1mL/200g)麻醉大鼠后，將大鼠固定于泡沫板，用圖釘固定四肢。腹主動(dòng)脈采血，離心(4000r/min)血清，放入凍存管，保存在液氮中，運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室通過ELISA法檢測(cè)大鼠血清中乳酸(LD)、乳酸脫氫酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)等生化指標(biāo)，探討針刺干預(yù)對(duì)高原缺氧的保護(hù)作用。

1.2.3 穴位針刺干預(yù)對(duì)急性高原缺氧模型大鼠心臟組織顯微結(jié)構(gòu)的影響

通過大鼠心臟組織病理切片，觀察急性高原缺氧對(duì)模型大鼠心臟組織肌纖維、小血管、細(xì)胞及細(xì)胞器腫脹破損情況，反映針刺干預(yù)對(duì)高原缺氧大鼠的保護(hù)作用。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)方法

2 結(jié)果

2.1 穴位針刺干預(yù)對(duì)常壓密閉缺氧小鼠存活時(shí)間的影響

Table 1 Effect of acupuncture intervention on the survival time of mice in normal pressure airtight induced ±s)

續(xù)表：

組別n存活時(shí)間(min)穴位針刺組810．15±1．09▲F7．476P0．004

與空白組比較，▲P<0.01.

表1結(jié)果顯示，穴位膻中、內(nèi)關(guān)針刺預(yù)處理有明顯的抗缺氧作用。與空白對(duì)照組比較，可顯著延長(zhǎng)常壓缺氧小鼠的存活時(shí)間(P<0.01)。

2.2 穴位針刺干預(yù)對(duì)急性高原缺氧模型大鼠相關(guān)生化指標(biāo)的影響

Table 2 Effects of acupuncture intervention on the serum LD MDA content and LDH SOD activity in acute high altitude ±s)

與低海拔對(duì)照組比較，*P<0.001；與模型組比較，▲P<0.05、▲▲P<0.001.

表2結(jié)果顯示，與低海拔對(duì)照組相比，缺氧模型組大鼠血清LD、MDA含量明顯升高，LDH、SOD 活性顯著升高(P<0.001)。穴位膻中、內(nèi)關(guān)針刺組與缺氧模型組比，大鼠血清LD、MDA 含量顯著降低(P<0.001)，LDH活性顯著降低(P<0.05)，SOD 活性顯著升高(P<0.001)。

2.3 穴位針刺干預(yù)對(duì)急性高原缺氧模型大鼠心臟組織顯微結(jié)構(gòu)的影響

a b

c d

a：低海拔對(duì)照組大鼠心肌組織結(jié)構(gòu)、肌纖維排列整齊(×400)；b、c：模型組、非穴位針刺組大鼠心肌組織結(jié)構(gòu)、心肌肌纖維間距增加，出現(xiàn)波浪狀收縮，同時(shí)伴有間質(zhì)水腫，肌纖維出現(xiàn)斷裂(×400)；d ：穴位針刺組大鼠心肌組織結(jié)構(gòu)、心肌肌纖維出現(xiàn)輕微的波浪狀收縮，未見肌纖維斷裂

圖1 穴位針刺干預(yù)對(duì)急性高原缺氧模型大鼠心臟組織顯微結(jié)構(gòu)的影響

Figure 1 Effects of Acupuncture intervention on the myocardial ultrastructure of experimental mice of acute high altitude hypoxia

3 討論

缺氧是一種普遍的生理應(yīng)激，細(xì)胞對(duì)缺氧應(yīng)激反應(yīng)是一個(gè)復(fù)雜的、精細(xì)的調(diào)控過程，經(jīng)歷一系列生物學(xué)應(yīng)答反應(yīng)的改變，通過引起蛋白組和基因組水平的改變，調(diào)控維持氧平衡所必需的相應(yīng)蛋白的表達(dá)，激活無氧代謝以及其他信號(hào)通路，調(diào)控細(xì)胞分化、凋亡和壞死等過程。[1-2]

高原環(huán)境是一個(gè)“天然缺氧實(shí)驗(yàn)室”，將大鼠暴露在高海拔缺氧環(huán)境中，細(xì)胞內(nèi)ATP消耗， 酶活力下降，有氧呼吸產(chǎn)生的ATP量減少。為彌補(bǔ)能量缺失，糖酵解作用加強(qiáng)，作為催化糖酵解環(huán)節(jié)中丙酮酸轉(zhuǎn)化為L(zhǎng)D的酶，乳酸脫氧酶LDH活力在缺氧后顯著提高，同時(shí)LD累積，含量提高[3-4]。缺氧導(dǎo)致機(jī)體總抗氧化能力下降，體內(nèi)產(chǎn)生大量自由基，引起強(qiáng)烈的脂質(zhì)過氧化作用并產(chǎn)生大量的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA，使細(xì)胞受到損傷，組織器官功能下降，刺激SOD活性增高，以清除自由基代謝產(chǎn)物， 但隨著缺氧損傷的進(jìn)行，產(chǎn)生的自由基可直接損傷抗氧化酶，使SOD等酶活力降低[5-6]。現(xiàn)有資料表明，急性缺氧LDH和SOD的活力可以增高或降低[7-9]，所得矛盾結(jié)果的原因可能和動(dòng)物種屬的不同，缺氧嚴(yán)重程度以及實(shí)驗(yàn)條件的差異有關(guān)。本研究顯示，穴位膻中、內(nèi)關(guān)針刺干預(yù)有明顯的抗缺氧作用，對(duì)缺氧大鼠心肌具有一定的保護(hù)作用。其作用機(jī)制可能與降低缺氧大鼠耗氧量，使缺氧心肌LD的累積減少，提高SOD活性， 減輕自由基過量生成與脂質(zhì)過氧化作用，減輕缺氧所造成的心肌組織病理學(xué)損傷等有關(guān)。

急性缺氧應(yīng)激損傷在中醫(yī)學(xué)中無相對(duì)應(yīng)的病名，根據(jù)不同病情階段的臨床表現(xiàn)，可以將其歸屬中醫(yī)學(xué)的“心悸”“胸痹”“頭痛”“眩暈”“水氣”“血證”等，屬于中醫(yī)氣虛癥范疇，中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，氣虛無力，血運(yùn)失常，在高原低壓缺氧數(shù)小時(shí)內(nèi)就會(huì)產(chǎn)生急性氣滯血瘀證[10-11]。根據(jù)其發(fā)病機(jī)制，治療主要以補(bǔ)氣推動(dòng)血?dú)膺\(yùn)行為核心。中醫(yī)認(rèn)為心主血脈。因此，本研究選擇手厥陰心包經(jīng)的募穴膻中和絡(luò)穴內(nèi)關(guān)配伍，提出“募絡(luò)配穴”這一新的配穴方法，探討穴位針刺干預(yù)對(duì)缺氧應(yīng)激損傷的保護(hù)作用及其作用機(jī)制。募穴是臟腑之氣匯聚于胸腹部的腧穴，膻中作為心包募穴，又是八會(huì)穴之氣會(huì)，善治一切氣病，具有補(bǔ)上焦、寬胸膈、降氣通絡(luò)之功效[12]。絡(luò)穴溝通表里兩經(jīng)，主治表里兩經(jīng)病證，內(nèi)關(guān)穴作為心包經(jīng)絡(luò)穴，通過絡(luò)脈與三焦經(jīng)直接相貫通，絡(luò)心系，代心行事， 其功能多表現(xiàn)在心主血脈，著重治療心血管疾病。內(nèi)關(guān)又是八脈交會(huì)穴之一，通于陰維脈，在胸腹部與六經(jīng)相互維系，凡邪犯心包，影響三焦氣機(jī)紊亂的病證皆可取本穴[13]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，手厥陰心包經(jīng)“募絡(luò)配穴”針刺干預(yù)具有很好的抗缺氧作用，對(duì)急性缺氧應(yīng)激損傷心肌具有良好的保護(hù)作用，為“募絡(luò)配穴”針刺干預(yù)法的臨床應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[1]J Dallimore，EC Rowbotham.Incidence of acute mountain sickness in adolescents[J].Wilderness & environmental medicine，2009，20(3)：221-224.

[2]KR Burgess，P Johnson，N Edwards，et al.Acute mountain sickness is associated with sleep desaturation at high altitude[J].Respirology，2004，9(4)：485-492.

[3]Cheng F，Xie S，Guo M，et al.Altered glucose metabolism and preserved energy charge and neuronal structures in the brain of mouse intermittently exposed to hypoxia[J].Journal of Chemical Neuroanatomy，2011，42(1)：65-71.

[4]Chris Imray，Alex Wright，Andrew Subudhi，et al.Acute Mountain Sickness：Pathoph ysiology，Prevention，and Treatment[J].Progress in Cardiovascular Diseases，2010，52(6)：467-484.

[5]JB West，GL Colice，YJ Lee，et al.Pathogenesis of high-altitude pulmonary edema：direct evidence of stress failure of pulmonary capillaries[J].European Respiratory Journal，1995，8(4)：523-529.

[6]Marco M.Prevention and treatment of high-altitude pulmonary edema[J].Progress in cardiovascular diseases，2010，52(6)：500-506.

[7]李倩.自由基清除劑Tempol的抗缺氧作用及其分子機(jī)制研究[D].蘭州：蘭州大學(xué)，2013：44-49.

[8]馬慧萍，焦陽(yáng)，高榮敏，等.天山雪蓮乙醇提取物對(duì)模擬高原缺氧小鼠生化指標(biāo)的影響[J].中藥材，2014，37(1)：99-103.

[9]王利彥，王津慧，呂慧玲.甘西鼠尾草的抗缺氧研究[J].四川中醫(yī)，2009，27(4)：43-44.

[10]陳衛(wèi)國(guó)，李軍茹，賈守寧，等.低壓缺氧法建立高原氣虛血瘀證大鼠模型的研究[J].上海中醫(yī)藥雜志，2011，45(5)：70-72.

[11]李軍茹，賈守寧，馬春花，等.模擬高原環(huán)境建立高原氣虛血瘀證大鼠疾病模型的研究[J]. 陜西中醫(yī)，2011，32(5)：627-629.

[12]戴美友.膻中穴的臨床應(yīng)用與研究現(xiàn)狀[J].上海針灸雜志，2004，23(6)：30-31.

[13]楊元德.內(nèi)關(guān)穴臨床應(yīng)用與機(jī)理的文獻(xiàn)綜述[J].中國(guó)針灸，1995，15(1)：52-54.

The protective effects of “Combination of Mu and Luo Acupoints” acupuncture intervention in acute hypoxia stress injury*

Li Yongping，Cao Zhidong，Zhang Ying，Wang Wenjuan，Sa Yuping，Wu Juan

(Qinghai University，Xining，Qinghai 810000)

Objective To discuss the effect of pericardium meridian “Combination of Mu and Luo Acupoints” on acute hypoxia stress injury and its mechanism.Methods Using experimental animal model of normal pressure airtight hypoxia and plateau low pressure hypoxia.To observe the survival time of mice after acupuncture intervention for normal pressure airtight hypoxia.To test the serum LD MDA content and LDH SOD activity in experimental mice of plateau low pressure hypoxia and to observe the influence on the myocardial ultra-structure.Results The acupuncture intervention RN17 and PC6 acupoint showed obvious effect on hypoxia.To compare with control group.It significantly prolonged the survival time of the mice underwent normal pressure hypoxia.It reduced the serum LD MDA contents and the activity of LDH.Moreover，it increased the SOD activity. It could improve the structure of myocardial tissue.Conclusion The acupuncture RN17 and PC6 acupoints can increase the hypoxia tolerance and prevent the body injury because of plateau hypoxia.It may be related to the increase of SOD activity in serum，the MDA contents decrease in membrane lipid peroxidation and the lactic acid accumulation of body.It provides the basis for “Combination of Mu and Luo Acupoints” treating oxygen related diseases.

Combination of Mu and Luo Acupoints Acupuncture Intervention Hypoxia Protection

*：青海省衛(wèi)計(jì)委中藏醫(yī)藥研究項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：2015105)；青海大學(xué)中青年科研基金項(xiàng)目(2014-QYY-7) 李永平(1978～)，男，漢族，甘肅籍，副教授，碩士生導(dǎo)師

R

A

10.13452/j.cnki.jqmc.2016.03.003

2016-02-08