淄博地區雞源耐氟喹諾酮大腸桿菌的耐藥特點

劉軍河 魏湘瓔 李娜

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淄博地區雞源耐氟喹諾酮大腸桿菌的耐藥特點

劉軍河 魏湘瓔 李娜

（山東省淄博市動物衛生監督所 255000）

為了解淄博地區雞源耐氟喹諾酮大腸桿菌的耐藥特點及其耐藥基因攜帶特點。本研究于2016年5月對淄博地區兩個雞場糞便棉拭子采集，分離耐頭孢噻肟大腸桿菌，并對15種抗生素進行藥敏檢測。PCR檢測qnrA、qnrB、qnrS、aac-(6’)-Ib-cr耐藥基因。共收集34份糞便棉拭子，分離14株耐喹諾酮大腸桿菌，分離率47%。所有耐喹諾酮大腸桿菌呈現多重耐藥，但都對碳青霉烯類藥物敏感。12株菌攜帶qnrS基因，攜帶率最高為85.7%。雞源耐喹諾酮大腸桿菌分離率高耐藥譜廣，給臨床中應用抗生素的治療帶來困難。

雞源 大腸桿菌 氟喹諾酮 耐藥性

氟喹諾酮類藥物的殺菌機制是通過抑制細菌DNA回旋酶，從而干擾DNA復制而導致細菌死亡[1]。其抗菌譜廣，且與其他抗菌藥物無交叉耐藥性，故常作為臨床治療腸道致病菌感染的首選藥物。由于其在畜牧生產中被廣泛應用，導致目前其臨床耐藥菌株日益增多。

大腸桿菌對氟喹諾酮類藥物產生耐藥機制主要是質粒介導的喹諾酮類耐藥(PMQR)機制，由qnrA，qnrB，qnrS，aac-(6’)-Ib-cr和qepA等參與[2]。本研究以淄博地區雞源大腸桿菌為研究對象，旨在檢測臨床分離耐藥大腸桿菌耐氟喹諾酮類抗生素基因的檢測，為耐藥機制研究提供基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品采集 2015年5月淄博地區兩個養雞場采集34份肛門棉拭子。

1.1.2 主要試劑 伊紅美藍瓊脂、麥康凱瓊脂、Mueller-Hintion瓊脂 (MH)，細菌基因組DNA提取試劑盒均購自天根生物科技有限公司。

1.2.3 藥敏紙片 氨芐西林(10μg/片)，阿莫西林(20μg/片)、頭孢噻吩(30μg/片)、氨曲南(30μg/片)、頭孢噻肟(30μg/片)、復方新諾明(25μg/片)、氯霉素(30μg/片)、鏈霉素(10μg/片)、卡那霉素(30μg/片)、慶大霉素(10μg/片)、諾氟沙星(10μg/片)、環丙沙星(5μg/片)、四環素(30μg/片)、亞胺培南(10μg/片)、美羅培南(10μg/片)均購自杭州微生物試劑有限公司。

1.2 方法

1.2.1 樣品分離鑒定 向雞糞便棉拭子離心管中加入500μl的生理鹽水，混勻后，劃線接種于含環丙沙星的伊紅美藍培養基上，37℃培養18h。典型菌落接種于麥康凱培養基上，37℃培養18h。每個平板只挑取一個菌落。PCR擴增大腸桿菌16SrRNA保守區域，產物進行克隆測序鑒定大腸桿菌。

1.2.2 耐藥基因的檢測 4對特異性引物序列與反應程序參考文獻[3]，PCR檢測qnrA、qnrB、qnrS、aac-(6’)-Ib-cr耐藥基因的攜帶情況。

2 結果

2.1 雞耐氟喹諾酮大腸桿菌的分離 從34份豬糞便棉拭子中共分離到14株耐氟喹諾酮大腸桿菌，分離率為47%。

2.2 耐氟喹諾酮大腸桿菌耐藥性 14株耐氟喹諾酮大腸桿菌均呈現多重耐藥性，對環丙沙星與諾氟沙星的耐藥率高達100%。對氨芐西林和阿莫西林的耐藥率高達100%，85.7%。對頭孢菌素類抗生素如頭孢噻吩頭孢噻肟為71.4%和57.1%。但對碳青霉烯類抗菌藥物均表現敏感。見附表。

附表 耐藥率分析表

抗生素耐藥(n)百分比抗生素耐藥(n)百分比 氨芐西林14100慶大霉素1071.4 阿莫西林1285.7環丙沙星14100 頭孢噻吩1071.4諾氟沙星14100 頭孢噻肟857.1四環素857.4 復方新諾明1178.6氨曲南1178.6 氯霉素535.7亞胺培南00.0 鏈霉素750.0美羅培南00.0 卡那霉素857.1

2.3 PCR檢測結果 qnrS和qnrB基因PCR檢測得到與目的片段大小一致的條帶。其中12株菌攜帶qnrS基因，攜帶率最高為85.7%；2株菌攜帶qnrB基因，攜帶率為14.3%。沒有菌株攜帶qnrA，aac-(6’)-Ib-cr耐藥基因(圖1、圖2)。

圖1 部分qnrS基因PCR擴增凝膠電泳結果(目的條帶為417bp)

圖2 2株qnrB基因PCR擴增凝膠電泳結果(目的條帶為617bp)

3 討論

（1）近年來發現細菌對氟喹諾酮類藥物的耐藥性出現一些新的耐藥機制，即質粒介導的耐藥機制。質粒將攜帶的耐藥基因轉移到其他菌屬，從而促進了耐藥基因的水平傳播。（2）1998年Martinez[4]首次證實了質粒在喹諾酮類耐藥性方面的作用，經過分析其中１個命名為qnrA的基因貢獻了質粒介導的FQs耐藥性。隨后，qnrS、qnrB、qnrC和qnrD等也被相繼報道。本研究中所調查的淄博雞源耐氟喹諾酮大腸桿菌主要攜帶qnrS基因，攜帶率最高為85.7%；2株菌攜帶qnrB基因，攜帶率為14.3%。沒有菌株攜帶qnrA、aac-(6’)-Ib-cr耐藥基因。提示質?；騫nrS可能在介導大腸桿菌耐氟喹諾酮類藥物的機制中發揮著重要的作用。

總之，淄博雞源耐氟喹諾酮大腸桿菌耐藥譜廣，質?；騫nrS在介導大腸桿菌耐氟喹諾酮類藥物的主要機制，并且在氟喹諾酮耐藥性的散播中發揮重要作用。

[1] 陳杖榴. 獸醫藥理學2版[M]. 北京: 中國農業出版社, 2001: 234-238．

[2] 潘渭涓, 陳祥, 王曉泉. 1993-2008年禽源大腸桿菌和沙門菌對喹諾酮類藥物耐藥性分析[J]. 中國人獸共患病學報, 2009, 25(7): 630-635.

[3] 王宏棟, 徐國鋒, 矯薇薇等. 豬源氟喹諾酮耐藥大腸桿菌通過接合水平傳遞耐藥性的研究[J]. 畜牧獸醫學報, 2016, 47(4): 805-811.

[4] Matinez ML, Pascual A, Jacoby GA. Quinolone resistance from a transferable plasmid[J]. Lancet, 1998, 351: 797-799.

（2016–07–15）

S859.79+7

A

1007-1733(2016)09-0021-02