雞新城疫抗體檢測技術在診斷中的應用

王彩霞

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雞新城疫抗體檢測技術在診斷中的應用

王彩霞

（山東畜牧獸醫職業學院 山東濰坊 261061）

近幾年在生產實踐中存在雞非典型新城疫及新城疫強毒株感染的和在免疫過程中的一些問題，是雞群發生了新城疫的一個主要原因，如果雞群新城疫抗體水平很低，就會引起典型的新城疫；如果雞群新城疫抗體水平不均勻，就會引起非典型的新城疫抗體檢測技術在診斷中的應用，具有診斷和預防意義.

1 發病情況

2015年2月，山東濰坊某雞場的雞突然發病，發病率90%，死亡1500只左右，主要的臨床癥狀表現為：體溫升高，呼吸困難，下痢，排黃白色、黃綠色甚至綠色稀便；嗉囊積液，倒提病雞從口角流出酸臭液體；有的表現神經癥狀，兩腿麻痹，不能站立。

2 剖檢變化

喉頭、氣管出血，十二指腸、小腸前段及小腸近盲腸基部呈點狀或斑塊狀出血，嚴重的出現潰瘍，腺胃乳頭、腺胃和肌胃交界處、肌胃角質層下出血；盲腸扁桃體出血、腫脹、潰瘍，心冠脂肪及心外膜點狀出血，脾臟腫大有白色壞死點，肝、肺、腎基本正常，無肉眼可見的明顯變化。

3 實驗室診斷

3.1 細菌涂片和分離培養 取病死雞肝臟、脾臟及腦組織分別作組織觸片，美蘭染色和革蘭氏染色鏡檢，沒有發現任何細菌；取上述病料分別接種普通瓊脂平板、SS瓊脂平板和血清瓊脂平板，37℃培養24h，結果無細菌生長。

3.2 病毒分離 無菌取剛死亡的雞腦及脾臟，減碎、研磨后凍融2次，然后用每ml含青霉素、鏈霉素各1000IU的無菌生理鹽水1:5稀釋，4000r/min離心15min，取上清液，置4℃冰箱作用4~12h，備用[1][2]。（1）雞胚接種：將雙抗處理的病料上清液通過尿囊腔接種30枚11日齡的SPF雞胚，每胚0.2ml，石蠟封孔后繼續孵化，棄去24h內死亡的雞胚，以后每2~4h照蛋一次，并將死亡雞胚置4℃冰箱冷藏備用。（2）病毒的鑒定：①病毒的血凝試驗(HA)：取雞胚接種分離的尿囊液作血凝試驗，以微量法在血凝板作2-11倍比稀釋，并設生理鹽水對照孔，然后向每孔加1%雞的紅細胞，振蕩混勻，20~25℃作用40min后觀察結果，生理鹽水對照孔的紅細胞成明顯的鈕扣狀沉到孔底時判定結果.病毒若有凝集性，說明導致雞發病死亡的病原體具有血凝性。②抗NDV陽性血清血凝抑制試驗。③討論：結果中，前4孔仍出現凝集，是由于ND陽性血清效價較低，而病毒濃度較高，從第5孔開始病毒凝集紅細胞的作用完全被ND陽性血清所抑制，從病死雞腦、脾分離到的病毒，具有凝集紅細胞的特性，并且能被ND陽性血清所抑制，說明分離到的病毒與NDV有很大的相關性[3]。

附表 抗NDV陽性血清血凝抑制試驗(HI) (μl)

孔號123456789101112 生理鹽水252525252525252525252550 尿囊液2525252525252525252525 ND陽性血清252525252525252525252525 1%雞紅細胞252525252525252525252525 結果﹢﹢﹢﹢﹣﹣﹣﹣﹣﹣﹣﹣

注：輕叩反應板，20-25℃作用不少于30min。20~25℃作用40min后觀察結果，生理鹽水對照孔的紅細胞成明顯的鈕扣狀沉到孔底時判定結果。﹢凝集，﹣不凝集。

3.3 抗體檢測 到雞場按5%采樣30只，進行ND抗體檢測，抗體水平30只雞有27只超過11log2，發現抗體異常升高，結合臨床癥狀和剖檢變化，說明可能感染強毒，可診斷該雞群已經感染ND強毒。

4 發生非典型ND的緊急措施

（1）深埋或焚燒病死雞，淘汰病重雞，隔離有癥狀的雞，對病死雞污染的環境進行徹底消毒。（2）對未發病的雞群進行緊急接種 可采用倍量Clone-30疫苗緊急接種，或用倍量IV系疫苗滴鼻點眼，同時肌肉可皮下注射油乳劑滅活苗，還中口服大劑量(5倍量)V4弱毒疫苗進行緊急預防。一般不宜采用大劑量中等毒力的I系疫苗作緊急預防，因其接種后易產生較大的應激反應，影響雞的產蛋率，并且雞群恢復時間較長，死亡率相對較高。（3）患病雞不宜進行接種，可以使用抗ND卵黃液和抗血清進行治療，為防止繼發感染細菌病，可在飼料和飲水中適量添加抗菌類藥物。

5 應用

無條件開展ND抗體監測的雞場，提高免疫接種密度和質量，使雞具有穩定持久的高滴度的中和抗體和循環抗體，可選用以下免疫程序：7~10日齡采用NDII系或IV系滴鼻點眼首免，20~25日齡用II系疫苗進行第2次滴鼻點眼，同時皮下或肌肉注射ND油乳劑滅活苗0.3ml/只，60日齡左右進行1次弱毒或聯苗注射，120日齡進行油苗或聯苗注射，種雞在300~350日齡再進行1次油苗接種。

5.1 確定雛雞首免日齡 在母源抗體消失或接近消失時進行首免，可獲得理想的免疫效果。一般在雛雞出殼1日齡時采血，檢查雛雞的HI效價。在大型高密度雞場抽樣率不低于0.1%，雞群越小，抽樣率應隨之增加，理想的抽樣率為2%。求出HI抗體效價均值，然后將效價均值帶入公式推算適宜的首免日齡：適宜的首免日齡＝4.5(1日齡HI抗體效價均值-4)+5。例如某批雛雞1日齡HI抗體效價均值為6log2，則該批雛雞的首免日齡=4.5(6-4)+5= 14(日齡)。

5.2 首免后定期抽檢，適時強化免疫 首免后10d采血抽檢，當HI抗體效價均值降至4log2或以下時進行二免。二免后15d再采血抽檢，如抗體效價在5log2以下時，應進行第2次免疫接種。以后，雞的HI效價應保持在5log2以上，同日齡的種雞應比其他雞高一個滴度。如低于此標準，應立即進行免疫接種，只有HI抗體效價均值上升2log2以上方可認為該次免疫成功，否則應進行補免。

[1] 徐為燕. 獸醫病毒學[M]. 北京: 中國農業出版社, 1993. 219-221.

[2] 陸承平. 獸醫微生物學(第3版)[M]. 北京: 中國農業出版社, 2001-523.

[3] 嚴維巍, 王永坤, 周繼宏等. 鵝副粘病毒的分類地位初探[J]. 中國獸醫科技, 2000, 30(12).

（2016–05–19）

S851.33

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1007-1733(2016)09-0052-02