幽門螺桿菌感染與胃癌發生及預后的相關性研究*

帕提瑪·阿布力米提, 節陽華, 謝新梅, 張洪亮

新疆醫科大學附屬中醫院 腫瘤二科 (烏魯木齊 830000)

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·論 著·

幽門螺桿菌感染與胃癌發生及預后的相關性研究*

帕提瑪·阿布力米提, 節陽華, 謝新梅, 張洪亮△

新疆醫科大學附屬中醫院 腫瘤二科 (烏魯木齊 830000)

目的 探討幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)感染與胃癌發生及預后的關系。方法 選取胃癌組織標本78例及其癌旁組織標本26例，采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(PCR)檢測胃癌組織和癌旁組織中Hp相對感染量，分析Hp相對感染量與胃癌患者臨床病理特征及預后的相關性。結果 胃癌組織Hp相對感染量明顯高于癌旁組織，且同一患者胃癌組織中Hp相對感染量亦高于其癌旁組織，差異有統計學意義(P<0.01)。胃癌組織中Hp相對感染量與患者臨床分期、浸潤深度及有無淋巴結轉移密切相關，差異有統計學意義(P<0.01)，而與性別、年齡、組織學分型及有無遠處轉移無關，差異無統計學意義(P>0.05)。生存分析結果顯示，患者生存率與胃癌組織中Hp相對感染量呈負相關，且差異有統計學意義(P<0.05)。結論 Hp感染可能參與胃癌的發生、發展及轉移，可作為臨床上評估胃癌進展和預后的潛在指標。

幽門螺桿菌; 胃癌; 臨床病理特征; 預后

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2008年11月至2010年11月新疆醫科大學附屬中醫醫院病理科存檔的胃癌組織標本78例，均經石蠟包埋、10%甲醛固定，且術前未行任何放化療，其中男54例，女24例；年齡26～78歲，中位年齡61.5歲；根據美國癌癥聯合委員會(AJCC)TNM分期標準[5]：Ⅰ～Ⅱ期36例，Ⅲ～Ⅳ期42例。同時選取上述標本的癌旁組織26例，癌旁組織為切緣距癌灶邊緣>5 cm的非癌組織。每例標本均由2位以上病理學專家診斷確診，且病理資料完整。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑和儀器 石蠟組織DNA提取試劑盒、實時熒光定量聚合酶鏈反應(PCR)試劑盒及實時熒光定量PCR儀均由德國凱杰公司提供。

1.2.2 實時熒光定量PCR 首先進行DNA提取，將石蠟組織切片，置入2 mL滅菌EP管后提取胃癌及癌旁組織標本DNA，采用分光光度法測定DNA純度及質量濃度，稀釋后進行分裝，并置于-20 ℃冰箱保存。

HPYR1引物序列：

5′-AAT-TGGACAGCACCTTCTGG-3′

5′-GAGCCCTCAAAGAACTGCAC-3′；

內參基因GAPDH引物序列：

(2)當遇到鉆桿被卡住時，使用液壓絞車起拔鉆桿會有斷繩的危險，由于鋼絲繩是一個彈性體，一旦出現斷繩，會對旁邊的操作者帶來極大的危險。使用鋼球夾緊液壓起拔器時，鋼球只是鉆進鉆桿，起拔力由液壓油缸提供，不存在危及操作者的危險。

5′-GCTGGTG-CTCCAGGGGTCTTACT-3′

5′-TCAAC-GACCACTTTGTCAAGCTCA-3′

PCR產物大小分別為176 bp和121 bp，均由上海英駿生物技術有限公司合成。反應體系：12.5 μL PCR預混液，7.5 μL去核糖核酸酶水(RNase-free water)，3.0 μL模板DNA(濃度≤10 μmol/L)，各1.0 μL的10 μmol引物，共25 μL。反應條件：95 ℃預變性5 min、變性10 s，60 ℃退化延伸30 s，共40個循環。空白組Hp相對感染量設為1，Hp陰性與陽性分別定為<1和>1，實驗重復3次，取平均值。Hp相對感染量=2-△△Ct，△Ct=Ct目的-Ct內參，△△Ct=△Ct目的-△Ct空白。

1.2.3 隨訪 以電話方式對患者進行隨訪，若未取得聯系，可直接面訪或發郵件咨詢，隨訪截止至2015年11月。

1.3 觀察指標

比較胃癌組織與癌旁組織Hp相對感染量，分析Hp相對感染量與胃癌患者臨床病理特征及預后的相關性。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 Hp相對感染量比較

胃癌組織Hp相對感染量為(8.69±6.48)，癌旁組織為(4.31±2.47)，二者比較差異有統計學意義(P<0.01)；與癌旁組織相對應的26例胃癌組織Hp相對感染量為(12.27±5.26)，明顯高于癌旁組織的Hp相對感染量，差異有統計學意義(P<0.01)。

2.2 Hp相對感染量與患者臨床病理特征的關系

胃癌組織中Hp相對感染量與患者臨床分期、浸潤深度及有無淋巴結轉移密切相關，差異有統計學意義(P<0.01)，而與性別、年齡、組織學分型及有無遠處轉移無關，差異無統計學意義(P>0.05)(表1)。

表1 Hp相對感染量與患者臨床病理特征的關系±s)

2.3 Hp相對感染量與患者預后的關系

根據Hp相對感染量，將78例胃癌患者分為A組(Hp<1)19例、B組(1

圖1 不同Hp相對感染量患者生存曲線比較

3 討論

胃癌是消化系統最常見的惡性腫瘤，多由飲食不節、Hp感染、胃黏膜上皮異常增生等因素引起。據統計，我國每年有470萬人因胃癌而死亡，約占全部惡性腫瘤死亡的59.2%[4]。Hp作為微需氧菌，定植于胃黏膜表面和黏膜層之間，通過分泌尿素酶而使胃黏膜屏障受損。其空泡毒素基因亦可使離子通透性發生變化，從而導致細胞空泡變性，損傷胃黏膜，引發糜爛或潰瘍。60%的Hp通過產生細胞毒素相關基因A(Cag A)而發揮細胞毒效應，介導免疫和炎癥反應[6]。Jiménez-Soto等[7]研究發現，慢性Hp感染與胃癌發生密切相關，其中以Cag A+Hp感染最為常見。作為胃癌發生的啟動因子之一，Hp持續感染可能通過誘發慢性胃炎而損傷胃黏膜細胞DNA，為癌癥發生提供先決條件，與Asaka等[8]對腸型胃癌與Hp感染關系的推斷相似，即慢性Hp感染-慢性淺表性胃炎(CSG)-慢性萎縮性胃炎(CAG)-腸上皮化生-異型增生-胃癌。本研究結果顯示，胃癌組織與癌旁組織Hp相對感染量比較，差異有統計學意義，且同一患者胃癌組織中Hp相對感染量明顯高于其癌旁組織，表明Hp可能在胃癌的發生與發展中發揮一定作用。

近年來研究[9]發現，Hp感染與胃癌浸潤及轉移密切有關。Qiu等[10]通過探討Hp感染與胃癌患者臨床病理特征及預后的關系，發現Hp感染與淋巴結轉移密切相關，其中Hp陰性者多見于N2和N3分期，陽性者多見于N0和N1分期。Meimarakis等[11]認為，胃癌患者中Hp陰性者多見于T3分期，陽性者多見于T1和T2分期，提示Hp可誘導胃癌發生和轉移。吳軍等[12]通過探討胃癌組織Hp感染與低氧誘導因子-1α(HIF-1α)的相關性，結果發現Hp感染與胃癌組織有無淋巴結轉移及浸潤深度有關。本研究結果顯示，胃癌組織中Hp相對感染量與患者臨床分期、浸潤深度及有無淋巴結轉移密切相關，進一步證實Hp參與胃癌的發生、發展及轉移。

目前，關于Hp感染與胃癌患者預后的關系尚存在一定爭議。與Hp陰性者相比，Hp陽性的胃癌患者預后更好[13]。Wang等[14]一項Meta分析表明，Hp感染在胃癌預后中起保護作用。Choi等[15]通過探討晚期或轉移胃癌患者Hp感染與化療療效的關系，發現與Hp陰性者相比，Hp陽性者對化療更加敏感，且預后較好。Kim等[16]通過嚴格限定Hp感染狀態來評估Hp陰性胃癌患者的預后，發現Hp感染狀態并非是胃癌患者生存的預后因素。本研究結果顯示，胃癌組織中Hp相對感染量與患者生存率呈明顯負相關，說明Hp感染量越多，患者預后越差。導致上述結果差異的原因可能與患者年齡、術前是否行Hp根治、臨床分期及治療療效有關。

綜上所述，Hp感染可能參與胃癌的發生、發展及轉移，臨床上可作為評估胃癌進展和預后的潛在指標。

[1]Nagy P, Johansson S, Molloy-Bland M. Systematic review of time trends in the prevalence of Helicobacter pylori infection in China and the USA[J]. Gut Pathog, 2016, 8: 8.

[2]Zhang R G, Duan G C, Fan Q T,etal. Role of Helicobacter pylori infection in pathogenesis of gastric carcinoma[J]. World J Gastrointest Pathophysiol, 2016, 7(1): 97-107.

[3]劉燕, 于曉峰, 宓林, 等. 幽門螺桿菌在胃食管反流病中的作用[J]. 胃腸病學和肝病學雜志, 2015, 24(7): 807-809.

[4]虞思祎, 房靜遠. 根除幽門螺桿菌預防胃癌的影響因素研究進展[J]. 中華消化雜志, 2016, 36(1): 62-64.

[5]施貴冬, 羅志林, 付茂勇, 等. 國際抗癌聯盟-美國癌癥聯合委員會第7版食管癌和胃癌TNM分期系統在預測食管胃交界腺癌SiewertⅡ型患者預后中的價值[J]. 中華腫瘤雜志, 2014, 36(12): 916-921.

[6]Uno K, Iijima K, Shimosegawa T. Gastric cancer development after the successful eradication of Helicobacter pylori[J]. World J Gastrointest Oncol, 2016, 8(3): 271-281.

[7]Jiménez-Soto L F, Haas R. The CagA toxin of Helicobacter pylori: abundant production but relatively low amount translocated[J]. Sci Rep, 2016, 6: 23227.

[8]Asaka M, Takeda H, Sugiyama T,etal. What role does Helicobacter pylori play in gastric cancer?[J]. Gastroenterology, 1997, 113(6 Suppl): S56-S60.

[9]Kong Y, Ma L Q, Bai P S,etal. Helicobacter pylori promotes invasion and metastasis of gastric cancer cells through activation of AP-1 and up-regulation of CACUL1[J]. Int J Biochem Cell Biol, 2013, 45(11): 2666-2678.

[10] Qiu H B, Zhang L Y, Keshari R P,etal. Relationship between H. Pylori infection and clinicopathological features and prognosis of gastric cancer[J]. BMC Cancer, 2010, 10: 374.

[11] Meimarakis G, Winter H, Assmann I,etal. Helicobacter pylori as a prognostic indicator after curative resection of gastric carcinoma: a prospective study[J]. Lancet Oncol, 2006, 7(3): 211-222.

[12] 吳軍, 鄭海燕, 張志廣, 等. Hp感染與胃癌組織HIF-1α表達相關性及生物學意義的研究[J].中華腫瘤防治雜志, 2013, 20(6): 416-419.

[13] Yazbek P B, Trindade A B, Chin C M,etal. Challenges to the treatment and new perspectives for the eradication of Helicobacter pylori[J]. Dig Dis Sci, 2015, 60(10): 2901-2912.

[14] Wang F, Sun G, Zou Y,etal. Protective role of Helicobacter pylori infection in prognosis of gastric cancer: evidence from 2454 patients with gastric cancer[J]. PLoS One, 2013, 8(5): e62440.

[15] Choi I K, Sung H J, Lee J H,etal. The relationship between Helicobacter pylori infection and the effects of chemotherapy in patients with advanced or metastatic gastric cancer[J]. Cancer Chemother Pharmacol, 2012, 70(4): 555-558.

[16] Kim H J, Hwang S W, Kim N,etal. Helicobacter pylori and Molecular Markers as Prognostic Indicators for Gastric Cancer in Korea[J]. J Cancer Prev, 2014, 19(1): 56-67.

The Correlation of Helicobacter Pylori Infection with the Occurrence and Prognosis of Gastric Cancer

Patima·Abulimiti, Jie Yanghua, Xie Xinmei, Zhang Hongliang△.

Second Department of Oncology, The Affiliated Hospital of Traditional Chinese Medicine of Xinjiang Medical University, Urumchi 830000, China

Objective To explore the correlation of helicobacter pylori (Hp) infection with the occurrence and prognosis of gastric cancer. Methods 78 specimens of gastric cancer tissues and 26 specimens of paracarcinoma tissues were selected and the real-time quantitative polymerase chain reaction (RT-PCR) was adopted to detect the Hp relative infection rate of those issue specimens. Then the analyses were made to explore the correlation of the Hp relative infection rate with the clinicopathologic features and prognosis of gastric cancer respectively. Results The Hp relative infection rate in gastric cancer tissues was significantly higher than that in paracarcinoma tissues, and it was also higher than that in paracarcinoma tissues in each individual patient (P<0.01). Meanwhile, the Hp relative infection rate in gastric cancer was significantly correlated with clinical staging, invasive depth and lymphatic metastasis respectively (P<0.01), but it was not significantly correlated with gender, age, histological classification, and distant metastasis respectively (P>0.05). The survival analysis results revealed that the survival rate of patients was negatively correlated with the Hp relative infection rate with statistical significance (P<0.05). Conclusion The Hp infection is probably involved in the occurrence, development and metastasis of gastric cancer, and it can be applied clinically as the potential indexes for assessing the progression and prognosis of gastric cancer.

Helicobacter pylori; Gastric cancer; Clinicopathological feature; Prognosis

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1705.R.20161027.1701.042.html

10.3969/j.issn.1674-2257.2016.05.006

中國高校醫學期刊臨床專項資金(No:11525798)

R735.2

A

△通信作者：張洪亮，E-mail: zhanghongliang@csco.cn