缺氧缺血性腦病新生兒血清8-羥基脫氧鳥苷水平變化及其臨床意義

李曉梅，劉建紅，朱法榮，劉向紅，康麗麗，李曉鶯

(濟南市兒童醫院，濟南 252000)

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缺氧缺血性腦病新生兒血清8-羥基脫氧鳥苷水平變化及其臨床意義

李曉梅，劉建紅，朱法榮，劉向紅，康麗麗，李曉鶯

(濟南市兒童醫院，濟南 252000)

目的 探討8-羥基脫氧鳥苷(8-OHDG)在新生兒缺氧缺血性腦病(HIE)發生、發展中的作用。方法 選擇60例HIE患兒作為觀察組，其中HIE為輕度、中度、重度各20例；同期非HIE，有發熱表現但排除顱內感染的足月新生兒20例作為對照組。采用高效液相色譜法檢測兩組出生后1、3、7天血清8-OHDG。結果 出生后1、3、7天血清8-OHDG(pg/mL)水平：觀察組分別為43.8±2.1、69.9±3.2、34.9±2.8，其中輕度者分別為29.6±4.5、46.2±3.1、20.6±4.5，中度者分別為42.3±3.1、62.6±7.0、37.5±3.1，重度者分別為54.2±2.9、90.2±6.2、47.1±4.1；對照組分別為25.7±3.1、36.6±4.6、33.1±1.8；觀察組出生后第3天血清8-OHDG水平明顯高于出生后1、7天，相同時間點觀察組血清8-OHDG水平明顯高于對照組，P均<0.05；觀察組輕度、中度、重度者相同時間點兩兩比較差異均有統計學意義(P均<0.05)。結論 8-OHDG可能參與了HIE的病理生理過程，血清8-OHDG水平可作為判斷HIE病情的指標。

缺氧缺血性腦病；新生兒；8-羥基脫氧鳥苷

圍生期各種病理因素導致胎兒機體的供氧供血減少，可引起機體組織器官缺氧缺血性損害，其中新生兒窒息是影響神經系統發育的重要因素，腦細胞對此最為敏感，腦細胞凋亡在神經元變性的病理過程中起至關重要的作用[1]，由此即可導致新生兒缺氧缺血性腦病(HIE)，HIE輕度者幾乎不留神經系統后遺癥，中重度者病死率高，存活者多遺留智力低下、語言、運動、認知功能障礙等后遺癥。8-羥基脫氧鳥苷(8-OHDG)可評估體內氧化損傷和修復及氧化應激與DNA損傷程度，是目前國際上公認的評價DNA氧化損傷和氧化應激狀態的敏感指標和生物標志物[2～5]。本課題探討HIE患兒血清8-OHDG的水平變化及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 觀察組為2010年2月～2013年2月在我院住院的足月HIE患兒(排除早產因素對腦發育的影響)60例，其中男31例、女29例，剖宮產28例、順產32例，胎(周)齡(38.3±1.2)周，體質量(3.78±0.42)kg，母親年齡(29.5±1.1)歲。根據2005年第4屆全國新生兒學術會議修訂的新生兒HIE的診斷依據和臨床分度標準[6]，HIE為輕度、中度、重度者各20例。對照組為同期住院治療的非HIE，有發熱表現但經完善腦脊液檢查最終排除顱內感染的足月新生兒20例，其中新生兒肺炎8例、新生兒敗血癥6例、新生兒膿皰瘡6例，男11例、女9例；剖宮產12例、順產8例，胎(周)齡(39.2±0.9)周，體質量(3.70±0.54)kg，母親年齡(27.2±1.6)歲。兩組性別、產式、胎齡、體質量、母親年齡具有可比性。

1.2 血清8-OHDG檢測 兩組分別于出生1、3、7天采集靜脈血1.5 mL，3 000 r/min離心10 min分離血清。采用高效液相色譜法[7]檢測8-OHDG。操作過程中避免任何細胞刺激， 質譜條件：選用的電離源為ESI(+)，采用多反應模式進行檢測(MRM)；色譜條件：流動相：A=甲醇，B=10 mmol/L醋酸銨含0.1%甲酸的水溶液；A∶B=80∶20 (v/v)，流速：0.6 mL/min；進樣量：20 μL。

2 結果

兩組不同時間點血清8-OHDG水平比較見表1，觀察組不同病情者血清8-OHDG水平比較見表2。由表1可見，相同時間點觀察組血清8-OHDG水平明顯高于對照組，P均<0.05； 觀察組出生3天血清8-OHDG水平明顯高于出生后1、7天。由表2可見，觀察組輕度、中度、重度者相同時間點血清8-OHDG水平均明顯高于對照組(P均<0.05)。

表1 兩組不同時間點血清8-OHDG水平比較

注：與同組出生1天及出生7天比較，*P<0.05；與對照組同時間點比較，△P<0.01。

表2 觀察組不同病情者血清8-OHDG水平比較±s)

3 討論

各種圍產期異常的母體、胎盤、臍帶、羊水及胎兒因素等均可引起新生兒窒息，導致機體多臟器缺氧缺血性損害，腦細胞對缺氧最為敏感。新生兒腦組織的生理結構、功能、細胞間連接、信號傳導通路等方面均與成人腦組織不同，極易受各種不良因素影響，缺氧后的反應也不一樣。缺氧缺血性損傷后機體可產生大量活性氧自由基(ROS)如羥自由基、單線態氧等攻擊DNA分子中的鳥嘌呤堿基第8位碳原子而產生的一種氧化性加合物，其可攻擊DNA中的鳥嘌呤使脫氧鳥苷氧化成8-OHDG[8]。自由基一直被認為是引起DNA損傷的主要因素之一，可對生物體產生多種損害作用，其作用機制主要涉及DNA的損傷。羥自由基和超氧陰離子能直接與DNA分子反應，導致DNA鏈斷裂、堿基修飾和DNA蛋白交聯等氧化性DNA損傷，慢性的神經元凋亡在神經細胞的變性中起重要作用，并由此導致腦細胞凋亡或壞死。Kato等[9]在心血管領域研究證實8-OHDG是缺氧后DNA分子發生損傷的生物標志。Kang等[10]通過研究孕母及其新生兒也發現8-OHDG是氧化應激損傷的標志物。有研究表明，海馬區蛋白質對氧化應激損傷非常敏感，機體的氧化損傷廣泛存在，主要表現為生物大分子(如DNA、蛋白質、脂類等)結構和功能的損傷，氧化性DNA損傷在生物體細胞老化、死亡的發生過程中起重要作用[11,12]。

本研究結果表明，觀察組在病程同一階段存在缺氧缺血性損害后體內細胞出現DNA損傷，血清中8-OHDG生成明顯增多；對照組血清中8-OHDG雖有一定表達，但在急性期(住院治療3日內)及恢復期(病情好轉)差異無顯著性。本研究觀察組出生1、3、7天8-OHDG水平均明顯高于對照組，證實8-OHDG水平隨缺氧缺血性DNA損傷加重而升高，8-OHDG可能參與了HIE的病理生理過程。本研究觀察組病情輕、中、重者血清8-OHDG水平逐漸升高，提示其腦細胞缺氧重者細胞DNA損傷相應加重，8-OHDG與病情輕重程度密切相關，動態監測血清8-OHDG水平可指導臨床治療及評估預后[13,14]。有動物實驗表明，腦缺氧缺血損傷發生腦梗死再灌注后的12 h 8-OHDG明顯升高，DNA斷鏈可被檢測出，24 h達高峰，雖然時間峰值與臨床結果稍有出入，但提示8-OHDG可作為DNA的損傷標志物在一定程度上反映急性腦損傷程度[15]。本研究發現，8-OHDG在HIE的不同階段變化趨勢不同。出生后第1天時隨著分娩過程及機體環境的改變，腦細胞缺氧得到一定程度改善，但細胞DNA損傷并未停止，血清中8-OHDG水平開始升高；出生后第3天為新生兒HIE的急性期，8-OHDG水平較出生第1天及恢復期第7天明顯升高，與疾病的自然病程一致。提示臨床HIE急性期血清8-OHDG升高的患兒腦細胞損傷較重，盡快改善腦細胞代謝、防止腦水腫加重可縮小腦損傷面積。

綜上所述，血清8-OHDG水平可作為判斷窒息新生兒是否會發生HIE的指標，為可用于判斷神經節苷酯的治療效果及對DNA損傷的修復作用。

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山東省醫藥衛生科技發展計劃(HD004)。

李曉鶯(E-mail: lxy_jn@sina.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.36.017

R722.1

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1002-266X(2016)36-0054-03

2015-12-28)