靈芝菌絲體速溶粉的體外抗氧化作用*

劉丹，吳志龍，蔣帆，劉澤璽，馮翠萍

（山西農業大學食品科學與工程學院，山西太谷030801）

靈芝菌絲體速溶粉的體外抗氧化作用*

劉丹，吳志龍，蔣帆，劉澤璽，馮翠萍**

（山西農業大學食品科學與工程學院，山西太谷030801）

試驗研究靈芝菌絲體速溶粉的體外抗氧化作用，為其功能定位提供參考。主要對靈芝菌絲體速溶粉清除DPPH·、·OH、O2-·的能力，總還原力以及抑制脂質過氧化的能力進行測定，并檢測了靈芝菌絲體中的多糖含量。結果表明，靈芝菌絲體速溶粉中的靈芝多糖含量為4.89%。隨著靈芝菌絲體速溶粉濃度的增加，清除各自由基的清除率、總還原力和抑制脂質過氧化的抑制率均逐漸增大；清除DPPH·、·OH、O2-·的IC50值分別為0.912 mg·mL-1、3.173 mg·mL-1、0.863 mg·mL-1，抑制脂質過氧化作用的IC50值為6.706 mg·mL-1。說明靈芝菌絲體速溶粉有較強的抗氧化活性。

靈芝菌絲體速溶粉；多糖；自由基；總還原力；脂質過氧化作用

靈芝屬于擔子菌門（Basidiomycete）擔子菌綱（Basidiomycetes）多孔菌科（Polyporaceae），是我國傳統的藥食同源的真菌。靈芝子實體中含有多糖、核苷、三萜類化合物等多種活性成分[1]，其中靈芝多糖具有增強機體免疫、抗癌、抗氧化、降血糖等功能[2-4]；靈芝菌絲體中也含有水溶性多糖、三萜類化合物等活性成分[5-6]。因靈芝菌絲體液態發酵具有生產周期短、產量大等特點，被作為提取活性物質的重要來源[7]。研究表明，靈芝菌絲體中有多種葡聚糖、雜多糖以及多糖-蛋白質復合物等被分離出來，并顯示明顯的免疫活性[8]，且靈芝菌絲體中的三萜類化合物具有抗腫瘤作用[9]。本試驗對研制出的靈芝菌絲體速溶粉體外抗氧化作用進行研究，從而為該產品的功能定位提供一定的理論依據。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1靈芝菌絲體

山西農業大學食用菌中心提供。

1.1.2主要試劑

2,2-二苯基-1-苦基脛基游離自由基（DPPH·）、Tris：美國Sigma公司；其他試劑均為國產分析純。

1.1.3主要儀器與設備

2100型可見光分光光度計，上海尤尼柯儀器有限公司；分析天平，北京賽多利斯儀器系統有限公司；高速電動離心機，常州華普達教學儀器有限公司；科偉電熱恒溫水浴鍋，北京化玻聯醫療器械有限公司；PHS-SC型精密酸度計，上海虹儀儀器儀表有限公司；磁力加熱攪拌器，杭州儀表電機廠；TU-1801紫外可見光光度計，北京普析通用儀器公司。

1.2方法

1.2.1靈芝菌絲體速溶粉工藝流程

靈芝菌絲體速溶粉工藝流程見圖1。

圖1　靈芝菌絲體速溶粉工藝流程Fig.1 Process flow of Ganoderma lucidum mycelium instant powder

1.2.2靈芝菌絲體速溶粉中靈芝菌絲體多糖的測定

參照參考文獻[10]按苯酚-硫酸法進行測定。

1.2.3靈芝菌絲體速溶粉濃度的配置

配置8 mg·mL-1的靈芝菌絲體速溶粉溶液，梯度稀釋為4 mg·mL-1、2 mg·mL-1、1 mg·mL-1、0.5 mg·mL-1、0.25 mg·mL-1、0.125 mg·mL-1備用。

1.2.4清除DPPH·能力的測定

DPPH·清除率（P1）參照參考文獻[11]的方法進行測定，公式為：

式中：A0為無水乙醇吸光值；A1為樣液添加DPPH·及無水乙醇的吸光值；A2為樣液添加無水乙醇而未添加DPPH·的吸光值。

1.2.5清除·OH能力的測定

參照參考文獻[12]的方法進行測定，·OH清除率（P2）公式為：

式中：A3為蒸餾水作參比溶液的吸光值；A4為樣品反應液的吸光值；A5為樣液和無水乙醇溶液的吸光值。

1.2.6清除超氧陰離子能力的測定

參照參考文獻[13]的方法進行測定，清除率（P3）公式為：

式中：V1為加入樣液的鄰苯三酚氧化速率；V0為鄰苯三酚的自氧化速率。

1.2.7總還原力的測定

參照參考文獻[14]的方法進行測定，總還原力（H）公式為：

式中：A6為樣品反應液的吸光值；A7為未添加反應液的樣品溶液吸光值。

1.2.8抑制脂質過氧化能力的測定

抑制脂質過氧化能力的測定參照參考文獻[15]的方法進行，清除率（P4）公式為：

式中：A8為以蒸餾水代替樣品的反應液吸光值；A9為樣品反應液的吸光值；A10為未添加反應液的樣品溶液的吸光值。

2　結果與分析

2.1靈芝菌絲體速溶粉菌絲體多糖含量

經實驗測得，靈芝菌絲體粉中的多糖含量為4.89%。

2.2清除DPPH·的能力

靈芝菌絲體速溶粉對DPPH·自由基的清除作用及其IC50值見圖2。

由圖2可見，在試驗范圍內隨著濃度的增加，靈芝菌絲體速溶粉對DPPH·的清除能力逐漸增強，當濃度為2 mg·mL-1時，清除率達到91.92%（圖2A），IC50值為0.912 mg·mL-1（圖2B）。

2.3清除·OH的能力

靈芝菌絲體速溶粉對·OH的清除作用及其IC50值見圖3。

由圖3可見，在試驗范圍內隨著濃度的增加，靈芝菌絲體速溶粉對羥基自由基的清除能力逐漸增強，當濃度為8 mg·mL-1時，清除率達到72.66%（圖3A），IC50值為3.173 mg·mL-1（圖3B）。

2.4清除O2-·的能力

靈芝菌絲體速溶粉對O2-·的清除作用及其IC50值見圖4。

由圖4可見，在試驗范圍內隨著濃度的增加，靈芝菌絲體速溶粉對O2-·的清除能力逐漸增強，當濃度為8 mg·mL-1時，清除率達到69.31%（圖4A），IC50值為0.863 mg·mL-1（圖4B）。

2.5脂質過氧化抑制能力

靈芝菌絲體速溶粉對脂質過氧化的抑制作用及其IC50值見圖5。

由圖5可見，在試驗范圍內隨著濃度的增加，靈芝菌絲體速溶粉對脂質過氧化的抑制能力逐漸增強，當濃度為8 mg·mL-1時，清除率達到54.77%（圖5A），IC50值為6.706 mg·mL-1（圖5B）。

2.6總還原力

靈芝菌絲體速溶粉的總還原力見圖6。

由圖6可見，在試驗范圍內隨著濃度的增加，靈芝菌絲體速溶粉總還原力逐漸增強，當濃度為4 mg·mL-1時，吸光值達到0.710。

圖2　靈芝菌絲體速溶粉對DPPH·自由基的清除作用及其IC50值Fig.2Scavenging activities of Ganoderma lucidum mycelium instant powder on DPPH·and IC50

圖3　靈芝菌絲體速溶粉對羥自由基的清除作用及其IC50值Fig.3Scavenging activities of Ganoderma lucidum mycelium instant powder on·OH and IC50

圖4　靈芝菌絲體速溶粉對超氧陰離子的清除作用及其IC50值Fig.4Scavenging activities of Ganoderma lucidum mycelium instant powder on O2-·and IC50

3　結論與討論

試驗結果表明，靈芝菌絲體速溶粉具有一定的抗氧化作用，這可能與產品中含有的多糖等活性成分有一定的關系。靈芝菌絲體速溶粉中含有多糖分子上的醇羥基等活性基團與自由基，表現出強還原力，同時，降低了脂質過氧化速率；醇羥基等活性基團能傳遞質子和電子，與DPPH·自由基能有效結合，從而起到清除DPPH·自由基的目的；其活性基團能與·OH及·OH產生所必需的金屬離子有效反應，抑制·OH的產生并清除已產生的部分·OH；能通過活性羥基提供的氫原子與活潑的超氧陰離子反應生成穩定化合物，從而起到清除O2-·的作用[16-17]，但體內是否具有抗氧化活性還有待進一步研究。

靈芝菌絲體速溶粉中的靈芝多糖含量4.89%，有較強的清除自由基和抑制脂質過氧化能力，說明研制的靈芝菌絲體速溶粉具有抗氧化作用。

圖5　靈芝菌絲體速溶粉對脂質過氧化的抑制作用及其IC50值Fig.5Reducing activity of lipid peroxidation and the IC50of Ganoderma lucidum mycelium instant powder

圖6　靈芝菌絲體速溶粉的總還原力Fig.6Total reducing power of Ganoderma lucidum mycelium instant powder

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Anti-oxidation Activity of Ganoderma lucidum Mycelium Instant Powder

LIU Dan,WU Zhi-long,JIANG Fan,LIU Ze-xi,FENG Cui-ping
(College of Food Science and Engineering,Shanxi Agricultural University,Taigu 030801,China)

The anti-oxidation activity of Ganoderma lucidum mycelium instant powder in vitro were studied,which provided some references for its functional localization.The polysaccharide contents were determined,and G.lucidum mycelium instant scavenging capacity of DPPH·,·OH and O2-·,the total reducing power and inhibiting lipid oxidation activity were detected. The results showed that the G.lucidum polysaccharide content of mycelium instant powder is 4.89%.With the increase of the concentrations of G.lucidum mycelium instant,values of the anti-oxidant ability increased,and the IC50on DPPH·,·OH,O2-· and lipid peroxidation is 0.912 mg·mL-1,3.173 mg·mL-1,0.863 mg·mL-1and 6.706 mg·mL-1respectively.We infered that G. lucidum mycelium instant powder had strong antioxidant activity.

Ganoderma lucidum mycelium instant powder;polysaccharide;free radicals;reducing power;inhibiting lipid oxidation activity

S646.9

A

1003-8310（2016）04-0063-04

10.13629/j.cnki.53-1054.2016.04.016

山西省普通高等學校大學生創新創業訓練項目（12-23）；山西省煤基重點科技攻關項目（FT2014-03-01）。

劉丹（1995-），女，本科在讀，主要研究方向為食用菌營養與加工。E-mail:liudan95730@163.com

**通信作者：馮翠萍（1970-），女，博士，教授，主要從事食品營養加工與安全研究。E-mail:ndfcp@163.com

2016-05-25