轉錄因子扭曲基因表達異常在早期子宮頸癌發病中的意義及對預后的影響

宋佳倫，楊 琦

(山東大學附屬生殖醫院，山東 濟南 250000)

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轉錄因子扭曲基因表達異常在早期子宮頸癌發病中的意義及對預后的影響

宋佳倫，楊 琦

(山東大學附屬生殖醫院，山東 濟南 250000)

目的 探討轉錄因子扭曲基因(Twist)表達異常在早期子宮頸癌發病中的意義及對預后的影響。方法 選取早期子宮頸癌患者87例，子宮頸上皮內瘤變(CIN)患者43例和正常子宮組織40例，實時熒光定量PCR檢測早期子宮頸癌、CIN和正常子宮組織中Twist基因表達，早期子宮頸癌患者術后隨訪截止2015年5月31日，以早期子宮頸癌組織中Twist mRNA表達量中位值為界值，將患者分為高表達組(n=46)和低表達祖(n=41)，利用Kaplan-Meier生存分析法分析無進展生存時間和生存時間。結果 早期子宮頸癌組織中Twist mRNA相對表達量(2.21±0.17)，高于CINⅡ和CIN Ⅲ組織中的(1.32±0.13)和(1.71±0.15)及正常子宮組織中的(1.06±0.11)，且CINⅢ>CINⅡ>正常子宮組織，差異均有統計學意義(P<0.05)；早期子宮頸癌組織中Twist mRNA相對表達量與臨床分期、分化程度、病理類型和淋巴結轉移有關(t值分別為27.721、18.047、18.213、19.483，均P<0.05)；低表達組患者中位無進展生存時間49.43個月，高表達組患者中位無進展生存時間37.52個月，Log Rank檢驗顯示差異有統計學意義(χ2=4.350，P=0.037)，低表達組患者中位生存時間53.8個3月，高表達組患者中位生存時間43.91個月，Log Rank檢驗顯示差異有統計學意義(χ2=4.381，P=0.036)。結論 Twist基因在早期子宮頸癌組織中呈高表達，高表達患者術后無進展生存時間和生存時間縮短。

子宮頸癌；轉錄因子扭曲基因；表達；預后

子宮頸癌作為女性常見惡性腫瘤，具有惡性程度高、侵襲力強、易轉移等特點，是第三位導致女性死亡的惡性腫瘤[1]。目前，該病發病機制尚未完全清楚。轉錄因子扭曲基因(twisted gene transcription factor，Twist)作為一種轉錄因子，在胚胎發生過程中發揮關鍵性調控作用，具有癌基因的特質，可通過調控死亡相關基因表達及上皮-間質轉化而調節腫瘤轉移及侵襲過程[2]。研究表明，Twist與多種腫瘤生長、增殖、侵襲轉移、耐藥等過程關系密切[3-4]。本研究嘗試利用實時熒光定量聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction，PCR)技術分析Twist在早期子宮頸癌組織中表達，以及其與臨床病理特征之間的關系，利用生存分析法探討其與患者預后的關系，以期為臨床實踐提供基礎資料。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2010年4月至2012年5月在山東大學附屬生殖醫院擇期行手術治療的早期子宮頸癌患者87例，年齡28～74歲，平均年齡(49.32±8.93)歲，根據國際婦產科聯合會(International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO)2009年臨床分期標準：Ⅰa期5例，Ⅰb期54例，Ⅱa期28例；分化程度：低分化16例，中分化59例，高分化12例；病理類型：鱗癌72例，腺癌15例；伴有淋巴結轉移14例。同期，選取在我院行宮頸錐切術治療的子宮頸上皮內瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)患者43例，年齡27～75歲，平均年齡(50.84±9.31)歲，包括CIN Ⅱ 17例和CINⅢ26例；留取子宮肌瘤行子宮全切術患者正常子宮組織40例作為對照組，年齡27～73歲，平均年齡(48.82±8.71)歲。所有研究對象術前均未接受放化療治療，排除其他子宮腫瘤者。所有研究對象均留取子宮頸組織，保存于-70℃冰箱以備檢。本研究通過醫院倫理委員會批準，所有研究對象均行知情同意。

1.2方法

1.2.1主要試劑及器材

Trizol總RNA提取試劑盒購自美國Biomiga公司，逆轉錄試劑盒和PCR反應試劑盒均購自寶生物工程(大連)有限公司，Twist及內參引物序列均由上海生工生物公司設計合成，紫外分光光度計購自上海鳳凰光學科儀有限公司，實時熒光定量PCR儀購自美國ABI公司。

1.2.2實時熒光定量PCR檢測早期子宮頸癌、子宮頸上皮內瘤變和正常子宮組織中轉錄因子扭曲基因表達

取保存的子宮頸組織，研磨后，用細胞裂解液進行裂解，用Trizol總RNA提取試劑盒對總RNA進行提取，用紫外分光光度計對獲得的總RNA進行檢測，取A260/A280≥1.80樣本完成后續實驗操作。利用逆轉錄試劑盒進行逆轉錄獲得cDNA模板單鏈，以cDNA為模板用PCR反應試劑盒進行PCR。Twist及內參引物序列分別為：Twist引物：上游：5′-GGAGTCCGCAGTCTTACGAG-3′，下游：5′-TCTGGAGGACC￣TGGTAGAGG-3′；GAPDH引物,上游：5′-GGGAAACTGT￣GGCGTGAT-3′，下游：5′-GTGGTCGTTGATTTCAAT-3′。PCR反應條件：94℃ 60s，94℃ 30s，56℃ 20s，74℃ 15s，連續進行40個循環。每個樣品均設置3個反應復孔。以GAPDH為參照，用2-△△Ct法獲得不同組織中Twist mRNA相對表達量。

1.2.3病例隨訪

所有早期子宮頸癌入選患者均完成隨訪，隨訪形式包括門診和電話隨訪，平均每3個月隨訪一次，未出現失訪病例，隨訪截止2015年5月31日，以術后病情進展、惡化或復發為終點事件，記錄無進展生存時間，以死亡為終點時間，記錄生存時間。

1.3統計學方法

2結果

2.1早期子宮頸癌、子宮頸上皮內瘤變和正常子宮組織中轉錄因子扭曲基因表達

早期子宮頸癌組織中Twist mRNA相對表達量(2.21±0.17)，高于CINⅡ和CIN Ⅲ組織中的(1.32±0.13)和(1.71±0.15)及正常子宮組織中的(1.06±0.11)，CIN Ⅲ和CINⅡ均高于正常子宮組織，且CIN Ⅲ高于CINⅡ，差異均有統計學意義(F=69.835，P<0.05)，見圖1。

圖1 早期子宮頸癌、CIN和正常子宮組織中Twist基因表達

Fig.1 Expressions of Twist gene in early stage cervical cancer, CIN and normal tissues

2.2早期子宮頸癌組織中轉錄因子扭曲基因表達與臨床病理特征之間的關系

早期子宮頸癌組織中Twist mRNA相對表達量與年齡無關(P>0.05)，而與臨床分期、分化程度、病理類型和淋巴結轉移有關(t值分別為27.721、18.047、18.213、19.483，均P<0.05)，見表1。

注：與Ⅰa相比，*P<0.05；與Ⅰb相比，#P<0.05。

2.3早期子宮頸癌組織中轉錄因子扭曲基因表達對無進展生存時間和生存時間的影響

以早期子宮頸癌組織中轉錄因子扭曲基因 mRNA相對表達量中位值為界值，將患者分為高表達組(n=46)和低表達祖(n=41)，低表達組患者中位無進展生存時間49.43個月，高表達組患者中位無進展生存時間37.52個月，Log Rank檢驗顯示差異有統計學意義(χ2=4.350，P=0.037)，見圖2；低表達組患者中位生存時間53.83個月，高表達組患者中位生存時間43.91個月，Log Rank檢驗顯示差異有統計學意義(χ2=4.381，P=0.036)，見圖3。

圖2 早期子宮頸癌組織中Twist基因表達對無進展生存時間的影響

Fig.2 Influence of the expressions of Twist gene in early-stage cervical cancer tissues on progression-free survival time

圖3 早期子宮頸癌組織中Twist基因表達對生存時間的影響

Fig.3 Influence of the expressions of Twist gene in early-stage cervical cancer tissues on survival time

3討論

3.1轉錄因子扭曲基因可能與早期子宮頸癌發病有關

隨著診療技術的進展，子宮頸癌早期階段便可診斷發現，有效的手術治療極大的改善了患者預后及術后生活質量[5-6]。但對患者治療后隨訪發現，子宮頸癌患者術后具有較高的復發率，且隨著復發、病情進展惡化，死亡率隨之升高，不利于患者預后[7]。因此，對影響早期子宮頸癌患者術后復發的相關機制開展研究，對改善患者預后具有重要意義。Twist作為高度保守的轉錄因子，在胚胎發育過程中的細胞重建中發揮重要調控作用，近年來發現，其在腫瘤細胞增殖、分化、侵襲、轉移過程中發揮關鍵性調節作用[8]。有研究指出，Twist可能通過上皮-間質轉化而使細胞失去極性，失去了與基底膜連接，而加速細胞侵襲與遷移過程[9]。Twist在多種惡性腫瘤組織中呈高表達，作為一個癌基因而參與腫瘤進展及細胞侵襲、轉移過程[10]。本研究顯示，Twist基因在早期子宮頸癌和CIN組織中均出現不同程度表達，且早期子宮頸癌> CIN Ⅲ>CINⅡ>正常子宮組織，說明Twist基因隨著子宮頸病變嚴重程度而表達增加，可能與早期子宮頸癌發病有關，在子宮頸癌發病中發揮癌基因作用。

3.2轉錄因子扭曲基因表達水平可作為子宮頸癌患者預后的預測指標

本研究顯示，早期子宮頸癌組織中Twist mRNA相對表達量與臨床分期、分化程度、病理類型和淋巴結轉移有關(P<0.05)，進一步說明Twist可能與早期子宮頸癌病情嚴重程度及侵襲、轉移有關，與丁婭妮等[11]研究結論相同。有研究指出，Twist在卵巢上皮性癌中呈高表達，且高表達患者無進展生存時間及總生存時間均縮短[12]。本研究顯示，以早期子宮頸癌組織中Twist mRNA相對表達量中位值為界值，高表達組患者中位無進展生存時間和中位生存時間均短于低表達組患者，說明Twist基因表達與早期子宮頸癌患者預后有關，Twist基因高表達預示患者預后不良，與Wang等[13]研究結論相同，提示Twist基因表達水平可作為子宮頸癌患者預后的預測指標。

綜上所述，Twist基因在早期子宮頸癌組織中呈高表達，與子宮頸癌發生、進展、轉移過程密切相關，且Twist基因高表達患者術后無進展生存時間和生存時間縮短，為下一步開展基因治療以改善患者預后提供了新的靶位。

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[專業責任編輯：任慕蘭]

Significance of abnormal expression of twisted gene transcription factor in pathogenesis of early-stage cervical cancer and its influence on prognosis

SONG Jia-lun,YANG Qi

(Affiliated Reproductive Hospital of Shandong University, Shandong Jinan 250000, China)

Objective To investigate the significance of abnormal expression of twisted gene transcription factor (Twist) in pathogenesis of early-stage cervical cancer and its influence on prognosis. Methods Totally 87 cases of early-stage cervical cancer, 43 cases of cervical intraepithelial neoplasia (CIN) and 40 cases of normal uterine tissues were selected. The expressions of Twist gene in early-stage cervical cancer, CIN and normal tissues were detected by using real-time PCR. All patients with early-stage cervical cancer were postoperatively followed up till May 31, 2015. Taking the median of Twist mRNA expression level in early-stage cervical cancer tissues as cutoff value, the patients were divided into high expression group (n=46) and low expression group (n=41). The progression-free survival time and survival time were analyzed by using Kaplan-Meier survival analysis.Results The relative expression levels in early-stage cervical cancer tissues was 2.21±0.17, which was higher than that in CINⅡ and CIN Ⅲ tissues(1.32±0.13, 1.71±0.15) and that in normal uterine tissue (1.06±0.11). And it was higher in CIN Ⅲ than in CINⅡand than in normal uterine tissue with statistically significant differences (P<0.05). The relative expression levels of Twist mRNA in early-stage cervical cancer tissues were related with clinical stage, degree of differentiation, histological type and lymph node metastasis (tvalue was 27.721, 18.047, 18.213 and 19.483, respectively, allP<0.05). The median progression-free survival time in low expression group was 49.43 months, and in high expression group it was 37.52 months. Log Rank test showed significant difference (χ2=4.350,P=0.037). The median survival time in low expression group was 53.83 months, and in high expression group it was 43.91 months. Log Rank test showed significant difference (χ2=4.381,P=0.036). Conclusion Twist gene is highly expressed in early-stage cervical cancer tissue. The progression-free survival time and survival time of high expression patients after surgery are shortened.

cervical cancer; twisted gene transcription factor (Twist); expression; prognosis

2016-05-13

河南省2014科技發展計劃資助項目(編號：142102310416)

宋佳倫(1978 -)，女，主治醫師，碩士，主要從事婦產科工作。

楊 琦，副主任醫師。

10.3969/j.issn.1673-5293.2016.09.012

R711.7

A

1673-5293(2016)09-1066-03