產前B族鏈球菌篩查對新生兒影響*

唐敏兒，鄧志聲，黃冬梅，江新湄，覃麗軍

(廣東省佛山市南海經濟開發區人民醫院檢驗科 528222)

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·論 著·

產前B族鏈球菌篩查對新生兒影響*

唐敏兒，鄧志聲，黃冬梅，江新湄，覃麗軍△

(廣東省佛山市南海經濟開發區人民醫院檢驗科 528222)

目的 探討孕期進行B族鏈球菌(GBS)篩查并進行治療對新生兒GBS發病率及臨床表現的影響。方法 選取孕晚期經過常規篩查GBS陽性結果并給予抗菌藥物治療，分娩時診斷為胎膜早破的47例孕婦作為實驗組；選取孕晚期未經過常規GBS篩查和治療，分娩時診斷為胎膜早破的73例孕婦作為對照組，觀察2組新生兒的臨床表現，并收集咽拭子標本，采用PCR方法檢測GBS。結果 實驗組無新生兒發生GBS感染、呼吸困難、青紫、發熱，對照組有7例GBS感染，2例呼吸困難，2例青紫，4例發熱。2組新生兒各指標比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。結論 孕期行GBS篩查與治療，可有效降低新生兒GBS感染的發病率。

B族鏈球菌； 抗菌藥物； 胎膜早破

B族鏈球菌(GBS)是 β溶血性的革蘭陽性菌，為兼性厭氧菌，也稱為無乳鏈球菌。GBS是條件致病菌，多存在于機體下消化道及泌尿生殖道。孫自鏞等[1]報道，妊娠女性GBS攜帶率為10%～30%，GBS導致圍產期孕婦嚴重感染。在發達國家GBS列入圍產期感染的首要致病菌[2]。美國CDC《妊娠期GBS疾病預防(2010年版)》對GBS產期篩查及預防作出了相關規定[3]。GBS常見傳播途徑為母嬰傳播，定植在生殖道的GBS可以逆行性感染引起宮內感染。此外在分娩過程中，新生兒可能因羊水吸入產道而感染GBS，表現為肺炎、敗血癥、腦膜炎等[4]。根據發病時間可分為早發型GBS疾病(GBS-EOD)和晚發型GBS疾病(GBS-LOD)，GBS-EOD的病死率高達20%～50%[5-6]。早發型GBS為新生兒出生后1周內(0～7 d)發病，主要表現為爆發性肺炎、敗血癥，少部分為腦膜炎。產時抗菌藥物預防性治療(IAP)可有效降低GBS-EOD的發病率[7]。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2015年1～12月該院診斷為胎膜早破的孕婦47例作為實驗組，35～37孕周常規篩查GBS，陽性者給予IAP治療。選取2010年1月至2014年12月該院診斷為胎膜早破(PROM)，即在臨產前膜自發性破裂者[8]，73例孕婦作為對照組。2組新生兒均分別在產后24 h內、第7天進行咽拭子采樣，采用PCR方法檢測GBS，結果陽性者判定為新生兒GBS感染。2組臨床資料包括孕婦年齡、胎膜早破時的孕周、孕婦體質量、新生兒出生體質量、新生兒性別，以及新生兒身體狀況觀察指標[如1 min阿氏(Apgar)評分、2 min Apgar評分、呼吸困難、青紫、發熱等]。實驗組納入標準：(1)出現胎膜早破。(2)篩查GBS陽性并進行預防性抗菌藥物。(3)臨產時，進行預防性抗菌藥物的孕婦，且用藥時間長于4 h。(4)無其他感染性疾病或帶菌。(5)孕婦無青霉素過敏和耐藥。(6)使用青霉素進行IAP治療。(7)單胎妊娠。(8)胎膜早破小于或等于18 h。排除標準：(1)非經陰道分娩。(2)新生兒出現敗血癥、腦膜炎、發熱等，但非GBS感染，GBS培養呈陰性。對照組納入標準：(1)出現胎膜早破。(2)孕婦孕期未進行抗菌藥物治療。(3)孕婦無其他感染性疾病或帶菌。(4)單胎妊娠。(5)胎膜早破小于或等于18 h。(6)孕期未篩查GBS。排除標準：(1)非經陰道分娩。(2)新生兒出現敗血癥、腦膜炎、發熱等，但非GBS感染，GBS培養呈陰性。

1.2 儀器與試劑 細菌鑒定采用生物梅里埃公司ATB Expression 1200細菌鑒定儀；GBS核酸檢測探針、引物使用福建泰普生物科學有限公司產品；GBS核酸檢測應用ABI 7500熒光定量PCR儀。

1.3 方法 (1)35～37孕周篩查GBS，外陰消毒，無菌棉簽在陰道下1/3和肛周2～5 cm分別取樣。將標本種植于愛德華培養基中，培養12 h后均與涂在哥倫比亞血瓊脂平板上再培養，置于37 ℃孵育箱進行培養，培養24 h后再觀察培養結果。如果未發現可疑菌落則培養至72 h，無可疑菌落為陰性結果。如果發現可疑菌落，則做革蘭染色并轉種血平板進一步培養觀察，使用ATB Expression 1200細菌鑒定儀(生物梅里埃公司)作細菌鑒定，同時接種M-H血平板做藥物敏感試驗。(2)篩查GBS陽性且在篩查后5周內胎膜早破的孕婦，且對青霉素無過敏反應，給予IAP治療。青霉素G首次劑量480萬單位靜脈滴注，然后240萬單位/4 h直至分娩。(3)胎膜早破孕婦，分娩后2組新生兒均進行咽拭子采樣，使用PCR方法檢測GBS。以GBS特異性保守序列(編碼CAMP蛋白)作為靶序列、設計引物和探針。將標本用清洗液洗去雜質，采用加熱變性法破壞細菌并分離DNA。PCR反應條件：第1步94 ℃ 2 min 1個循環；第2步94 ℃ 20 s，55 ℃ 45 s，在每次55 ℃ 45 s步驟結束時收集熒光信號，第2步反應 40個循環。PCR試劑組分包括GBS特異引物、內參照引物；FAM熒光標記的GBS特異探針、Texas Red熒光標記的內參照探針。每次上機檢測均設置陽性與陰性對照。內參照引物探針的作用是監測PCR反應體系的正常運行。實驗結果判讀原則：因模板之間的競爭性反應，標記FAM熒光的GBS陽性時，標記為Texas Red熒光的內參照可顯示為陽性或陰性；當GBS陰性時，內參必須為陽性才能保證陰性結果的準確性。對傳統培養方法為陰性而PCR結果為陽性的不相符標本，以編碼CMAP蛋白，但不同于GBS熒光PCR產物的序列作為靶序列設計引物并進行擴增，2%瓊脂糖凝膠電泳鑒定產物(260 bp)進行桑格(Sanger)測序，測序產物進行序列比對分析，鑒別GBS序列，確定熒光PCR結果的準確性[9]。

2 結 果

2.1 2組研究對象一般臨床資料結果比較 2組孕婦和新生兒的年齡、體質量等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。

表1 2組研究對象的一般資料結果比較±s)

2.2 2組新生兒GBS感染結果比較 實驗組胎膜早破孕婦GBS陽性并進行青霉素預防性治療，對照組胎膜早破孕婦孕期未進行IAP治療。實驗組新生兒出生后第7天進行隨訪登記數據，實驗組無新生兒感染GBS，但對照組有7例陽性，感染率為9.5%，2組GBS感染率比較，差異有統計學意義(P<0.05)。實驗組無新生兒出現呼吸困難、青紫、發熱，對照組發生呼吸困難2例，青紫2例，發熱4例，發病率分別為2.7%、2.7%、5.5%。2組1 min和2 min Apgar評分比較，差異有統計學意義(P<0.05)，實驗組1、2 min Apgar評分分別是(9.2±0.1)、(9.5±0.4)分，對照組1、2 min Apgar評分分別是(9.1±0.2)、(9.3±0.2)分。孕期進行IAP治療，可提高新生兒Apgar評分。見表2。

表2 2組新生兒GBS感染結果比較

3 討 論

《胎膜早破的診斷與處理指南(2015年版)》指出GBS是產時和產褥期感染、胎兒宮內感染、新生兒感染的重要病原菌，應重視GBS感染的防治[8]。預防新生兒早發型GBS疾病，主要預防措施是孕婦在孕期進行GBS篩查，陽性孕婦分娩時給予IAP治療，減少宮內感染[10]。本研究實驗組運用IAP進行預防，而對照組則未進行IAP預防，2組新生兒各觀察指標差異均有統計學意義(P<0.05)。美國CDC指南中建議GBS帶菌孕婦分娩時進行IAP治療，可減少新生兒在分娩過程中感染GBS引發早發型GBS疾病。

本研究孕婦是通過肉湯增菌培養方法進行判斷是否感染GBS，無法判斷受GBS感染的孕婦是否重度定植，GBS重度定植是指在普通培養皿進行細菌培養則可以培養出GBS，而不需要用特殊的選擇性肉湯培養基進行培養[11]。選擇肉湯培養基進行培養GBS，可提高GBS檢出率。GBS可定植于一半新生兒的呼吸道或消化道，但一般不發病，只有1%～2%感染GBS的新生兒會發展為侵襲性感染進而成為早發型GBS疾病或晚發型GBS疾病。

有研究表明妊娠33周前出現的早產兒早發GBS疾病的病死率高達30%，足月新生兒的病死率僅為2%～3%[3]。實驗組無33周前胎膜早破的病例，所以未出現新生兒感染GBS，一方面與分娩時運用IAP有關，另一方面與病例組成有關，無法判斷孕周是否為早發型GBS疾病的影響因素。

本研究結果表明，建議產科門診可將GBS篩查作為常規篩查，對于有合并癥、感染、可疑胎膜早破的情況可將篩查時間提前，如孕28周，便于細菌培養和藥敏試驗，給予產科住院部IAP治療指導，減少新生兒GBS感染率。

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The influence of group B streptococcus screening to newborns*

TANGMiner,DENGZhisheng,HUANGDongmei,JIANGXinmei,QINLijun△

(DepartmentofClinicalLaboratory,People′sHospitalofNanhaiEconomicDevelopmentZone,Foshan,Guangdong528222，China)

Objective To explore the influence of group B Streptococcus screening during pregnancy and the incidence of the early-onset GBS disease for newborns.Methods Totally 47 cases of pregnant women with premature rupture of membranes (PROM),which were GBS positive and accepted antibiotic treatment,who were chosen as the experimental group.While 73 cases of pregnant women with premature rupture of membranes (PROM),which were not accept GBS screening and antibiotic treatment,were chosen as control group.The neonatal clinical manifestations were observed.The swab specimens were collected from throat and detected of GBS by using PCR method.Results The experimental group showed no occurrence of neonatal group B streptococcal infection,dyspnea,cyanosis and fever.Totally 7 cases of the control group had group B Streptococcus infection.Totally 2 cases had dyspnea and 2 cases had cyanosis.Totally 4 cases had fever.The neonatal research indicators of these two groups were statistically significant differences (P<0.05).Conclusion The group B Streptococcus screening during pregnancy would effectively reduce the incidence of neonatal infection of group B Streptococcus.

group B Steptococcus; intrapartum antibiotic prophylaxis; premature rupture of membranem

廣東省佛山市衛生和計生局醫學科研課題(2015278)。

唐敏兒，女，主管技師，主要從事臨床檢驗研究。△

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.20.019

A

1673-4130(2016)20-2852-03

2016-04-21

2016-07-11)