CD4+T細胞與放療前后腫瘤標志物變化

朱 江，何津祥，何津春

(蘭州大學第一醫院：1.中心實驗室；2.放射治療中心；3.醫學檢驗中心，蘭州 730000)

?

·論 著·

CD4+T細胞與放療前后腫瘤標志物變化

朱 江1，何津祥2，何津春3△

(蘭州大學第一醫院：1.中心實驗室；2.放射治療中心；3.醫學檢驗中心，蘭州 730000)

目的 探討晚期無法手術的乳腺癌患者放射治療前后癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)、糖鏈抗原125(CA125)、糖鏈抗原15-3(CA15-3)的變化，探討CD4+T細胞對患者放療效果。 方法 采用化學發光免疫分析方法檢測38例晚期乳腺癌患者和30例健康者血清CEA、AFP、CA125、CA15-3水平；使用流式細胞儀檢測外周血CD3+、CD4+、CD8+T百分含量及CD4+/CD8+比值。結果 CD4+T百分含量正常組放療后CEA、AFP、CA125、CA15-3水平低于放療前，差異有統計學意義(P<0.05)；CD4+T百分含量異常組放療后CEA、CA15-3低于放療前，差異有統計學意義(P<0.05)。結論 晚期乳腺癌患者，正常組CD4+T百分含量放療前后CEA、AFP、CA125、CA15-3水平有顯著差異，該類患者具有放療臨床效果。

乳腺癌； CD4+T細胞； 癌胚抗原; 甲胎蛋白; 糖鏈抗原125; 糖鏈抗原15-3

乳腺癌目前已成為威脅女性健康的常見腫瘤[1-2]。乳腺癌發生時，機體的免疫功能和腫瘤標志物都發生改變，其變化水平與乳腺癌的發展密切相關[3-5]。臨床放射治療是乳腺癌常用的方法之一，放療提高患者的總生存率，但會導致機體免疫功能進一步惡化[6-7]。現對CD4+T百分含量正常或異常時與腫瘤標志物[癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)、糖鏈抗原125(CA125)、糖鏈抗原15-3(CA15-3)]的相關性，探討晚期無法手術的乳腺癌患者放療前后各指標水平的變化，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2009年1月至2013年5月該院放射治療中心收治的38例住院乳腺癌患者，年齡28～68歲，中位年齡48歲；均為晚期患者，已無手術指證，故放療前未接受過手術治療；臨床診斷均經病理證實(浸潤性導管癌36例，浸潤性小葉癌2例)；均無其他系統惡性腫瘤，無嚴重心、肝、腎、肺等疾病；無免疫系統疾病，放療前未使用免疫抑制劑；放療均有效果(放療有效時，CT提示乳腺癌塊的影像有改變，即在原腫塊部位形成瘢痕結節)。健康對照為該院體檢健康女性30例，年齡33～68歲，中位年齡45歲；無免疫系統疾病；無其他系統惡性腫瘤；無嚴重心、肝、腎、肺等重要臟器疾病。

1.2 儀器與試劑 美國Beckman Coulter公司EPICS-XL流式細胞儀和Q-PREP全血自動制備儀；北京科美生物技術有限公司CHEMLIN 100型半自動化學發光儀。單克隆抗體CD3-PC5/CD4-FITC/CD8-PE、IgG1 FITC/IgG1 PE/IgG1 PC5購自聯科生物公司；CEA、AFP、CA125、CA15-3化學發光法定量檢測試劑盒，購自北京科美生物技術有限公司。

1.3 實驗方法 (1)標本采集：同一患者放療前2～3 d及放療后2～3周分別抽取EDTA抗凝血2 mL用于T細胞亞群檢測，同時抽取全血2 mL分離血清后用于CEA、AFP、CA125、CA15-3的檢測。(2)T細胞亞群檢測：按文獻[8]方法進行操作。(3)腫瘤標志物檢測：CEA、AFP、CA125、CA15-3按試劑盒說明書嚴格操作。(4)參考范圍：CEA為 0～10.0 ng/mL；AFP為 0～10.0 ng/mL；CA125為0～35.0 U/mL；CA15-3為 0～30.0 U/mL。CD3+T百分含量為61.1%～77%；CD4+T百分含量為25.8%～41.6%；CD8+T百分含量為18.1%～29.6%；CD4+/CD8+T細胞比值為0.98～1.94。

1.5 病例分組 (1)按照放療前CD4+T百分含量是否超出正常參考范圍(25.8%～41.6%)，將38例乳癌患者分為CD4+T正常組和CD4+T異常組。CD4+T正常組患者23例，CD4+T百分含量為25.8%～41.6%；CD4+T異常組患者15例，CD4+T百分含量小于25.8%或大于41.6%。(2)按照放療前CD4+/CD8+比值是否超出正常參考范圍(0.98～1.94)，將38例乳癌患者分為CD4+/CD8+比值正常組和CD4+/CD8+比值異常組。CD4+/CD8+比值正常組患者18例，CD4+/CD8+比值為0.98～1.94；CD4+/CD8+比值異常組患者20例，CD4+/CD8+比值小于 0.98或大于1.94。

2 結 果

2.1 乳腺癌患者放療前后T細胞亞群結果比較 放療后CD3+、CD4+T百分含量下降，與放療前比較，差異有統計學意義(P<0.05)；CD8+T百分含量放療前后比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

2.2 CD4+T正常組放療前后腫瘤標志物結果比較 CD4+T正常組患者放療后CEA、AFP、CA125、CA15-3水平下降，與放療前比較，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

2.3 CD4+T異常組放療前后腫瘤標志物結果比較 CD4+T異常組患者放療后CEA、CA15-3水平下降，與放療前比較，差異有統計學意義(P<0.01)；AFP和CA125水平與放療前比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

2.4 CD4+/CD8+比值正常組放療前后腫瘤標志物結果比較 CD4+/CD8+比值正常組患者放療后CEA、AFP、CA15-3含量下降，與放療前比較，差異有統計學意義(P<0.01)；CA125含量放療后較放療前降低，但差異無統計學意義(P>0.05)。見表4。

2.5 CD4+/CD8+比值異常組放療前后腫瘤標志物結果比較 CD4+/CD8+比值異常組患者放療后CEA、CA15-3水平下降，與放療前比較，差異有統計學意義(P<0.01)；AFP 和CA125水平與放療前比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表5。

表1 乳腺癌患者放療前后T細胞亞群結果比較±s)

注：與健康對照組比較，aP<0.01，bP<0.05；與放療前比較，cP<0.05。

表2 CD4+T正常組患者放療前后腫瘤標志物結果比較±s)

表3 CD4+T異常組放療前后腫瘤標志物結果比較±s)

表4 CD4+/CD8+比值正常組放療前后腫瘤標志物結果比較±s)

表5 CD4+/CD8+比值異常組放療前后腫瘤標志物結果比較±s)

3 討 論

乳腺癌發生時機體有免疫反應活性的CD4+T細胞減少，而有免疫抑制功能的 CD8+T細胞升高，引起免疫功能失調， CD4+/CD8+比值降低[9-10]。放療過程中，放射線在殺傷腫瘤細胞的同時，也殺傷免疫細胞，導致免疫功能進一步紊亂[11-12]。乳腺癌致使蛋白的糖基化和糖鏈結構發生異常改變，使腫瘤標志物水平升高，而放射治療殺傷癌細胞時，會抑制乳腺癌腫瘤細胞生長，造成腫瘤標志物分泌異常減少[13]。

CD4+T細胞是免疫應答的主要反應細胞，其協調B淋巴細胞分化產生抗體，CD4+T細胞含量變化可反映機體抗腫瘤免疫功能的變化；CD8+T則抑制抗體的合成、分泌及T細胞增殖。CD4+T和CD8+T動態穩定地維持機體的正常免疫應答。本研究CD4+T細胞百分含量超出正常參考范圍的患者，放療后CEA和CA15-3水平下降，與放療前比較，差異有統計學意義(P<0.01)；而CD4+T細胞百分含量在正常參考范圍的患者，放療后CEA、AFP、CA125、CA15-3水平下降，與放療前比較，差異有統計學意義(P<0.01或P<0.05)。提示晚期乳腺癌患者，CD4+T百分含量正常組放療前后CEA、AFP、CA125、CA15-3結果比較，差異均有統計學意義(P<0.05)，該組患者放療效果更好。

CD4+T百分含量在正常參考范圍時，CEA、AFP、CA125、CA15-3水平下降明顯，推測可能由于機體免疫功能較好時，放療時放射線抑制腫瘤細胞異常糖基化過程和抑制糖鏈結構異常改變的作用更明顯，由于糖鏈結構的復雜性，放射線抑制作用的這種分子機制還有待于進一步研究。CD4+/CD8+比值在正常生理狀態下維持一種動態平衡，患乳腺癌時細胞免疫功能異常，導致CD4+/CD8+比值超出正常范圍，該失衡狀態下進行放療會引起細胞免疫的抗腫瘤作用進一步被減弱，不利于放療。

綜上所述，乳腺癌患者放射治療時同時觀察T細胞亞群和血清腫瘤標志物(CEA、AFP、CA125、CA15-3)變化，尤其需密切監測CD4+T百分含量在放療前后的變化，給予患者提高免疫力的藥物治療。為達到更好的放射治療效果，應該在乳腺癌患者CD4+T百分含量穩定在正常參考范圍時再進行放射治療。

[1]中國女醫師協會臨床腫瘤學專業委員會.中國進展期乳腺癌共識指南(CABC 2015)[J].癌癥進展,2015,13(3):223-245.

[2]郭宏艷,呂苗,楊國嶸,等.乳腺增生及乳腺癌中Claudin-1、平滑肌肌動蛋白、雌激素受體和nm-23的表達[J].蘭州大學學報(醫學版),2010,36(1):5-8.

[3]Lee JS,Park S,Park JM,et al.Elevated levels of serum tumor markers CA 15-3 and CEA are prognostic factors for diagnosis of metastatic breast cancers[J].Breast Cancer Res Trea,2013,141(3):477-484.

[4]Li CH,Kuo WH,Chang WC,et al.Activation of regulatory T cells instigates functional down-regulation of cytotoxic T lymphocytes in human breast cancer[J].Immunol Res,2011,51(1):71-79.

[5]Wang ZK,Yang B,Liu H,et al.Regulatory T cells increase in breast cancer and in stage Ⅳ breast cancer[J].Cancer Immunol Immunother,2012,61(6):911-916.

[6]Tsuchiya K,Kinoshita R,Shimizu S,et al.Dosimetric comparison between intensity-modulated radiotherapy and standard wedged tangential technique for whole-breast radiotherapy in Asian women with relatively small breast volumes[J].Radiol Phys Technol,2014,7(1):67-72.

[7]Sekiguchi K,Ogawa Y,Sanuki N,et al.The Japanese Breast Cancer Society clinical practice guideline for radiotherapy of breast cancer[J].Breast Cancer,2015,22(1):49-58.

[8]朱江,張曉微,顏麗,等.乳腺癌患者放療前后外周血T細胞亞群變化的研究[J].國際檢驗醫學雜志,2014,35(11):1482-1483.

[9]曹林林,劉穎男,鄭德明,等.乳腺癌患者手術前后T淋巴細胞亞群變化的實驗研究[J].中國實驗診斷學,2013,17(1):113-114.

[10]梁新強,劉海洲,利基林,等.乳腺癌患者外周血T淋巴細胞和NK細胞水平分析[J].廣西醫學,2013,35(2):132-134.

[11]吳大鵬,賈宗嶺,蔣會娟,等.放射損傷對小鼠外周血T淋巴細胞亞群的影響[J].河南大學學報(醫學版),2011,30(2):108-109.

[12]杜麗,馬瓊,崔玉芳,等.γ射線對小鼠調節性T細胞功能及相關細胞因子的影響及其意義[J].中國科學(生命科學),2011,41(10):951-957.

[13]李煒,吳士良.基于糖鏈結構的乳腺癌研究[J].生命化學,2010,30(5):695-698.

The relationship of tumor marker and CD4+T cells before and after radiotherapy on patients

ZHUJiang1，HEJinxiang2，HEJinchun3△

(1.CentralLaboratory；2.RadiotherapyCenter；3.MedicalTestingCenter，theFirstHospitalofLanzhouUniversity，Lanzhou，Gansu730000,China)

Objective The study is aimed to research into the effect of CD4+T cells on patients with severe advanced breast cancer under radiotherapy that cannot be treated with surgery,by observing the variation of CEA,AFP,CA125 and CA15-3 before and after the radiotherapy applied.Methods We identified the CEA，AFP，CA125 and CA15-3 densities in blood serum for a group of 38 patients with advanced breast cancer and a group of 30 normal people with chemiluminescence immune assay,and we determined the CD3+，CD4+，CD8+T percentage in peripheral blood and the ratio of CD4+/CD8+with flow cytometry.Results The group with normal CD4+T percentage went through a decreased in CEA，AFP，CA125，CA15-3 densities after the radiotherapy,and the variation was significant(P<0.05).The group of people with abnormal CD4+T percentage go through CEA，CA15-3 densities decrease after the radiotherapy,and the variation was statistically significant(P<0.05).Conclusion For those with advanced breast cancer and cannot be treated with surgery,the influence of radiotherapy on CEA，AFP，CA125，CA15-3 densities is significant in the group of patients with CD4+T percentage,adn has better therapeutic effect.

breast cancer; CD4+T cell； CEA; AFP; CA125; CA15-3

朱江，男，主治醫師，主要從事腫瘤分子生物學研究。△

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.20.010

A

1673-4130(2016)20-2828-03

2016-04-16

2016-06-21)