非小細胞肺癌EGFR基因突變126例分析及評價

李怡霖　倪　兵　高　艷　張　銀

661099　云南省 紅河州第三人民醫院 腫瘤分子與細胞生物學實驗中心

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非小細胞肺癌EGFR基因突變126例分析及評價

李怡霖倪兵高艷張銀

661099云南省 紅河州第三人民醫院 腫瘤分子與細胞生物學實驗中心

目的設計對照實驗，應用統計學方法分析及評價非小細胞肺癌EGFR基因突變的發生率及基因突變類型。方法以我院2013年3月至2015年8月接受治療的126例確診非小細胞肺癌患者為研究對象，根據PCR擴增及基因測序原理分析及評價非小細胞肺癌EGFR基因突變的發生率及基因突變類型。結果：42例(33.33%)肺癌患者EGFR基因發生突變，其中26例(64.90%)患者外顯子19發生突變，13例(30.95%)患者外顯子21發生突變，僅3例(7.14%)患者外顯子20發生突變，其中外顯子19均為堿基缺失型突變，外顯子20及21均為堿基替換型突變。結論EGFR基因在非小細胞肺癌的預防、診斷、治療過程中具有十分重要的臨床價值。

非小細胞肺癌；EGFR基因；基因突變

云南省個舊市地區是全國重要的錫礦基地，其肺癌的發生率在全球處于較高水平。臨床數據表明，非小細胞肺癌的發病率占肺癌總數的80%以上，且晚期非小細胞肺癌目前臨床治療效率并不顯著，患者5年死亡率高達80%以上[1]。隨著醫療水平的逐步提高，靶向藥物、特異性藥物成為新藥研發領域的熱門藥物，臨床數據表明，針對EGFR的靶向藥物在治療非小細胞肺癌方面具有較好的臨床治療效率[2]。根據這一結果相關學者認為EGFR基因與非小細胞肺癌的發生、發展具有十分重要的關系，通過分析及評價非小細胞肺癌患者EGFR基因與正常人EGFR基因發生突變的差異可以為非小細胞肺癌的預防、診斷、治療等提供重要的臨床依據，以下是本次研究的全部內容。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以我院2015年10月至2016年10月接受治療的126例確診(診斷標準：WHO肺癌分類及診斷標準[3])非小細胞肺癌患者為研究對象。126例受試患者年齡介于27～76歲，平均年齡為58歲，年齡≥60歲患者66例，60歲以下患者60例；男性患者85例，女性患者41例；病理分期結果表明I期、II期、III期、IV期非小細胞肺癌患者分別為16例、25例、66例、19例，其中67例患者發生淋巴結或遠處轉移，應用10%福爾馬林固定手術過程中患者癌癥組織，或分離晚期患者血漿。

1.2 方法

1.2.1 基因提取 將10%福爾馬林固定的肺癌組織切片離心管內加入適量二甲苯進行脫蠟處理，用乙醇將脫脂后的標本清洗干凈后晾干。將晾干的標本置于干凈離心管內加入適量配制號的解離液及200 L磷酸鹽緩沖液和無水乙醇，震蕩后離心。將離心管內離心后吸附DNA轉移到干凈離心管，加入30～100 LBuffer DTE，靜置5min后8000r/min速度離心1min，將提取DNA保存備用。

1.2.2 基因檢測 應用EGFR基因突變29種檢測試劑盒對上述提取的DNA進行基因檢測，以上述提取的DNA作為模板，以PCR擴增儀對EGFR基因19～21外顯子進行基因擴增，具體操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3 統計指標 分別以年齡、性別作為分組因素，統計性別、年齡與非小細胞肺癌患者EGFR基因突變及突變基因類型的關系。

1.4 統計學方法：應用統計學軟件SPSS22.0對受試者EGFR基因突變概率進行統計學分析，以外顯子19～21號基因作為統計依據，計數資料以百分比(%)的形式表示，以t檢驗或檢驗表示組間差異，以P<0.05記為統計結果具有顯著統計學差異。

2 結果

2.1 年齡、性別因素與非小細胞肺癌患者EGFR基因突變的關系：統計結果表明，126例非小細胞肺癌患者共計42例發生EGFR基因突變，其中60歲以上患者31例，女性患者39例，即非小細胞肺癌與EGFR基因突變概率相關性顯著，其中年齡、性別因素是影響EGFR基因突變的主要因素，年齡的增大會增加非小細胞肺癌患者EGFR基因突變概率，女性患者EGFR基因突變概率顯著高于男性，該統計結果具有顯著統計學意義。見表1

表1 年齡、性別因素與非小細胞肺癌患者EGFR基因突變相關性(n/%)

2.2 EGFR基因突變類型與非小細胞肺癌相關性分析：實驗統計結果表明外顯子19～21號基因突變與非小細胞肺癌的診斷、治療具有顯著臨床相關性，其中19、21號外顯子突變類型相關性更加顯著，即外顯子19、21與非小細胞肺癌相關性十分顯著，在非小細胞肺癌預防、診斷、治療中具有顯著臨床價值。見表2

表2 EGFR基因突變類型與非小細胞肺癌相關性(n/%)

3 結論

EGFR基因是一種細胞膜表面的糖蛋白受體，與細胞表皮生長顯著相關，該基因具有酪氨酸激酶活性，主要以信號轉導的形式進入細胞核，影響細胞的增殖、分化、凋亡等生命過程，因此該基因與非小細胞肺癌患者原癌基因的激活具有密切相關性[4]。隨著環境的惡化，生活壓力的增大，肺癌的發病率初步提高，非小細胞肺癌發病率占全部肺癌發病率總數的80%以上，且該疾病死亡率極高，5年內存活率不足15%。相關文獻報道顯示，EGFR基因突變與非小細胞肺癌的發生、發展密切相關，探討EGFR基因與非小細胞肺癌的相關性有助于非小細胞肺癌的預防、診斷、治療[5]。本文以統計學方法，應用PCR擴增儀及EGFR基因突變29種檢測試劑盒對EGFR基因突變與非小細胞肺癌的相關性進行統計學探討。

實驗結果表明，EGFR基因突變概率占非小細胞肺癌發病總概率的1/3，其中年齡、性別因素與EGFR基因突變概率密切相關，年齡60歲以上非小細胞肺癌患者EGFR基因突變概率顯著增大，女性非小細胞肺癌患者EGFR基因突變概率顯著高于男性，且外顯子19和21是EGFR基因主要突變部位。綜上所述，EGFR基因突變與非小細胞肺癌具有顯著相關性，通過檢測外顯子19、21可以達到對非小細胞肺癌高效的預防、診斷，并顯著提高非小細胞肺癌治療效率，為該病臨床治療提高監控依據，具有很好的臨床價值。

[1] 林小梅,莫娟梅,鄒敏,等.EGFR突變的非小細胞肺癌患者EML4-ALK融合基因的檢測及其臨床特征分析[J].中國病理生理雜志,2012,28(6):1135-1139.

[2]陳順平,蘇海燕,吳文喬,等.非小細胞肺癌EGFR基因突變與擴增及蛋白表達的相關性分析[J].臨床與實驗病理學雜志,2015,31(6):657-665.

[3]趙瑾,田俏梅,黃玉梅,等.湖南地區238例非小細胞肺癌EGFR基因突變狀態分析[J].腫瘤藥學,2014,4(3):187-192.

[4]周曉秋,王東關,孫希印,等.非小細胞肺癌EGFR基因和蛋白檢測的比較分析[J].臨床與實驗病理學雜志,2012,28(10):1124-1126.

[5]羅煒,王慧.非小細胞肺癌患者外周血EGFR基因突變檢測的系統評價[J].現代預防醫學,2014,41(20):3751-3755.

10.3969/j.issn.2095-9559.2016.06.023

2095—9559(2016)06—2631—02

2016-02-29