乙型肝炎檢測的假陰性與假陽性結果原因研究

李國花，黃世杰，詹虎，白志敏，蘇銀鳳，陳鏡清，劉云高，曾建興

1.福建省晉江市醫院檢驗科，福建晉江362200；2.福建省晉江市疾病預防控制中心檢驗科，福建晉江362200

乙型肝炎檢測的假陰性與假陽性結果原因研究

李國花1，黃世杰1，詹虎2，白志敏1，蘇銀鳳1，陳鏡清1，劉云高1，曾建興1

1.福建省晉江市醫院檢驗科，福建晉江362200；2.福建省晉江市疾病預防控制中心檢驗科，福建晉江362200

目的研究造成乙型肝炎檢測假陰性與假陽性結果的原因，以此提高乙型肝炎檢測的準確率，避免假陰性與假陽性結果干擾，從而為乙型肝炎的臨床診斷提供準確的依據。方法采用酶聯免疫吸附法對該院2014年6月—2016年6月接受檢查的700例乙肝患者進行檢查，統計假陰性與假陽性情況，分析檢測結果的錯誤原因。結果700例乙肝患者中，假性結果占16.0%，其中假陽性結果占6.0%，假陰性結果占10.0%；造成假陰性與假陽性結果的影響因素：檢驗方法占19.6%、試劑占25.9%、實驗室操作占39.3%、其他占15.2%，實驗室操作的占比均高于試劑、檢驗方法及其他（P＜0.05）。結論乙型肝炎檢測的假陰性與假陽性結果主要與檢查方法、試劑、實驗室操作等因素有關，加強實驗室、臨床醫生及患者的密切配合，減少各因素對檢驗結果的影響，可有效提高乙型肝炎檢驗結果的準確性。

乙型肝炎；酶聯免疫吸附法；假陰性；假陽性

臨床檢測乙型肝炎病毒表面抗原主要采用酶聯免疫吸附試驗及膠體金免疫層析法［1］。酶聯免疫吸附試驗操作簡單、技術可靠，靈敏度及特異性較高。目前，檢測病毒表面抗原的方法如電化學發光法、時間分辨免疫熒光法、聚合酶鏈反應、化學發光法等得到不斷改善，但酶聯免疫吸附試驗依然是檢測病毒表面抗原的可靠技術［2］。在臨床檢測工作中，部分未患病患者檢驗結果呈陽性或患病患者檢驗結果呈陰性，一定程度上給乙型肝炎的檢驗帶來不必要的麻煩。因此，需要準確鑒別乙型肝炎檢測的陽性與陰性結果。該研究以該院2014年6月—2016年6月接受檢查的700例乙肝患者為對象，對其假陰性與假陽性結果進行了統計，并分析了造成假陰性與假陽性結果的原因，提出在檢查方法、試劑、實驗室操作方面進行改進，可有效提高乙型肝炎檢驗的準確性。現就有關情況做如下報告。

1　資料與方法

1.1臨床資料

選取該院2014年6月—2016年6月接受檢查的乙肝患者共700例，其中男性368例，女性332例；年齡24～80歲，平均年齡（52.52±12.84）歲；病程1～7年，平均病程（3.14±0.32）年。

1.2方法

采用酶聯免疫吸附法對700例乙肝患者進行檢查，乙型肝炎五項產品試劑盒，由英科新創科技有限公司生產，采用伯樂酶標儀進行檢測；采用英科新創科技有限公司提供的膠體金測試卡；對乙肝檢查患者的檢驗結果進行觀察，統計假陰性與假陽性情況，并對檢測結果的錯誤原因進行分析。

1.3判定標準

判定標準［3-4］：乙肝陽性結果0.1050≤A＜0.2100為疑似陽性，A≥0.2100為陽性，假陰性/（陰性+假陰性）為假陰性率，陽性/（陽性+假陽性）為假陽性率。

1.4統計方法

采用統計學軟件SPSS 17.0處理數據，計數資料用百分數（%）表示，行χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

700例乙肝患者中，檢驗結果錯誤為112例，占16.0%。其中假陽性42例，占6.0%；假陰性70例，占10.0%。造成假陰性與假陽性結果的原因與檢驗方法、試劑、實驗室操作等相關，其中實驗室操作的占比為39.3%，均高于試劑、檢驗方法、其他的25.9%、19.6%、15.2%（χ2= 4.5723、10.3966、16.4232，P＜0.05），具體見表1。

表1　造成假陰性與假陽性結果的影響因素［n（%）］

3　討論

近年來，乙型肝炎病毒感染呈全球性分布趨勢，已成為臨床常見的傳染性疾病，可以通過血液及血液制品進行傳播。有關調查顯示［5］：全球每年新發的乙型肝炎病毒感染病例約有5千萬，每年因乙型肝炎病毒感染而死亡的患者達100萬人。我國乙型肝炎病毒表面抗原陽性率占10%，提示我國乙型肝炎的發病率較高，并逐漸成為嚴重危害人們健康的傳染病之一［6］。乙型肝炎病毒感染后，影響患者病程和轉歸的因素較多，其疾病譜與病毒和人體免疫應答作用的結果密切相關。所以，分析乙型肝炎檢驗的假陽性與假陰性結果，對乙型肝炎檢測準確性的提高具有重要意義。

酶聯免疫吸附試驗是臨床檢驗乙型肝炎病毒感染的主要方法，其操作簡便，敏感性高。酶聯免疫吸附試驗所用的試劑主要有北京萬泰、美國雅培等，敏感度均為100%，特異性高達98.1%～99.8%，這些試劑可以批量進行操作，但假陽性結果依然存在［7］。該組檢驗結果錯誤率占16.0%，假陽性率占6.0%，假陰性率占10.0%；造成假陰性與假陽性結果的因素包括檢驗方法、試劑、實驗室操作等，其中實驗室操作的占比最高（P＜0.05）。研究表明［8-9］：影響酶聯免疫吸附試驗檢測的因素較多，血細胞、標本的狀態、洗板方式、加樣量、酶標儀的使用、檢測時間以及血清分離等都會對酶聯免疫吸附試驗檢測的準確性造成影響。與此同時，標本充分離心與否也會造成假陽性結果發生。究其原因可能是上清液離心不充分，當含有過氧化物酶細胞成分的血漿在反應孔中進行加樣時，因黏附于板條上而不易洗去，造成過氧化物產生酶樣作用，故出現假陽性結果［10］。另外，血清中的類風濕因子同抗體結合會導致檢測結果出現假陽性，血清中補體與免疫球蛋白G的Fc段結合也會產生假陽性結果，標本中免疫球蛋白聚合物吸附于塑料表面形成非特異性吸附，也是造成檢測結果為假陽性的一個原因。針對上述造成乙型肝炎檢驗假陰性與假陽性結果的原因，該研究認為可以采取如下措施進行改進，從而減少假陽性結果，進一步提高乙型肝炎檢驗的準確性。具體措施為：①抗凝血標本在使用過程中，如血標本無法檢驗，應重新抽血進行檢測；②試劑盒使用前平衡溫度至室溫；③抽血后置于溫水中，時間保持2 h，3000 r/min離心，完全沉淀紅細胞和纖維蛋白；④室溫放置標本10 h后進行檢測，確保血凝塊良好收縮，標本中非特異性活性物質失活，以此減少非特異性反應現象；正確使用洗板機和酶標儀并且保證使用中二者儀器的狀態是正常的。

由于酶聯免疫吸附試驗的操作簡單，準確性高，使用方便，臨床中得到廣泛運用。但酶聯免疫吸附試驗存在一定局限，主要是因為酶結合物及抗原濃度高、吸光度值大的情況下，乙肝患者或乙型肝炎病毒攜帶者會出現漏檢情況；酶結合物及抗原濃度低，吸光度值小的情況下，可產生假陰性結果。在乙型肝炎病毒感染的檢測中，一旦出現漏檢情況，除可能會延誤臨床診治最佳時機外，還會給血庫工作造成不必要的麻煩，如患者輸注漏檢的乙肝病毒核心抗體陽性、乙肝病毒e抗原陽性、乙型肝炎病毒陽性獻血者的血，可能會造成嚴重后果。所以，相關部門必須引起對血庫安全的高度重視，應摒棄以往單項表面抗原檢查，對獻血人員進行乙肝5項檢測，以確保萬無一失。針對乙型肝炎檢驗出現假陽性與假陰性結果這一問題，建議從如下幾個方面展開檢驗工作，以促使臨床檢驗結果的準確性進一步提高。具體為：①檢驗人員必須對相關試劑和儀器進行檢查，避免因操作不當導致檢驗假陽性與假陰性結果的發生；②實驗室檢查前，應對患者進行檢查，認真詢問病史及服藥情況；③督促患者遵守醫囑，檢查前做到停藥、空腹。檢驗人員、臨床醫師及患者三方密切配合、共同努力，才能減少假陰性與假陽性結果，從而可為乙型肝炎的可靠診斷提供有利條件。

綜上所述，乙型肝炎檢驗中產生假陽性與假陰性結果的原因較多，主要的影響因素包括檢查方法、試劑選擇、實驗操作等諸多方面。臨床檢驗工作中，必須根據乙型肝炎檢驗假陽性與假陰性結果的影響因素，對有關問題進行解決和處理，同時加強檢驗人員、臨床醫師及患者的配合，減少假陰性與假陽性結果，才能有效提高乙型肝炎檢驗的準確性。

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Research on Causes of False-negative and False-positive Results of Hepatitis B Test

LI Guo-hua1，HUANG Shi-jie1，ZHAN Hu2，BAI Zhi-min1，SU Yin-feng1，CHEN Jing-qing1，LIU Yun-gao1，ZENG Jian-xing1
1.Department of Clinical Laboratory，Jinjiang Hospital，Jinjiang，Fujian Province，362200 China；2.Department of Clinical Laboratory，Jinjiang Disease Control and Prevention Center，Jinjiang，Fujian Province，362200 China

Objective To research the causes of false-negative and false-positive results of hepatitis B test thus improving the accurate rate of hepatitis B test，avoid the interference of false-negative and false-positive results and providing the accurate basis for the clinical diagnosis of hepatitis B.Methods 700 cases of patients with hepatitis B in our hospital from June 2014 to June 2016 were examined by the enzyme linked immunosorbent assay，and the false-negative and false-positive conditions were counted and the mistake causes of test results were analyzed.Results In the 700 cases of patients with hepatitis B，the false results accounted for 16.0%，including 6.0%false-positive result and 10.0%false-negative result，and the influence factors of them were the test method（19.6%），reagent（25.9%），laboratory operation（39.3%）and others（15.2%），and the proportion of laboratory operation was higher than that of reagent，test method and others，P＜0.05.Conclusion The false-negative and false-positive results of hepatitis B test are mainly related to examination method，reagent and laboratory operation，and enhancing the close cooperation of laboratory，clinical doctors and patients and reducing the effect of various factors on test results can effectively improve the accuracy of test results of hepatitis B.

Hepatitis B；Enzyme linked immunosorbent assay；False-negative；False-positive

R47

A

1672-5654（2016）10（b）-0015-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.29.015

李國花（1986.6-），女，福建晉江人，本科，主管檢驗師，主要從事臨床檢驗工作。

（2016-07-15）