進(jìn)展期白癜風(fēng)患者外周血淋巴細(xì)胞亞群75例檢測(cè)分析

李 楊，周明偉，孫銘徽，趙 野，姜日花，賈玉璽

(吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 皮膚科，吉林 長(zhǎng)春130033)

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進(jìn)展期白癜風(fēng)患者外周血淋巴細(xì)胞亞群75例檢測(cè)分析

李 楊，周明偉，孫銘徽，趙 野，姜日花，賈玉璽*

(吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 皮膚科，吉林 長(zhǎng)春130033)

白癜風(fēng)(Vitiligo)是一種臨床常見(jiàn)的色素脫失性皮膚病，發(fā)病率為 0.4%-2%[1]，因其影響美觀，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。白癜風(fēng)的發(fā)病機(jī)制目前尚不十分清楚，可能與自身免疫、黑素細(xì)胞功能亢進(jìn)、精神創(chuàng)傷、過(guò)度勞累、遺傳等因素相關(guān)，為探討白癜風(fēng)患者的細(xì)胞免疫狀態(tài),本研究對(duì)75例進(jìn)展期白癜風(fēng)患者外周血淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行了檢測(cè)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇2014年6月-2015年6月在吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院皮膚科門診診斷為進(jìn)展期白癜風(fēng)患者75例，其中男38例，女37例，年齡1-63歲，平均40.44±11.9(歲)。其中尋常型39例，節(jié)段型36例。對(duì)照組：為同期健康獻(xiàn)血者62人，其中男37例，女25例，年齡21-66歲，平均41.4±12.34(歲)。患者組和健康對(duì)照組性別、年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。排除標(biāo)準(zhǔn)：患有自身免疫性疾病者；近 2 個(gè)月系統(tǒng)使用過(guò)治療白癜風(fēng)藥物者；血、尿、肝腎功能異常者；妊娠及哺乳期患者。

1.2 儀器與試劑 流式細(xì)胞儀：Cytomics FC500(Beckman Coulter，美國(guó))，CD45/CD4/CD8/CD3抗體、CD45/CD56/CD19/CD3抗體及同型對(duì)照抗體及FACS Lysing Solution溶血素均采自Beckman Coulter公司。

1.3 方法 抽取白癜風(fēng)患者及健康人外周靜脈血2 ml，編號(hào)、置入EDTA抗凝管。抽取抗凝血300 μl分別放入Trucoune tube中，每個(gè)試管內(nèi)100 μl。編號(hào)Trucoune tube，分別加入20 μl CD45/CD4/CD8/CD3抗體，CD45/CD56/CD19/CD3抗體，20 μl同型對(duì)照抗體。再加入500 μl溶血素。后加入3 ml PBS充分混勻后離心(1 500 rpm，5分鐘)，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 進(jìn)展期白癜風(fēng)患者外周血淋巴細(xì)胞比例 進(jìn)展期白癜風(fēng)患者與健康人對(duì)照組淋巴細(xì)胞，檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組CD3(66.64±9.64)、CD4(34.74±9.16)低于對(duì)照組(P=0.027，0.039)，CD8(30.88±8.25)高于對(duì)照組(P=0.040)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 尋常型與節(jié)段型白癜風(fēng)淋巴細(xì)胞比例 檢測(cè)尋常型CD3(71.24±8.26)、CD4(38.44±9.26)高于節(jié)段型(P=0.000,0.001)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。余結(jié)果未見(jiàn)明顯差異，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 患者組和對(duì)照組淋巴細(xì)胞亞群比較±s)

表2 尋常型與節(jié)段型白癜風(fēng)患者外周血淋巴細(xì)胞亞群比較

3 討論

研究表明，白癜風(fēng)患者常伴發(fā)自身免疫性疾病，如橋本氏甲狀腺炎、斑禿、糖尿病、惡性貧血等[2,3]，提示白癜風(fēng)與自身免疫狀態(tài)密切相關(guān)。Shin J等報(bào)道白癜風(fēng)患者皮損真表皮交界處有CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)及CD8+T細(xì)胞誘導(dǎo)的黑色素細(xì)胞凋亡[4-6]。成熟的T細(xì)胞一般只表達(dá)CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞。CD4+T細(xì)胞識(shí)別外源性抗原肽，分化的效應(yīng)細(xì)胞主要為Th細(xì)胞，但也有少數(shù)CD4+效應(yīng)T細(xì)胞具有細(xì)胞毒作用。CD8+T細(xì)胞識(shí)別內(nèi)源性抗原肽，分化的效應(yīng)細(xì)胞為細(xì)胞毒性T細(xì)胞，具有細(xì)胞毒作用，可特異性殺傷靶細(xì)胞。當(dāng)患者體內(nèi)T淋巴細(xì)胞受到某些抗原刺激被激活，具有識(shí)別抗原作用的CD4+T細(xì)胞分化減少，具有抑制作用的CD8+T細(xì)胞增加，導(dǎo)致免疫功能異常。體內(nèi)Th等細(xì)胞被激活，導(dǎo)致相關(guān)B細(xì)胞增殖，產(chǎn)生抗黑素細(xì)胞自身抗體，使黑素細(xì)胞遭到破壞，從而導(dǎo)致白癜風(fēng)的發(fā)生。

本研究對(duì)75例進(jìn)展期白癜風(fēng)患者外周血淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行了檢測(cè)分析，結(jié)果白癜風(fēng)患者外周血CD3、CD4+T細(xì)胞降低，CD8+T細(xì)胞增高，進(jìn)一步揭示了白癜風(fēng)的發(fā)病與外周血淋巴細(xì)胞亞群失衡有關(guān)。另尋常型CD3+、CD4+T細(xì)胞高于節(jié)段型，CD8+T細(xì)胞未見(jiàn)明顯差異，是否由樣本量較小所致，有待于今后進(jìn)一步研究。

綜上，進(jìn)展期白癜風(fēng)患者CD3+T細(xì)胞、CD4+T 細(xì)胞降低，CD8+T細(xì)胞增高，提示白癜風(fēng)的發(fā)病與細(xì)胞免疫密切相關(guān)，可為臨床用藥提供理論依據(jù)。

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吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(20150414033GH)

1007-4287(2016)10-1731-02

2015-11-19)

*通訊作者