CD133在小兒急性白血病中的表達及臨床意義

范小菊，劉志強，柯江維，謝淑佩，梁昌達，段榮

（江西省兒童醫院，1、血液科；2、檢驗科，江西南昌330006）

CD133在小兒急性白血病中的表達及臨床意義

范小菊1，劉志強2，柯江維2，謝淑佩1，梁昌達1，段榮2

（江西省兒童醫院，1、血液科；2、檢驗科，江西南昌330006）

目的探討CD133在急性白血病（AL）患兒中的表達及其意義。方法采用流式細胞術測定100例AL患兒白血病細胞膜上CD133的表達。結果⑴AL組患兒CD133的表達率為38.0%，表達水平顯著高于對照組。⑵急性髓細胞白血病（AML）和急性淋巴細胞白血病（ALL）的CD133的表達率分別為40.0%和37.5%，差異無統計學意義，T-ALL和B-ALL的CD133陽性表達率分別為33.3%和38.0%，差異無統計學意義，AML各亞型間CD133陽性表達水平差異無統計學意義。⑶CD133表達陽性組的完全緩解（CR）率低于CD133表達陰性組，差異有統計學意義。⑷對18例初治時CD133高表達經化療后CR的AL患兒進行隨訪，2例CD133陽性AML經后續化療后有1例轉陰，1例持續表達，但2例分別在化療15個月、12個月復發，且轉陰患兒骨髓復發時CD133再次表達；16例CD133陽性ALL經后續化療后均轉陰，此后有5例分別在21個月、19個月、18個月、16個月、13個月骨髓復發，且復發時CD133再次表達。結論AL患兒骨髓細胞CD133表達高于正常對照；檢測CD133表達可能有助于AL各亞型的鑒別及療效判斷；CD133高表達可能是AL的一個不良預后因素，以CD133為監測微小殘留病灶（MRD）的標記物對防治復發有一定的意義。

CD133；急性白血病；預后

CD133是人類造血干或祖細胞膜（HSPC）上新發現的一種抗原。1997年，Yin AH等［1］首次報道了此抗原并成功制備識別該抗原的單克隆IgG抗體，2000年6月第七屆人類白細胞分化抗原工作組大會正式將此抗原命名為CD133［2］。CD133抗原是一分子量為120KD的5跨膜糖蛋白，因而它不同于已知的兩個細胞表面多跨膜（TM）受體主要家族4-TM和7-TM。CD133不僅分子量不同于其它多個TM蛋白，而且胞外環比4-TM、7-TM大1倍，兩者序列尤其TM域不具同源性，表明CD133是一新TM受體超家族成員［3］。

CD133不但在正常HSPC膜上表達，也在白血病細胞膜上表達。文獻報道CD133表達與部分造血系統腫瘤尤其是成人AL密切相關，且與白血病FAB分型有關，但其意義尚不清楚［1-3］。我們通過對100例AL患兒骨髓白血病細胞CD133抗原表達水平的檢測，以探討它與兒童AL臨床特征的相關性及其在預后判斷中的意義。

1 材料與方法

1.1 研究對象100例AL患者均為2012年～2014年在江西省兒童醫院血液科住院患兒，男65例，女35例，年齡6個月～14歲，中位年齡3.2歲。其中AML初治組20例（M1 1例、M2 7例、M3 3例、M4 5例、M5 4例）；ALL初治組80例（T-All 9例、B-ALL 71例）。緩解時間均在半年以內，診斷、療效判定的判斷標準符合《血液病診斷及療效標準》［4］；對照組15例為同期住院，診斷免疫性血小板減少癥患兒，其中男9例，女6例，年齡1～14歲，中位年齡2.7歲。骨髓抽取前均征得患兒家屬同意。

100例初治AL患者采用常用一線化療方案，其中M3采用維甲酸20～30mg/m2，分2次/d誘導分化治療。所有患兒均能堅持2個以上療程常規化學治療，達完全緩解或部分緩解者為有效，不緩解者為無效［4］。

1.2 實驗試劑實驗中所使用的CD133、CD45、CD34及系列相關單克隆抗體及同型Ig對照均購自美國BD公司。

1.3 標本制備抽取急性白血病患者化療前及化療中骨髓液3ml，肝素抗凝，同樣抽取對照組患兒骨髓液3m1，肝素抗凝，用淋巴細胞分離液Ficoll-Hypaque分離出骨髓單個核細胞（BMMNC），用磷酸鹽緩沖液（PBS）調整濃度為5×106/ml。

1.4 免疫熒光法測定CD133抗原的表達應用免疫熒光法標記骨髓單個核細胞（BMMNC），用流式細胞儀測定骨髓單個核細胞膜上CD133的表達率。根據國際急性白血病的免疫分型標準，將AL患者骨髓單個核細胞膜CD133陽性率≥20%定義為陽性表達，而骨髓單核細胞膜CDl33陽性率＜20%定義為CD133陰性表達［3］。

1.5 形態學檢查及細胞化學染色骨髓涂片采用常規瑞氏染色，顯微鏡下計數200個有核細胞，原始及幼稚細胞≥20%定為白血病，并加做過氧化物酶、糖原及非特異性酯酶染色。

1.6 統計學方法率的比較采用χ2檢驗及Fisher精確概率檢驗。

2 結果

2.1 CDl33表達水平100例AL患兒有38例表達CDl33，陽性表達率為38.0%，15例對照組無一表達CDl33，陽性表達率為0，經Fisher精確概率法檢驗，AL患兒CDl33陽性表達率顯著高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.01），見表1。

表1 病例組與對照組CD133表達水平

2.2 CDl33表達與AL臨床特征的相關性分析見表2。

表2 AL患兒CD133的表達與FAB分型的關系

2.2.1 CDl33與AL FAB分型的相關性100例AL患者CDl33的表達率為38.0%，AML和ALL兩組CD133的表達率分別為40.0%和37.5%，經Fisher精確概率法檢驗，P值為1.000，差異無統計學意義（P＞0.05）。

2.2.2 CDl33與AML各亞型間的相關性在不同亞型的AML中CDl33陽性檢出率分別為0、42.9%、0、60.0%、50.0%，經Fisher精確概率法檢驗，P值為0.121，差異無統計學意義（P＞0.05）。

2.2.3 CDl33與ALL亞型間的相關性B-ALL和T-ALL及其亞型間CDl33的陽性率分別為38.0%和33.3%，經Fisher精確概率法檢驗，P值為1.000，差異無統計學意義（P＞0.05）。

2.3 CDl33與臨床療效的關系

2.3.1 AML患兒CD133的表達與臨床療效的關系20例AML患兒經誘導化療后，8例CD133陽性患兒有2例獲得CR，CR率25.0%；12例CD133陰性患兒有10例獲得CR，CR率83.3%。經Fisher精確概率法檢驗，兩組間比較差異有統計學意義（P＜0.05），見表3。

2.3.2 ALL患兒CD133的表達與臨床療效的關系80例ALL患兒經誘導化療后，30例CD133陽性患兒有16例獲得CR，CR率53.3%；50例CD133陰性患兒有47例獲得CR，CR率94.0%。經卡方檢驗，兩組間比較差異有統計學意義（P＜0.01），見表4。

表3 AML患兒CD133的表達與臨床療效的關系

表4 ALL患兒CD133的表達與臨床療效的關系

2.4 隨訪對18例初治時CD133陽性表達經化療后CR的AL患兒進行隨訪，2例CD133陽性AML經后續化療后有1例轉陰，1例持續表達，但2例分別在化療15個月、12個月復發，且轉陰患兒骨髓復發時CD133再次表達；16例CD133陽性ALL經后續化療后均轉陰，此后有5例分別在21個月、19個月、18個月、16個月、13個月骨髓復發，且復發時CD133再次表達。

3 討論

目前常用的MRD檢測方法有RQ-PCR［5，6］和流式細胞術，在臨床上流式細胞術更為實用。兒童AML由于缺乏統一的監測標志物，MRD的監測存在很大困難，這是兒童AML復發率高的原因之一。因此有必要尋找一些廣譜的白血病標志物用于兒童白血病MRD的檢測。

CD133是重要的HSPC的表面標志，近年來，發現其在惡性血液病中高度表達而受到重視，且研究者不斷發現血液腫瘤的發生、發展與CD133關系密切，但目前在AL中CD133的表達水平、作用機制以及對疾病的進展、治療反應的影響等生物學意義，研究尚無定論。本研究示AML和ALL陽性率分別為40.0%和37.5%，兩組陽性率比較無差異（P＞0.05），但明顯高于對照組（P＜0.01），說明在AL患兒骨髓細胞中CD133明顯增高，但表達無明顯細胞系別的差異，與文獻報道一致［7，8］。

本研究還發現在不同亞型的AML中，以M2、M4、M5亞型的CD133陽性檢出率較高，而在M1、M3亞型中則未檢出，但經比較無顯著性差異，與部分文獻報道的CD133水平與AML亞型存在一定的相關性［3，9-11，16］不一致，但與部分文獻［8，12］報道的CD133表達與FAB亞型無明顯的特定關系一致，結合本實驗，究其原因，可能與本研究標本量少有關，以后還會加大樣本量來研究。

在初治AL患兒CD133表達水平與療效中，CDl33陽性表達組的完全緩解率低于陰性表達組（P＜0.05），提示初發時CDl33陽性表達者對常規化療反應差、CR率低，可考慮開始就給予較強方案或骨髓移植治療；而初發時CDl33陰性表達者化療反應好、易緩解，給予常規方案就可，以減輕化療帶來的不良并發癥。因此推測CD133的表達對AL的治療、療效及預后判斷有一定的指導作用，與文獻報道一致［13-15，17］。

本研究還對18例初治時CDl33陽性表達經化療后CR的AL患兒進行了隨訪，2例CD133陽性AML經后續化療后有1例轉陰，1例持續高水平表達，但2例分別在15個月、12個月骨髓復發，且轉陰患兒骨髓復發時CD133再次表達；16例CD133陽性ALL經后續化療后均轉陰，此后有5例分別在21個月、19個月、18個月、16個月、13個月骨髓復發，且復發時CD133再次表達。提示CD133能反映白血病細胞的負荷及疾病的進展，但由于我們的病例數少，觀察時間較短，因此若要獲得更詳實確切的結論，還須擴大樣本數量、加強隨訪監測和進一步觀察分析。

作為一種新的膜糖蛋白，CD133的發現為研究造血干細胞的生理特征及選擇更為原始的造血干細胞提供了一個新的熱點。盡管目前CD133在急性白血病治療中的價值尚無定論，相信隨著研究的不斷深入，它在白血病的預后、基因治療、免疫治療及HSPC移植方面會顯示出更重要的價值。

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The expression of CDl33 in children with acute leukemia and its clinical significance

FAN Xiaoju1，LIU Zhiqiang2，KE Jiang-wei2，et al.
1.Department of Heamatology；2.Clinical Laboratory，Jiangxi Children's Hospital，Nanchang 330006，China.

Objective To evaluate the expression of CDl33 and its clinical significance in acute Leukemia（AL）patients. Methods The expression of CDl33 in Leukemic blasts from 100AL patients were detected by flow-cytometry.Results⑴The positive rates of CDl33 in AL group were 38.0%，which was significantly higher than that in control group.⑵The positive rates of CDl33 in AML and ALL patients were 40.0%and 37.5%，respectively，and there was no significant difference；The positive rates of CDl33 in T-ALL and B-ALL patients were no significant difference（33.3%，38.0%，respectively）.The expression of CD133 in AML subtypes was no significant difference.⑶The expression of CD133 positive group of complete remission（CR）rate is lower than the expression of CD133 negative groups，the difference was statistically significant.⑷18 AL cases who were high expression of CD133 and were CR after chemotherapy were followed up，2 AML cases relapse and express high level of CD133 after chemotherapy，including CD133 negative and CD133 persistent expression case，the relapse time were 15 and 12 months after chemotherapy，respectively.16 ALL cases were negative of CD133 after chemotherapy，5 relapse cases express high level of CD133 again，the relapses time were 21，19，18，16 and 13 months after chemotherapy，respectively.Conclusions AL had significantly higher CDl33 expression compared to normal control.The detection of CDl33 expression might help to identify AL type and predict therapeutic outcomes；The high expression of CDl33 may be an adverse prognostic factor in AL，CD133 may be a useful marker for MRD in AL.

CD133；Acute leukemia；Prognosis

R733.71

A

1674-1129（2016）05-0550-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2016.05.004

2016-05-09；

2016-08-24）

江西省衛計委立項課題（20123144）

范小菊，女，1979年2月生，碩士，副主任醫師，主要從事兒童急性白血病的治療與研究