兩種磷蝦油在家兔體內的藥動學及生物利用度研究

孫艷賓，劉　云，姜國良，王　超

（山東藥品食品職業學院，山東 威海 264210）

兩種磷蝦油在家兔體內的藥動學及生物利用度研究

孫艷賓，劉云，姜國良，王超

（山東藥品食品職業學院，山東 威海 264210）

為了研究兩種磷蝦油在家兔體內的藥動學及生物利用度評價，將18只家兔隨機分成3組，分別單劑量灌服南極磷蝦油（受試制劑T1），太平洋磷蝦油（受試制劑T2），魚油（參比制劑R）。用GC-MS檢測血漿中EPA，DHA的濃度，采用3p97程序計算藥動學參數。結果對EPA而言，參比制劑R與受試制劑T1，T2的峰濃度（Cmax）分別為（190.03± 4.21 μg/mL），（192.79±3.64 μg/mL），（218.35±5.47 μg/mL）；達峰時間（Tmax）分別為（8.02±0.65）、（12.04±0.31）、（12.10± 0.24）h；藥時曲線下面積（AUC）分別為（23.32±6.72），（20.43±4.58），（19.23±6.24 mg）h/mL。對DHA而言，參比制劑R與受試制劑T1，T2的峰濃度（Cmax）分別為（243.50±3.47 μg/mL）、（219.52±2.04 μg/mL）、（233.27±2.87 μg/mL）；達峰時間（Tmax）分別為（7.04±0.52）、（10.06±0.60）、（7.10±0.29）h；藥時曲線下面積（AUC）分別為（16.08±4.98）、（23.49±4.84）、（9.70±0.67 mg）h/mL。以魚油做為對照物，南極磷蝦油中EPA和DHA的相對生物利用度（F）分別為（83.27±10.21）%、（134.56±20.51）%。太平洋磷蝦油中EPA和DHA的相對生物利用度（F）分別為（84.73±12.03）%，（49.26±8.79）%。結論表明與魚油相比，南極磷蝦油顯著提高了DHA的相對生物利用度。

磷蝦油；GC-MS；藥動學；相對生物利用度

EPA（二十碳五烯酸），DHA（二十二碳六烯酸）是ω-3類脂肪酸中兩種主要高度不飽和脂肪酸，不僅是高等動物細胞細胞膜磷脂雙分子層的重要組成成分，同時對防治心腦血管疾病的功效已被國內外醫學界所公認，對多種自體免疫性疾病的療效也已被證實［1］。但是這兩種脂肪酸人體無法自身合成，必須從食物中攝取。目前國內外市場上EPA和DHA保健產品的原料主要來自深海魚類的魚油［2］，磷蝦油中EPA，DHA含量極高，與在魚油中以甘油三酯或脂肪酸乙酯形式存在有所不同，EPA，DHA在磷蝦油中主要以磷脂的形式存在，動物實驗表明，磷脂形式與甘油三酯形式相比，前者大腦生物利用率更高［3-4］。現在有關文獻對EPA，DHA體內藥代動力學的研究比較少［5-6］。本試驗以家兔為研究對象，考察了魚油，南極磷蝦油，太平洋磷蝦油用藥后其在家兔體內的血藥濃度及藥代動力學參數的變化，為進一步臨床研究提供參考。

1　儀器與材料

1.1儀器氣質聯用儀:包括Agilent 7890A氣相色譜儀、7683B自動進樣器和5975C質譜檢測器（安捷倫公司）；氮吹儀（N.EVAP 112）。振蕩器、渦旋混合器（德國IKA公司）；電子天平（德國梅特勒公司）；0.45 μm濾膜。

1.2試藥藥物：維妥立牌魚油軟膠囊（每粒1.0 g，含EPA 0.18 g，DHA 0.12 g，廣東仙樂制藥有限公司）；南極磷蝦油軟膠囊（每粒1.0 g，含EPA 0.15 g，DHA 0.11 g，山東科芮爾生物制品有限公司）；太平洋磷蝦油（每1.0 g，含EPA 0.17 g，DHA 0.15 g）；正己烷（色譜純）美國Merck公司；甲醇（色譜純）美國Merck公司；KOH（分析純）國藥集團化學試劑有限公司；EPA，DHA甲酯混合物標樣（MIDI公司提供）；用正己烷配置成濃度為1.0 mg/mL標準儲備液，置冰箱冷凍保存。

1.3動物新西蘭大白兔，雄性，體重2.5～3.0 kg，動物和飼料由青島市藥品檢驗所動物中心提供，許可證號SCXK（魯）20140001，動物房溫度（22±2）℃，濕度60%±15%。

2　方法

2.1GC/MS條件［7-8］HP毛細管柱（100 m×0.25 mm× 0.25 μm）；程序升溫：柱初溫120℃保持1 min，以8℃/min的速度升至160℃，保持2 min，以5℃/min的速度升至200℃，保持5 min，以2℃/min的速度升至220℃，保持35 min。進樣口溫度240℃；載氣為高純氦氣，流速0.5 mL/min，進樣方式為不分流，進樣量1 μL。GC/MS接口溫度240℃；離子源溫度250℃；電離方式EI源，電離能量70 eV；電子倍增電壓1 400 V；溶劑延遲16 min；掃描質量范圍30 amu～400 amu。

2.2給藥與血樣采集家兔18只，適應環境一周后隨即分為3組。給藥前均禁食12 h，灌胃魚油、南極磷蝦油、太平洋磷蝦油，按照正常人服用EPA，DHA的劑量以及實驗藥理學中家兔與人用藥量系數換算，保證最終EPA的量98.53 mg/ kg，DHA的量89.68 mg/kg的劑量灌胃，于給藥后0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、10、12、24 h耳緣靜脈取血3.0 mL，4 200 r/min離心10 min，分離血漿于-20℃冰箱中待測。

2.3血漿中EPA，DHA的測定

2.3.1樣品處理方法取血漿樣品2 mL，加0.4 mol/L的KOH-CH3OH 2 mL，加入1 mL正己烷，渦旋混合30 s，收集正己烷層部分并用氮氣吹干，殘余相中加入一點無水硫酸鈉去除水分，加5% H2SO4-CH3OH 2 mL，70℃水浴30 min，加1 mL正己烷，渦旋混合30 s，與前面用氮氣吹干后的殘余相混合再用氮氣吹干，用1 mL正己烷復溶，微孔濾膜過濾，進樣。

2.3.2標準曲線與線性范圍配制EPA，DHA對照品系列溶液，精密量取EPA，DHA標準液適量于離心管中，揮干溶劑，加入1 mL家兔空白血漿，渦旋混勻，配置成每毫升血漿中含250、125、62.5、41.67、31.25、25、20.83 μg EPA的儲備液，配成每毫升血漿中含375、187.5、93.75、62.5、46.87、37.5、31.25 μg DHA的儲備液，按2.3項下操作。以EPA，的峰面積對應其濃度進行線性回歸，求得直線回歸方程為Y=0.0213X-0.00111，r=0.998。結果表明，EPA，DHA在20.83～250μg/ml的線性關系良好，以DHA的峰面積對應其濃度進行線性回歸，求得直線回歸方程為Y=0.0333X-0.0216，r=0.999。DHA在31.25～375 μg/mL線性關系良好。

2.3.3回收率和精密度EPA制備低、中、高20.83，41.67，250 μg/mL三個濃度的血漿樣本。按2.3項下操作。計算回收率和日內、日間精密度。其回收率分別為96.03%，97.21%，98.05%，表明該方法回收率符合要求；其日內和日間精密度的相對標準偏差RSD分別為1.8%、1.0%，表明該方法精密度符合要求。DHA制備低、中、高31.25，62.5，375 μg/mL三個濃度的血漿樣本。按2.3項下操作。計算回收率和日內、日間精密度。其回收率分別為98.21%，97.35%，99.12%，表明該方法回收率符合要求；其日內和日間精密度的RSD分別為2.5%，1.9%，表明該方法精密度符合要求。

3　結果

血藥濃度曲線和藥物動力學參數18只家兔一次性服用受試制劑和參比制劑后不同時間的血藥濃度曲線見圖1，2，將藥-時數據輸入藥動學計算軟件3P87，采用非房室模型對數據進行處理［9］，確定藥動學參數。其中Cmax和Tmax為實測值，藥動學參數結果見表1，2。

圖1　新西蘭大白兔灌胃2種磷蝦油與魚油后的血藥（EPA）濃度曲線

圖2　新西蘭大白兔灌胃2種磷蝦油與魚油后的血藥（DHA）濃度曲線

4　討論與結論

4.1國內外關于EPA，DHA在體內吸收情況的實驗，大部分都是長期服用建立模型后，檢測血液中EPA，DHA的含量，以及對患者身體健康狀況的改善［10-14］。EPA可以明顯降低高甘油三酯患者血漿中甘油三酯的含量［10］，甘油三酯與脂肪酸乙酯兩種形式的DHA對高膽固醇的大鼠的代謝效應也存在明顯差異［1］，Kevin C.Makiai等發現，長期供給南極磷蝦油可以明顯比供給魚油提高肥胖者血漿中EPA和DHA的含量，但是對二者的提高程度存在顯著差異［3］。

表1　新西蘭大白兔灌胃2種磷蝦油與魚油后的血藥（EPA）主要藥動學參數結構

表2　新西蘭大白兔灌胃2種磷蝦油與魚油后的血藥（DHA）主要藥動學參數結構

4.2本文檢測的是短期效應，從藥代動力學方面檢測服用制劑24 h內的血藥濃度變化，藥動學結果表明，對EPA的吸收而言，南極磷蝦油與太平洋磷蝦油藥代參數AUC與魚油之間無顯著性差異，即生物利用度無顯著差異，表明磷脂形式的EPA與普通的甘油三酯形式的EPA在短期內對體內的EPA含量影響并無差異。對DHA的吸收而言，南極磷蝦油與太平洋磷蝦油藥代參數AUC與魚油之間存在顯著性差異，顯示南極磷蝦油吸收顯著高于魚油，太平洋磷蝦油吸收顯著低于魚油，推測原因可能是南極磷蝦極地適冷性甲殼類與普通海域的太平洋磷蝦體內其他活性物質的差異對DHA吸收的影響。但磷脂形式的DHA與普通的甘油三酯形式的DHA相比較，短期內對體內的DHA含量究竟是提高還是降低，無法做出判斷，還有待進一步研究和探索，這也有利于為進一步的人體藥動學實驗和保健品臨床用藥的長期與短期效應提供參考。

［1］Tabernero M，Bermejo L M，Elvira M，et al.Metabolic effect of docosahexaenoic acid supplementation in different doses and formulations（ethyl-and glyceryl-）in hypercholesterolemic rats［J］. Journal of Functional Foods，2013，5（2）：755-762.

［2］徐世民，王芬，李明明.深海魚油中EPA，DHA的氣相色譜分析研究［J］.糧油加工與食品機械，2006（10）：54-57.

［3］Maki K C，Reeves M S，Farmer M，et al.Krill oil supplementation increases plasma concentrations of eicosapentaenoic and docosahexaenoic acids in overweight and obese men and women［J］. Nutrition research，2009，29（9）：609-615.

［4］Schuchardt J P，Hahn A.Bioavailability of long-chain omega-3 fatty acids［J］.Prostaglandins，Leukotrienes and Essential Fatty Acids（PLEFA），2013，89（1）：1-8.

［5］譚丹.艾灸內關穴對家兔急性心肌缺血血清中游離脂肪酸（FFA）含量影響的實驗研究［J］.遼寧中醫雜志，1991，6：037.

［6］沈曉京，胡鑫堯.亞麻籽油對家兔血漿脂肪酸影響的研究［J］.第三軍醫大學學報，2001，23（A07）：5-6.

［7］張雪琰，牟志春，高建國，等.4種海水魚肉中脂肪酸組成分析及營養評價［J］.食品研究與開發，2013，34（23）：111-113.

［8］賈俊濤，趙麗青，張雪琰，等.氣相色譜-質譜法測定福氏志賀氏菌的全細胞脂肪酸［J］.山東出入境檢驗檢疫局專刊，2012，31（12）：140-142.

［9］梁文權，李高，劉建平.生物藥劑學與藥物動力學［M］.3版.北京：人民衛生出版社，2007：1.

［10］Braeckman R A，Manku M S，Bays H E，et al.Icosapent ethyl，a pure EPA omega-3 fatty acid：Effects on plasma and red blood cell fatty acids in patients with very high triglyceride levels（results from the MARINE study）［J］.Prostaglandins Leukotrienes and Essential Fatty Acids（PLEFA），2013，89（4）：195-201.

［11］Nichols D J，Muirhead G J，Harness J A.Pharmacokinetics of sildenafil after single oral doses in healthy male subjects：absolute bioavailability，food effects and dose proportionality［J］.British journal of clinical pharmacology，2002，53（s1）：5S-12S.

［12］Eritsland J.Safety considerations of polyunsaturated fatty acids［J］. The American journal of clinical nutrition，2000，71（1）：197S-201S.

［13］Cheruku S R，Montgomery-Downs H E，Farkas S L，et al.Higher maternal plasma docosahexaenoic acid during pregnancy is associated with more mature neonatal sleep-state patterning［J］.The American journal of clinical nutrition，2002，76（3）：608-613.

［14］Schuchardt J P，Hahn A.Bioavailability of long-chain omega-3 fatty acids［J］.Prostaglandins，Leukotrienes and Essential Fatty Acids（PLEFA），2013，89（1）：1-8.

S968.22

B

0529-6005（2016）04-0114-03

2014-10-09

孫艷賓（1990-），女，助教，碩士，從事生物化學與海洋生物活性物質研究，E-mail：sunyanbin1990@126.com