東北華北地區(qū)部分豬場(chǎng)弓形蟲(chóng)血清抗體檢測(cè)與分析

鹿雙雙，李奇潤(rùn)，榮　蓉，盧選成

［1.中國(guó)疾病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，北京 昌平 102206；2.拜耳（四川）動(dòng)物保健有限公司，四川 成都 610225］

東北華北地區(qū)部分豬場(chǎng)弓形蟲(chóng)血清抗體檢測(cè)與分析

鹿雙雙1，李奇潤(rùn)2，榮蓉1，盧選成1

［1.中國(guó)疾病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，北京 昌平 102206；2.拜耳（四川）動(dòng)物保健有限公司，四川 成都 610225］

為查明東北、華北地區(qū)豬場(chǎng)的弓形蟲(chóng)流行病情況，針對(duì)該地區(qū)22個(gè)豬場(chǎng)的657份樣本采用間接ELISA的方法進(jìn)行豬弓形蟲(chóng)抗體檢測(cè)。結(jié)果表明，豬場(chǎng)弓形蟲(chóng)陽(yáng)性率100%，豬群陽(yáng)性率在30%到100%之間，其中2胎以上母豬陽(yáng)性率明顯高于后備母豬及1胎母豬，保育豬陽(yáng)性率普遍較低或?yàn)榱恪＿x擇其中224個(gè)陽(yáng)性豬血清利用尿素變性技術(shù)進(jìn)行親和力指數(shù)測(cè)定，測(cè)定結(jié)果說(shuō)明僅有約9%的豬群為第一次弓形蟲(chóng)感染，大多數(shù)豬群都是多次反復(fù)感染。

弓形蟲(chóng)；豬；親和力指數(shù)

弓形蟲(chóng)?。═oxoplasmosis）是由剛地弓形蟲(chóng)引起的一種人畜共患寄生蟲(chóng)病。弓形蟲(chóng)最早是由法國(guó)的Nicolle和Manceaux在梳趾鼠的肝臟單核細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)［1-3］。在我國(guó)已發(fā)現(xiàn)豬、羊、牛、雞等均有弓形蟲(chóng)感染或發(fā)病，其中以豬弓形蟲(chóng)感染最嚴(yán)重。家貓、山獅、野貓、豹、猞猁等都可產(chǎn)生卵囊，嚙齒類(lèi)動(dòng)物感染弓形蟲(chóng)后，多數(shù)呈急性經(jīng)過(guò)或?qū)е滤劳觯?-8］。在我國(guó)豬弓形蟲(chóng)病多發(fā)生在夏秋季節(jié)，母豬易感，經(jīng)產(chǎn)母豬和育肥豬尤為易感。豬群感染弓形蟲(chóng)后主要表現(xiàn)為：母豬流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎、返情。乳豬發(fā)病急促，體溫升高等。對(duì)東北、華北部分豬場(chǎng)進(jìn)行弓形蟲(chóng)病流行病學(xué)調(diào)查，便于及時(shí)掌握該地區(qū)豬弓形蟲(chóng)病的流行情況，為綜合防控提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1血樣采集2015年4-6月，從東北和華北地區(qū)選擇規(guī)?；i場(chǎng)22個(gè)，其中黑龍江豬場(chǎng)5個(gè)，遼寧4個(gè)，河北10個(gè)，山西3個(gè)。采用前腔靜脈采血的方法，每頭豬采血3～5 mL，共收集657個(gè)血液樣本。5 000 r/min離心5 min，收集血清，進(jìn)行檢測(cè)。

1.2弓形蟲(chóng)的血清抗體陽(yáng)性率檢測(cè)ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自深圳市綠詩(shī)源生物技術(shù)有限公司。利用間接酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（間接ELISA）來(lái)檢測(cè)豬血清中的弓形蟲(chóng)抗體。豬弓形蟲(chóng)蛋白被包被在96孔板上。樣品被加在孔中，弓形蟲(chóng)抗體與包被的弓形蟲(chóng)蛋白結(jié)合，未結(jié)合的物質(zhì)可被洗掉，再加上酶標(biāo)二抗，洗去未結(jié)合的二抗，加上底物反應(yīng)，包含豬弓形蟲(chóng)抗體的樣品會(huì)顯色。

尿素變性技術(shù)，可檢測(cè)Tg-IgG抗體親和力。宿主在初次接觸抗原產(chǎn)生的特異性IgG的親和力隨著免疫時(shí)間的推移會(huì)逐漸升高，在包被好TOX抗原的酶標(biāo)板中加入陽(yáng)性豬血清，用尿素處理除去過(guò)去產(chǎn)生的低親和力抗原抗體復(fù)合物，而近期產(chǎn)生的高親和力抗體不受影響。IgG抗體親和力指數(shù)（Avidity index，AI）測(cè)定目前被認(rèn)為是區(qū)分原發(fā)和復(fù)發(fā)感染的較好方法。

2　結(jié)果分析

2.1不同地區(qū)豬場(chǎng)弓形蟲(chóng)血清抗體陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果分析從表1可以看出，在4-5月份檢測(cè)東北和華北地區(qū)豬弓形蟲(chóng)陽(yáng)性率，東北地區(qū)明顯低于京津冀和山西地區(qū)，這可能與東北地區(qū)氣候較冷有關(guān)。

表1　不同地區(qū)豬弓形蟲(chóng)流行病學(xué)調(diào)查

2.2不同階段豬群弓形蟲(chóng)血清抗體陽(yáng)性率結(jié)果分析從表2可以看出，隨著豬群年齡的增長(zhǎng)，弓形蟲(chóng)感染率明顯升高。在母豬的后備母豬感染率最低，經(jīng)產(chǎn)母豬隨著胎次升高感染率逐漸增大。產(chǎn)房仔豬感染率較低，幾乎為0，保育豬感染率也較低，不足7%。

2.3親和力指數(shù)結(jié)果分析見(jiàn)表3。

從表3可以看出，弓形蟲(chóng)IgG親和力指數(shù)大多在50%以上，低于30%的僅有9%，說(shuō)明大多數(shù)豬群都是反復(fù)感染，首次弓形蟲(chóng)感染的豬群比例很小，因此，要定期做好豬場(chǎng)弓形蟲(chóng)的凈化工作。

表2　不同階段豬群弓形蟲(chóng)感染率

表3　親和力指數(shù)結(jié)果分析

從表4可以看出，各個(gè)階段的豬群AI大于50%的比例明顯較高，并且隨著豬群年齡的增大，Tg-IgG親和力指數(shù)高于50%的比例也越大，說(shuō)明大多數(shù)豬群都存在弓形蟲(chóng)的反復(fù)感染。

表4　不同階段豬群親和力指數(shù)結(jié)果

3　討論

由于東三省和華北地區(qū)在4-6月份氣溫偏低，因此，此次弓形蟲(chóng)病流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果陽(yáng)性率較文獻(xiàn)報(bào)道要低。這可能與氣候和地區(qū)有一定關(guān)系，但豬場(chǎng)陽(yáng)性率表明所調(diào)查豬場(chǎng)均存在弓形蟲(chóng)感染。使用過(guò)磺胺間甲氧嘧啶的豬場(chǎng)弓形蟲(chóng)陽(yáng)性率明顯低于其他豬場(chǎng)。

在臨床實(shí)踐中，很多豬場(chǎng)豬瘟等免疫效果不理想可能與弓形蟲(chóng)的亞臨床感染造成豬免疫抑制有關(guān)。親和力指數(shù)結(jié)果表明，經(jīng)產(chǎn)母豬大多數(shù)都是弓形蟲(chóng)反復(fù)感染，因此在經(jīng)產(chǎn)母豬上要使用磺胺類(lèi)藥物定期凈化弓形蟲(chóng)。親和力指數(shù)30%是一個(gè)很重要的指標(biāo)，低于30%說(shuō)明弓形蟲(chóng)抗體親和力較低，為首次感染，因此，在這些豬群進(jìn)行預(yù)防性用藥也是有必要的。本試驗(yàn)初步掌握了東北、華北地區(qū)豬場(chǎng)弓形蟲(chóng)病的流行情況，為豬弓形蟲(chóng)病的綜合防控提供了依據(jù)。

［1］Nicolle C，Manceaux L.Sunune infection a crops deleishman（ou organisms）du gondii［J］.C R Hebd Seances Acad Sci，1908，147：736-766.

［2］蔣業(yè)慧，王正榮，張艷艷，等.北疆部分地區(qū)奶牛弓形蟲(chóng)血清學(xué)調(diào)查［J］.中國(guó)獸醫(yī)雜志，2015，51（9）：56-57.

［3］陳永軍，王權(quán)，蔣蔚，等.上海市豬弓形蟲(chóng)流行病學(xué)調(diào)查［J］.中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)，2010，18（5）：54-58.

［4］Fan C K，Su K E，Tsai Y J.Serological survey of Toxoplasma gondii infection among slaughtered pigs in northwestem Taiwan［J］.J Parasitol，2004，90：653-654.

［5］Huong L T T，Dubey J P.Seroprevalence of Toxoplasma gondii in pigs from Vietnam［J］.J Parasitol，2007，93：951-952.

［6］張德才，洪源，趙恒云，等.遼寧省豬弓形蟲(chóng)感染地理分布調(diào)查［J］.動(dòng)物學(xué)雜志，1994，29（4）：12-14.

［7］斯特勞B E.豬病學(xué) ［M］.趙德明，張中秋，沈建忠譯.8版.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2000：681-685.

［8］謝德華，翁亞彪，朱興全.我國(guó)豬弓形蟲(chóng)病的研究概況［J］.中國(guó)獸醫(yī)寄生蟲(chóng)病，2004，12（2）：33-35.

S852.72+3

B

0529-6005（2016）04-0107-02

2015-11-12

衛(wèi)生計(jì)生公益性行業(yè)基金生物實(shí)驗(yàn)中的人畜共患病安全問(wèn)題及其對(duì)策研究（201302006）

鹿雙雙（1989-），女，研究實(shí)習(xí)員，碩士，從事獸醫(yī)以及實(shí)驗(yàn)室管理工作，E-mail：lsscau@126.com

盧選成，E-mail：luxc@chinacdc.cn