豬場口蹄疫抗體血清學調查與分析

張改文，郝衛芳，史新濤，李　赟

（太原市動物疫病預防控制中心，山西 太原 030027）

豬場口蹄疫抗體血清學調查與分析

張改文，郝衛芳，史新濤，李赟

（太原市動物疫病預防控制中心，山西 太原 030027）

口蹄疫是偶蹄動物感染口蹄疫病毒（FMDV）引起的一種急性、熱性、接觸性傳染病，黃牛、水牛、豬、駱駝、羊、鹿等動物最易感。口蹄疫病毒分為O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3（即南非口蹄疫病毒1、2、3型）和Asia I（亞洲I型）7個血清型，各型之間幾乎沒有免疫保護力，感染了口蹄疫病毒某一血清型的動物仍可感染其他血清型病毒而發病。近兩年，周圍規模化豬場O型口蹄疫免疫抗體合格，仍有口蹄疫疫情發生，為進一步研究豬場口蹄疫疫病的發生原因，對28個規模化豬場進行了口蹄疫病毒O型、A型和非結構蛋白抗體水平血清學調查，分析當前豬場是否存在感染口蹄疫病毒野毒株，以及感染A型口蹄疫病毒的可能。FMDV的免疫是依賴T細胞和B細胞應答，疫苗接種后主要誘導機體產生中和抗體，但FMDV中非結構蛋白NSP相對保守，NSP是除了衣殼蛋白1A、1B、1C、1D和它們的前體蛋白之外的所有由病毒編碼但不參與病毒衣殼組成的蛋白，包括成熟蛋白L、2A、2B、2C、3A、3B、3C、3D以及它們的前體，它參與病毒的復制、多聚蛋白的裂解和病毒顆粒的組裝過程。

1　樣品與試劑

本市10個縣隨機選取了不同規模的豬場28個，其中500頭以下7個場，500～1 000頭之間7個場，1 000～3 000頭之間7個場，3 000頭以上7個場，隨機采集以上豬場血清樣品340份，進行了口蹄疫O型、A型和非結構蛋白（3ABC）抗體血清學檢測。

檢測試劑為市場上成熟的試劑盒，其中豬O型口蹄疫病毒抗體ELISA檢測試劑盒，購自鄭州中道生物技術有限公司；口蹄疫A型液相阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，購自中國農業科學院蘭州獸醫研究所、口蹄疫病毒非結構蛋白抗體單抗阻斷ELISA試劑盒，購自北京世紀元亨動物防疫技術有限公司；檢測儀器有：酶標儀（Thermo MK3），自動洗板機（Thermo MK2）等。

2　結果

2.1檢測結果3項檢測結果如表1、圖1。4種不同規模豬場O型口蹄疫抗體陽性率均達85%以上，A型口蹄疫抗體陽性率分別為10.8%、16.25%、30.8%、49%，非結構蛋白抗體檢測陽性率分別為9.2%，13.75%、30%、24%。A型口蹄疫抗體陽性場18個，占調查場的64.2%，非結構蛋白陽性場數20個，占調查場的71.4%。

28個豬場中O型口蹄疫免疫抗體合格的場25個；A型口蹄疫抗體陽性場18個；非結構蛋白抗體陽性場20個。A型口蹄疫抗體陽性率高于非結構蛋白抗體陽性率的場8個，非結構蛋白抗體陽性率高于A型口蹄疫抗體陽性率的場4個，二者陽性率相同的場2個；只A型抗體陽性場4個；只非結構蛋白抗體陽性場6個；A型口蹄疫抗體和非結構蛋白抗體均為陰性場4個。

通過對免疫情況與檢測結果的綜合分析，免疫豬O型口蹄疫合成肽疫苗的13個豬場中，A型和非結構蛋白抗體均為陽性場6個，只A型抗體陽性場1個，只非結構蛋白抗體陽性場3個，二者抗體均為陰性場3個。免疫O型口蹄疫滅活疫苗的15個豬場中，A型和非結構蛋白抗體均為陽性場9個，只A型抗體陽性場2個，只非結構蛋白抗體陽性場2個，二者抗體均為陰性場2個。

2.2結果分析

2.2.1Rodriguez等［1］、Mackey等［2］、Brochi［3］、Bergerman等［4］、朱詠梅［5］通過對非結構蛋白（3ABC）抗體的產生機理，野毒感染3ABC抗體檢測技術的建立，3ABC抗體檢測技術與其他抗體檢測技術的比較和臨床檢測試驗應用的研究，證明了非結構蛋白（3ABC）抗體檢測技術仍是比較有效的區別口蹄疫免疫抗體和感染抗體的方法。因此，試驗檢測結果顯示，28個規模化豬場中口蹄疫病毒大面積、大范圍存在，其中A型口蹄疫病毒潛伏感染和隱性感染的現象也較嚴重。

2.2.2豬O型口蹄疫屬于國家強制豬免疫的惟一口蹄疫疫苗。28個豬場O型口蹄疫免疫抗體整體合格率達91.5%，除3個場合格率為55%、65%、70%外，其余25個豬場合格率均在80%以上，說明豬場O型口蹄疫免疫抗體水平很高，仍是防控豬口蹄疫疫病的重要措施。檢測結果顯示，O型口蹄疫免疫抗體不合格的3個豬場，口蹄疫非結構蛋白抗體檢測全為陽性，其中2個場A型口蹄疫抗體檢測也為陽性，表明3個豬場可能感染過或正感染口蹄疫病毒，影響了O型口蹄疫免疫抗體的產生；其中2個A型抗體陽性場也不能排除其他口蹄疫亞型病毒感染的可能。

表1　4種規模豬場3種口蹄疫血清學抗體檢測結果

圖1　4種不同規模豬場3種口蹄疫抗體檢測陽性率

2.2.3口蹄疫A型和非結構蛋白抗體均為陰性的5個場，占調查場的17.8%，其中免疫豬O型口蹄疫合成肽疫苗的場3個，免疫O型口蹄疫滅活疫苗的場2個，未發現不同疫苗免疫的差異。檢測結果表明，這5個場未發生口蹄疫病毒的感染。

2.2.4口蹄疫A型和非結構蛋白抗體均為陽性的14個場，豬場規模越大，A型口蹄疫陽性率越高；非結構蛋白抗體檢測陽性率隨著養殖規模的增大呈拋物線，1 000～3 000頭規模豬場陽性率最高。14個場中A型口蹄疫抗體陽性率高于非結構蛋白抗體陽性率的場8個，說明A型口蹄疫病毒在豬場大范圍存在，其感染的概率大于其他口蹄疫亞型感染的概率。A型口蹄疫抗體陽性率低于非結構蛋白抗體陽性率的場4個，說明豬場存在口蹄疫病毒感染的可能，但不能說明全是A型口蹄疫感染。

2.2.528個調查豬場中，非結構蛋白抗體陽性場有20個，占調查場的71.4%，A型抗體陽性場有18個，占調查場的64.3%，調查警示規模化豬場口蹄疫病毒大范圍存在，其中A型口蹄疫病毒存在和感染的可能性較大，需要引起豬場的高度重視，做好相應的預防措施。

3　討論

該項調查中采集的豬群主要為育肥豬，年齡均2歲以下，而且只有個別豬場進行過A型口蹄疫免疫，其余豬場均未進行A型口蹄疫免疫，因此，整體調查分析，A型口蹄疫病毒在部分豬場潛伏存在，雖未引起口蹄疫疫情的暴發，但需要引起豬場的高度重視，應盡早制定相應的應對措施來應對A型口蹄疫疫情暴發和蔓延。

對未免疫A型豬口蹄疫的種豬場和規模化豬場，開展一次豬A型口蹄疫血清學抗體篩查，對陽性樣品進一步進行A型口蹄疫病原學確診，來凈化和防控A型口蹄疫病毒的潛在威脅。對免疫A型口蹄疫疫苗的豬場進行免疫抗體水平的跟蹤監測，同時進行非結構蛋白（3ABC）抗體的檢測，排除口蹄疫其他血清型病毒的感染。

經過調查分析，基層動物疫病檢測機構日常檢測需加大檢測力度。豬口蹄疫免疫抗體檢測，不能單一地檢測口蹄疫O型免疫抗體，要結合口蹄疫血清學其他檢測技術進行綜合檢測，辨別抗體是免疫抗體還是感染抗體。此外，A型抗體陽性率隨著豬場規模擴大陽性率升高，預示A型口蹄疫病毒在豬群中大面積存在，需加以重視；而A型口蹄疫在豬場是否納入強制免疫計劃，仍需進一步研究論證。

［1］Rodriguez A，Dopazo J，Saiz J C，et al.Immunogenicity of nonstructural proteins of foot-and-mouth disease virus：differences between infected and vaccinated swine［J］.Arch Virol，1994，136（1/2）：123-131.

［2］Mackey D K J，Forsyth M A，Davies P R，et al.Differentiating infection from vaccination in foot-and-mouth disease by the detection of antibodies to the non-structural protein 3D，3AB and 3ABC in ELISA using antigens expressed in baculovirus［J］.Arch-Virol，1998，143：1461-1476.

［3］Brocchi E，de Diego M I，Berlinzani A，et al.Diagnostic potential of Mab based ELISA for antibodies to non-structural roteins of foot-and-mouth disease virus to differentiate nfection from vaccination［J］.Vet Q，1998，20（S）：20-24.

［4］Bergmann I E，de Mello P A，Nneitzet E，et al.Diagnosis of persistent a phthovirus infection and its differentiation from vaccination response in cattle by use of enzyme linked immunoelectrotransfer blot assay［J］.Arch Virol，2000，145：473-489.

［5］朱詠梅，朱來華，鄭小龍，等.口蹄疫非結構蛋白研究進展［J］.中國動物檢疫，2011，28（5）：83-86.

S852.65+1

B

0529-6005（2016）04-0068-02

2015-08-28

張改文（1958-），男，高級畜牧師，本科，主要從事動物疫病預防及疫情控制，E-mail：haowflijia@163.com