鴨疫里默菌與大腸桿菌混合感染的診治

趙光偉，陸　維，楊曉偉

（西南大學榮昌校區動物疾病快速診斷中心，重慶 榮昌 402460）

鴨疫里默菌與大腸桿菌混合感染的診治

趙光偉，陸維，楊曉偉

（西南大學榮昌校區動物疾病快速診斷中心，重慶 榮昌 402460）

2014年6月，四川省宜賓市某鴨場30日齡鴨發生一起以典型的心包炎、肝周炎、氣囊炎為特征的傳染病，經臨床觀察和實驗室診斷，確診為鴨疫里默菌與大腸桿菌混合感染。報告如下。

1　發病情況及病理變化

四川省宜賓市某鴨場飼養了3 000羽雛鴨，30日齡時有600多羽雛鴨出現精神委靡，食欲不振，腿軟，不愿走動，拉黃白痢，瀕死前出現神經癥狀，頭頸震顫。發病后1周內死亡率約為21%。病死鴨剖檢可見：氣囊增厚，表面被覆有纖維素性滲出物，呈灰白色；心包膜變厚，表面有纖維素性滲出物，心包液增量，呈淡黃色；肝臟腫大、質地脆弱，被膜增厚，表面的纖維素膜較厚，呈灰白色，易剝離；腦膜水腫、充血和出血，腎臟病變不明顯。

2　實驗室診斷

2.1細菌分離取病死鴨腦組織，接種于巧克力培養基，于37℃溫箱有氧條件下和蠟燭罐培養24～48 h，觀察菌落形態，挑選典型菌落進行純培養，并染色鏡檢。在巧克力培養基上長出一大一小的兩種菌落，其中小的菌落暫命名為A菌，其表面光滑、稍突起、圓形、濕潤、呈露珠狀，直徑1～1.5 mm。大的菌落暫命名為B菌，呈圓形凸起、光滑、濕潤、半透明、灰白色菌落，直徑2～3 mm；分別從兩種菌中挑取單個菌落接種于LB培養基中，37℃條件下以120 r/min振蕩培養24 h獲得純培養物。將純培養物涂片，經革蘭染色后，鏡檢，可見A菌為革蘭陰性小桿菌，B菌為革蘭陰性粗短桿菌。挑取A、B兩種菌分別接種于麥康凱瓊脂平板，A菌接種后不生長，B菌能形成紅色菌落。

2.2生化鑒定對A、B兩種菌進行生化試驗，結果如表1所示。其中A菌不發酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖，不產生硫化氫和吲哚，V-P試驗和M.R.試驗均為陰性，觸酶試驗陽性，尿素酶試驗陽性，不液化明膠，無運動力，枸櫞酸鹽試驗陰性，這些生化特征均與鴨疫里默菌相符；B菌可發酵麥芽糖、乳糖、葡萄糖、甘露醇等多種糖類，產酸產氣，M.R.試驗陽性，V-P試驗和枸櫞酸鹽試驗陰性，不產生硫化氫，吲哚和甲基紅試驗均為陽性，這些生化特性均與大腸桿菌相符。

表1　分離菌生化試驗結果

2.3PCR鑒定

2.3.1引物參照覃宗華等［1］的方法合成3條特異性引物，其中1條共用引物（RAE-CFOR）位于鴨疫里默菌和大腸桿菌16S rRNA基因中均保守的區域，另2條（RA-REV和EC-REV）則在各自種內保守而種間不同的區域。RAEC-FOR與ECREV擴增大腸桿菌特異性片段，預計擴增長度為718 bp。RAEC-FOR與RA-REV擴增鴨疫里默菌特異性片段，預計擴增長度為354 bp。引物序列如下。

RAEGFOR：5′-ACGTCATCCCACCTTCCTC-3′；

RA-REV：5′-GTTCAGACTAAGCGAAAG-3′；

EC-REV：5′-TCATTGACGTTACCCGCA-3′。引物由上海英駿生物技術有限公司合成。

2.3.2PCR擴增配制2個50 μL的反應體系，其中Premix TaqTM（含TaKaRa Ex Taq1.25 U、dNTPs各0.4 mmol/L、4 mmol/L Mg2+）25 μL；引物RAECFOR（100 μmol/L）1 μL、RA-REV（50 μmol/L）1 μL、EC-REV（50 μmol/L）1 μL；在第1個體系加2 μL A菌純培養物，第2個體系加2 μL B菌純培養物；然后加滅菌雙蒸水補足50 μL。PCR擴增程序：94℃預變性5 min；94℃變性30 s，50℃退火1 min，72℃延伸1 min，30個循環；72℃ 延伸7 min。擴增產物通過1%瓊脂糖凝膠電泳，凝膠成像系統拍照（見圖1）。結果A菌與B菌所擴增的片段與陽性對照大小一致。

圖1　分離菌PCR電泳結果

2.4藥敏試驗取分離純化的鴨疫里默菌和大腸桿菌分別按K.B紙片法進行藥敏試驗，敏感性的判斷參考動物微生物實驗教程［2］。結果發現，分離的鴨疫里默菌對克拉霉素、頭孢拉定、呋喃妥因、氧氟沙星高度敏感；對環丙沙星、氨芐青霉素、恩諾沙星、頭孢唑林、氯霉素、多粘菌素B、紅霉素中度敏感；對復方新諾明、慶大霉素、諾氟沙星、卡那霉素、頭孢噻肟、頭孢西丁、新霉素、青霉素G、鏈霉素耐藥。所分離的大腸桿菌對氨芐青霉素、慶大霉素、氧氟沙星、頭孢噻肟高度敏感；對卡那霉素、復方新諾明、頭孢西丁、多粘菌素B、呋喃妥因、克拉霉素中度敏感；而對鏈霉素、氯霉素、新霉素、頭孢唑林、諾氟沙星、頭孢拉定、環丙沙星、青霉素G、紅霉素、恩諾沙星不敏感。結果如表2所示。

表2　分離菌藥敏試驗

3　診斷

根據臨床癥狀、剖檢病理變化、細菌形態、培養特性、生化鑒定試驗以及PCR鑒定綜合判斷，引起該場鴨群發病的病原為鴨疫里默菌與大腸桿菌混合感染。藥敏試驗發現氧氟沙星對兩個病原均高度敏感。

4　治療

根據藥敏試驗結果，病鴨每羽肌肉注射3萬IU頭孢氨芐，以氧氟沙星（50 mg/羽）飲水并添加禽用多維等營養物質，連用3 d。同時做好鴨舍及用具的消毒工作，消毒前清掃鴨舍和運動場地，每天消毒1次，連續3 d。經治療，鴨群精神狀況轉好，采食量增加，至第7天鴨群完全康復。

5　小結

由于發病前期氣溫變化較大，對鴨群是一應激過程，易導致鴨疫里默菌與大腸桿菌混合感染的發生。因此要加強管理，做好雛鴨的保溫工作，同時注意通風換氣，再以配合飼料進行飼養。鴨舍及周圍環境的消毒工作也要重視，在每日早晚清掃糞便后可進行帶鴨消毒。平時多觀察鴨的精神狀態，一旦發現腿軟、少食，應馬上隔離治療，避免擴大到全群。

［4］覃宗華，蔡建平，呂敏娜，等.鴨疫里默氏菌病和大腸桿菌病鑒別診斷雙重PCR方法的建立和應用［J］.畜牧獸醫學報，2008，39（4）：517-521.

［5］沙莎，宋振輝.動物微生物實驗教程［M］.重慶：西南師范大學出版社，2011：65-68.

S858.32

B

0529-6005（2016）04-0057-02

2014-12-04

趙光偉（1979-），男，副教授，博士，從事動物疾病的快速診斷工作，E-mail：zhaoguangwei@swu.edu.cn