高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（J XA1-R株）免疫后病毒血癥和抗體消長規律

魏園園，顧貴波，申冠男，趙　培，李井春，王　冰，楊本勇

（遼寧省動物疫病預防控制中心 遼寧省動物醫學研究院，遼寧 沈陽 110164）

高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（J XA1-R株）免疫后病毒血癥和抗體消長規律

魏園園，顧貴波，申冠男，趙培，李井春，王冰，楊本勇

（遼寧省動物疫病預防控制中心 遼寧省動物醫學研究院，遼寧 沈陽 110164）

應用高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（JXA1-R株）對28-30日齡的仔豬進行免疫，前8周每周采血，8周后每2周采血進行疫苗毒核酸檢測和抗體水平檢測，直至免疫后第16周。結果表明，高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（JXA1-R株）在血清中存在的最長時間大約為6周；抗體從免疫后第2周開始轉陽，至第3周時全部為陽性，并且抗體水平不斷上升，至免疫后第10周時平均抗體水平達到最高。

仔豬；高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（JXA1-R株）；免疫；存在時間

高致病性豬繁殖與呼吸綜合征（High pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome，HP-PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）變異株引起的一種急性高致死性疫病。發病主要特征為懷孕母豬流產、早產、木乃伊胎等，母豬流產率可達30%以上；仔豬出現嚴重的呼吸道癥狀，感染率可達100%，死亡率在50%以上。目前我國使用的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征疫苗均為活疫苗，據報道活疫苗免疫后可在動物體內復制并持續存在。為摸清高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗免疫后在豬體內的存在時間，我們進行了本試驗，報告如下。

1　材料與方法

1.1試驗豬在某豬場選擇28～30日齡、未進行高致病性豬繁殖與呼吸綜合征免疫的健康仔豬20頭，編號為A1～A20。

1.2疫苗高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（JXA1-R株），中牧實業股份有限公司成都藥械廠生產，批號：1302027-1。

1.3高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（JXA1-R株）實時熒光RT-PCR檢測試劑盒，購自北京世紀元亨動物防疫技術有限公司［1］，批號：JR20131106P。

1.4豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測試劑盒，購自北京天之泰生物科技有限公司，法國LSI公司生產。

1.5核酸提取試劑核酸提取試劑盒（磁珠法），購自西安天隆生物科技有限公司。

1.6試驗器材eppendorf微量移液器，ABI 7500Fast熒光PCR儀，西安天隆生物科技有限公司，NP968核酸提取儀，伯樂iMark酶標儀。

1.7免疫注射按疫苗說明書提供的免疫劑量和注射部位對實驗豬進行免疫注射。

1.8采血免疫后每隔1周采血1次，連續采8周；以后每隔2周采血1次，一直采到免疫后第16周。無菌分離血清，進行高致病性豬繁殖與呼吸綜合征疫苗毒（JXA1-R株）核酸檢測。

1.9高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（JXA1-R株）核酸檢測用熒光RT-PCR方法進行檢測。

1.9.1核酸提取在96孔核酸提取板的第1及第7列孔中分別加入200 μL血清，10 μL Proteinase K，4 μL Acryl Carrier，然后將板放入核酸提取儀中，按說明書程序進行自動化提取。

1.9.2熒光PCR檢測取2.5 μL模板RNA、6.6 μL DEPC水、13.9 μL RT-PCR反應液、1.0 μL酶混合液、1.0 μL熒光探針放入熒光PCR反應管中，總體積25 μL。在熒光PCR儀上按以下程序進行反應：42℃ 5 min，95℃ 10 s；95℃ 5 s，60℃35 s，45個循環，在每次循環第二步（60℃35 s）收集熒光信號。判定標準：Ct值≤38.0為陽性，Ct值＞38.0或無Ct值為陰性。

1.10豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測按試劑說明書的步驟和要求操作。阻斷率（IRPC）大于20%為抗體陽性，阻斷率越大，抗體水平越高。

2　結果與分析

2.1JXA1-R株疫苗核酸檢測結果見表1。由表1可以看出，在免疫后1周時所有試驗豬疫苗毒核酸均為陽性，陽性率100%，從免疫后第2周開始有1頭豬疫苗毒核酸已經轉陰，此后陽性率開始下降，至免疫后第6周時降為40%，至第7周時降為0%，并一直持續到試驗結束時的免疫后第16周。表明，JXA1-R株高致病性豬繁殖與呼吸綜合征疫苗毒的病毒血癥時間最短為1周，最長為6周。

表1　血清中J XA1-R株疫苗毒核酸檢測

試驗中發現，有4頭豬（A11、A12、A13、A19）疫苗毒核酸轉陰后間隔1～3周又出現陽性情況，表現為間歇性帶毒。

2.2豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測結果見表2。從表2可以看出，免疫前抗體均為陰性，免疫后1周時陽性率為25%（5/20），免疫后2周時陽性率70%（14/20），免疫后第3周時陽性率達到100%（20/20），一直持續至第5周，第6周時陽性率下降為80%（16/20），從第7周開始陽性率又上升為100%（10/10），并一直持續至第16周。從中插彩版圖1中可以看出試驗豬的抗體消長變化規律。試驗豬的平均抗體阻斷率也在不斷上升，一直上升至免疫后第10周達到最高值91.4%后，開始慢慢下降。

表2　豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測

3　討論

3.1從試驗豬血清中高致病性豬繁殖與呼吸綜合征疫苗毒（JXA1-R株）存在時間的變化規律可以看出，疫苗毒在不同豬群、不同豬個體中存在時間差異較大，最短的只存在1周，最長的可以達到免疫后第6周。即高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（JXA1-R株）免疫后病毒血癥持續時間為6周。

3.2本試驗的抗體檢測結果表明，高致病性豬繁殖與呼吸綜合征疫苗毒（JXA1-R株）免疫后第2周抗體開始轉陽，至第3周時全部為陽性，并且抗體水平不斷上升，至免疫后第10周時平均抗體水平達到最高。但從圖1中可以發現，不同豬群和不同豬只的抗體水平存在較大差異，并且抗體水平上升的過程并非是連續的，有的豬在上升過程中會有短暫的下降，這可能與疫病狀況、生物安全水平、飼養管理水平等因素有關。

3.3試驗豬中A11、A12、A13、A19號豬疫苗毒轉陰后間隔1～3周又出現了轉陽的情況，表現為間歇性攜帶疫苗毒，而從圖1抗體變化曲線中可以看出，這4頭豬的抗體在8周之前一直處于比較低的水平。因此筆者分析認為，間歇性攜帶疫苗毒現象的出現可能與個別豬只免疫抗體水平低有關。活疫苗免疫后刺激動物機體產生抗體，產生的抗體又不斷的將活疫苗毒中和，所以在動物體內疫苗毒與抗體處于一種相互斗爭的狀態［1-2］。隨著免疫時間的延長，抗體水平進一步提高，疫苗毒不斷的被中和，以致無法被檢測到，表現為病毒核酸檢測結果為陰性。但是如果動物感染了某些疫病或飼養管理方面出現問題，將會直接影響機體的免疫系統功能，導致抗體水平較低，在與病毒的斗爭中處于一種此消彼長和此長彼消的狀態，表現為間歇性帶毒［3］。

［1］魏津，蔣卉，戴志紅，等.高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（JXA1-R株）病毒含量熒光定量PCR方法的建立［J］.中國獸藥雜志，2013，47（10）：39-42.

［2］黃名英，傅安靜，劉平，等.高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染早期體內增殖規律調查［J］.畜牧與獸醫，2013，45（2）：50-54.

［3］李明義，白志娟，王莉娟，等.豬瘟滅活疫苗抗體消長規律動態研究［J］.中國預防獸醫學報，2005，27（5）：385-388.

S858.28

A

0529-6005（2016）04-0044-02

2014-10-27

遼寧省重大科技攻關項目（2011214001）

魏園園（1983-），女，助理獸醫師，本科，主要從事動物疫病防控、檢測、研究等工作，E-mail：21802661@qq.com

楊本勇，E-mail：benyong@tom.com