用聚乙二醇-600（PEG-600）制作小鼠整體標本

張筱雨，陳　宇，高　瑩，徐　博，羅繼龍，白志坤

（東北農業大學動醫學學院，黑龍江 哈爾濱 150030）

用聚乙二醇-600（PEG-600）制作小鼠整體標本

張筱雨，陳宇，高瑩，徐博，羅繼龍，白志坤

（東北農業大學動醫學學院，黑龍江 哈爾濱 150030）

為了探索替代福爾馬林制作標本的基本方法，采用聚乙二醇（PEG）浸漬法制作經久耐用、適于獸醫教學的解剖標本。其基本方法是先將標本在福爾馬林固定后，經過流水沖洗，在梯度聚乙二醇-600中浸漬。通過使用這種方法制作出了小鼠整體標本（PEG浸漬的標本），可以存儲在塑料袋或箱子中，具有抵抗真菌和細菌的功效，而且不會對皮膚產生刺激性，已在獸醫解剖教學中成功地使用。

聚乙二醇（PEG）；標本；教學；獸醫解剖

自甲醛的發明以來，解剖標本的永久的存儲幾乎沒有什么困難，只要將標本儲存在大型儲罐內，蓋子擰緊，避免甲醛的蒸發就可。但由于甲醛的毒性和致癌作用，在使用標本前標本必須用流水沖洗24 h，這促使研究人員不斷地嘗試其他的無副作用的替代物質［1-2］。目前，商業化生產耐用的解剖教學標本的方法主要為生物塑化［3］。但由于其設備和所需藥品較為昂貴，許多解剖學教學機構一直在尋找比生物塑化更便宜、耐用，可行、用于生產的解剖標本制作方法。其中的一種替代方法就是聚乙二醇（PEG）保存法，其與生物塑化標本相比因具有更容易制作又便宜。自20世紀七十年代以來，已被越來越廣泛用于制作組織切片。

現介紹我們使用聚乙二醇（PEG）制成的小鼠整體解剖標本的一點經驗。

1　材料與方法

實驗動物昆明系小鼠由哈爾濱醫科大學實驗動物中心提供，經乙醚深度麻醉致死，并向腹腔內注射少量福爾馬林溶液后，浸泡于5%福爾馬林溶液中數天或數周。反復研究表明，福爾馬林滲入組織的速度大約是每天1 cm，以此來估計固定的持續時間約為1周。取出小鼠用流水沖洗24 h后，根據教學需求仔細解剖，并使其暴露一側腹腔器官，并對器官清空和清洗。然后將小鼠放于3%過氧化氫溶液中漂白24 h。漂白后的標本要再次用流水沖洗24 h之后，放于25%～100%梯度PEG-600（聚乙二醇-600），光復精細化工研究所，天津）中浸漬。為了達到更好的浸漬效果，可用不銹鋼吊籃將小鼠浸沒在PEG溶液中。在每種濃度中浸漬時間可以控制在7 d左右，直到100%PEG時可以延長時間。當沒有更多的水流動時，說明完成脫水。浸漬時，PEG溶液可更換數次。在完全飽和后，取出容器中的標本，并小心地用吸水紙擦去過量的PEG溶液，將其放置在濾紙上，在避光房間干燥數天。

2　結果

圖1　小鼠整體PEG浸漬標本

通過使用聚乙二醇-600浸漬法，高品質的小鼠整體標本被制作出來，如圖1所示。小鼠標本毛皮保持著原有的光滑色澤，內臟清晰。干燥后，標本變軟。如此浸漬的樣本外觀類似于它們的天然狀態，栩栩如生，適合在教學過程中使用。經過長時間放置并未發現腐敗和蟲蛀的現象，因而無需額外的保養。這種方法的另一大優點是處理時間較短，標本最快可以在2個月內完成。生物塑化標本的制作時間，則較長。PEG標本保存在一個開放的環境中，一段時間后他們就會吸濕，所以它們不可能完全干燥。建議制作好的標本放在塑料袋中儲存最合適，在標本用于教學后，應盡快重新包裝。

3　討論

動物尸體在動物醫學及人醫教學中有著不可替代的作用，但教學人員和學生一直受到防腐劑甲醛的侵害，因此找到好的可替代的方法是人們長期的期望［4-5］。PEG浸漬標本和生物塑化標本是保存標本的兩種不同方法，兩者有區別又有共同之處。這兩種技術之間的差別是由不同材料確定的。PEG是用醇（聚乙二醇），而生物塑化則用硅膠；PEG浸漬過程中，醇不會發生聚合反應，因此標本是軟的，而硅膠會發生聚合反應，在塑化中會變硬；使用哪種方法很大程度上決定于標本制作的目的。在一般情況下，當需要比較靈活或制備可以擴大的中空器官時，可以使用PEG，例如PEG浸漬關節標本，使其靈活，可移動。同時，出于教學目的以及更好表現鄰近結構，可以用水彩或油畫顏料上色。PEG浸漬的中空臟器可以被打開，這樣你就可以看一下里面的成分，尤其對于展示狗、貓、豬或馬的腹腔的黏膜的不同外觀特別有用。此外，由于PEG-浸漬樣品可切片，可以用于組織學研究觀察［6］。如果在浸漬前，做各種不同的預處理，可以使樣品滿足各種使用目的。例如，血管和淋巴管可填充有顏色的樹脂，使血管和神經的分布可以清晰可見。不同的體腔可以注入不同顏色，以更好的展示其分布方向。如果PEG浸漬標本被妥善處理的話，是可能長期使用的，因為它們能抵抗真菌和細菌的能力。PEG浸漬標本在外觀和形狀上與生物塑化標本相同，但PEG技術比生物塑化標本便宜得多，并且需要較少的技術設備。一瓶為500 mL PEG-600成本僅為32元，而且PEG液體可循環使用。要想回收PEG的話，只需要將混合物加熱到90℃，排出水蒸汽即可。

4　小結

PEG和生物塑化方法都有自己的優點和缺點。相較于生物塑化技術，PEG-浸漬更有資金優勢，標本有更大的靈活性；更為有利的是PEG浸漬的標本沒有毒性［7-8］，并具有較高的皮膚親和性［9］。因此PEG浸漬標本制作技術是一種非常有用的保存動物尸體和器官的方法，使用可達數年。

志謝：本實驗是在小組成員共同配合下完成的。東北農業大學動物醫學院家畜解剖學教研室梁建廣高級實驗師給予幫助。

［1］李紅霞，黃厚今.甲醛的毒性研究進展［J］.國外醫學（衛生學分冊），2006，02：114-117.

［2］謝穎.甲醛的生殖毒性［J］.工業衛生與職業病，2002，02：118-120.

［3］張紹祥，劉正津，何光箎.生物塑化技術（Plastination）［J］.中國臨床解剖學雜志，1996，01：67-70.

［4］白志坤.尸體解剖作為教學方法：過去、現在和將來［J］.四川解剖學雜志，2008，02：44-46.

［5］白志坤，曹允考，羅繼龍，等.學生期望的家畜解剖學教學方法［J］.黑龍江畜牧獸醫，2010，15：171-172.

［6］朱洪亮，劉向東，盧永根，等.研究植物胚囊中微管的PEG切片法的改進［J］.華南農業大學學報，2001，04：52-54.

［7］張偉，劉琳婕，何仲貴.聚乙二醇在藥物制劑中的應用［J］.中國藥劑學雜志，2007，02：67-74.

［8］李愛貴，鄧聯東，董岸杰.聚乙二醇在新型藥物制劑中的應用［J］.高分子通報，2004，04：96-101.

［9］呂邵娃，葉揚帆，趙權濤，等.新型聚乙二醇穴位藥貼的制備工藝研究［J］.哈爾濱商業大學學報（自然科學版），2012，05：520-522.

S859.79+7

A

0529-6005（2016）04-0042-02

2014-10-26

東北農業大學實驗中心開放項目（06600023c）；黑龍江省高等教育學會規劃課題（14G043）

張筱雨（1993-），女，本科生，就讀于動物醫學專業，E-mail：raining931014@hotmail.com

陳宇（1992-），女，本科生，就讀于動物醫學專業，E-mail：1373768879@qq.com

陳宇與張筱雨對本文具有同等貢獻

白志坤，E-mail：baizhikun@neau.edu.cn