替米考星水溶性粉在家兔體內(nèi)的藥動學研究

宋麗莉，孫朋超，黃維維，梁　倩，趙永星

（鄭州大學藥學院，河南 鄭州 450001）

替米考星水溶性粉在家兔體內(nèi)的藥動學研究

宋麗莉，孫朋超，黃維維，梁倩，趙永星

（鄭州大學藥學院，河南 鄭州 450001）

為了考察替米考星水溶性粉在家兔體內(nèi)的藥動學特征，本試驗分別給受試家兔灌服替米考星、替米考星腸溶微丸、替米考星水溶性粉，以12.5 mg/kg體重劑量給藥，采用HPLC方法分析不同時間點受試家兔血漿中替米考星的藥物濃度。試驗結果顯示，新研制的20%替米考星水溶性粉經(jīng)口服后，藥物在家兔體內(nèi)可被快速吸收達到較高的血藥濃度0.413±0.148 μg/mL，血藥濃度-時間曲線下的面積（AUC）為4.334±0.620 μg/mL·h，相對生物利用度（F）達到86.99%，說明替米考星水溶性粉經(jīng)口服后的生物利用度較高，有利于致病菌細菌的抑制或殺滅。

替米考星水溶性粉；藥動學；家兔

替米考星（tilmicosin）是由英國Elanco公司基于泰樂菌素合成的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，因其對畜禽疾病療效佳而被廣泛應用。臨床上，替米考星主要用于防治牛、羊、豬、雞等動物由細菌和支原體感染引起的疾病，如肺炎、乳房炎、豬氣喘病、雞慢性呼吸道疾病等［1］。據(jù)研究報道，已研制替米考星制劑有納米乳［2］、微球［3-6］、注射劑［7］等。但因其水溶性差，導致在給藥劑量下難以達到有效治療濃度。為增加替米考星的水溶性，提高其生物利用度，本試驗將替米考星制備成水溶性粉，并比較替米考星、替米考星腸溶微丸和替米考星水溶性粉在家兔體內(nèi)的藥動學特征，為家畜合理的給藥提供科學依據(jù)。

1　材料與方法

1.1儀器和試劑儀器設備：LC-1200高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；固相萃取真空管裝置（美國Waters公司）；pH計（上海楚柏實驗室設備有限公司）；SPE柱（美國Agilent公司）；LG16-B高速離心機（北京雷勃爾醫(yī)療器械有限公司）；GL-88B型旋渦混合器（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）。

藥物和試劑：替米考星（山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司）；替米考星腸溶微丸（自制）替米考星可溶性粉（自制）；乙腈（色譜純，天津市四有精細化學品有限公司）；四氫呋喃（色譜純，天津市四有精細化學品有限公司）；二丁胺（色譜純，天津市科密歐化學試劑有限公司）。

1.2試驗動物18只健康家兔，體質量約（2± 0.5）kg，雌雄各半，將家兔飼養(yǎng)于單獨的代謝籠中，自由飲水，試驗開始前及試驗過程中飼喂不含任何抗生素的全價飼料，每天定時給料2次。試驗前標記，逐只稱質量并記錄，連續(xù)飼喂3周以適應養(yǎng)殖環(huán)境。

1.3試驗方法

1.3.1試驗方案試驗分為3組，每組6只家兔，給藥劑量為12.5 mg/kg體重，灌服給藥。第1組為20%替米考星；第2組為自制20%替米考星腸溶微丸；第3組為新研制的20%替米考星水溶性粉。給藥前采血，給藥后分別在0.08、0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0、24.0、48.0、72.0 h和96.0 h耳緣靜脈采血，每次采血量1.0 mL。血液置于含有肝素的聚丙烯離心管中，3 500 r/min離心10 min，吸取上層血漿置于聚丙烯離心管中，密封，避光，－20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2血漿樣品處理與檢測用固相萃取法處理樣品。將SPE柱置于固相萃取真空管裝置上，加入5 mL甲醇活化柱子后用5 mL水平衡SPE柱。精確量取血漿樣品0.5 mL上樣，讓樣品通過SPE柱，調整真空泵的壓力使流速為約每秒1滴，5 mL純水和5 mL乙腈－水（體積比為35∶65）分別洗滌。溶液從SPE柱流出后，將真空泵的壓力調小，讓SPE柱在真空下干燥至少5 min，然后用2.5 mL洗脫液洗脫于刻度試管中，30℃水浴中氮氣吹至近干。用流動相溶解定容至100 μL，渦旋30 s，靜置15 min，0.22 μm針筒式濾膜過濾后取50 μL進行HPLC分析［8-9］。

1.4HPLC測定替米考星血藥濃度方法建立

1.4.1色譜條件參考文獻［10］方法，并調整如下：紫外檢測器，檢測波長為280 nm；色譜柱為Agilent，ODS反相色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相乙腈－四氫呋喃－緩沖液-水（體積比為11∶5.5∶4.5∶79，pH值2.5）；流速1.0 mL/min，進樣量50 μL。

1.4.2標準曲線的建立用流動相將替米考星標準儲備液分別稀釋成0.025、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 μg/mL和10.0 μg/mL的標準工作溶液，按1.2.2項下方法處理樣品后，各取50 μL進行HPLC分析。以濃度為橫坐標，峰面積（順式和反式異構體的峰面積之和）為縱坐標，繪制標準曲線。

1.4.3檢測限和定量限的檢測取空白血漿，加入標準儲備液，采用倍比稀釋成濃度為0.05、0.025、0.0125 μg/mL的血漿樣品。按1.2.2項下方法進行樣品處理，測定色譜系統(tǒng)的基線噪音值，按信號強度與噪聲強度比（S/N）為3作為檢測限（LOD），S/N=10為定量限（LOQ）。

1.4.4添加回收率和精密度測定取空白血漿0.5 mL，添加一定體積的儲備液，使血漿中藥物濃度為0.05、0.50 μg/mL和5.00 μg/mL，按1.2.2項下樣品處理方法后進行HPLC測定，一日內(nèi)每個濃度取3個平行樣品，分別測定并計算回收率和日內(nèi)變異系數(shù)。

1.5數(shù)據(jù)處理與分析藥時數(shù)據(jù)采用藥代動力學程序軟件進行曲線擬合，采用PKSolver軟件以非房室模型求算藥動學參數(shù)。根據(jù)各劑型的AUC計算相對生物利用度，評價制劑的等效性。

2　試驗結果

2.1線性范圍、定量限和檢測限替米考星血漿濃度在0.025～10.0 μg/mL范圍內(nèi)，替米考星峰面積（順式和反式異構體的峰面積之和）與濃度呈線性相關，得到其回歸方程是y=300.99x-21.623（R2=0.9992）。空白血漿樣品添加標樣，倍比稀釋及處理后，測得血漿中替米考星濃度的LOQ和LOD分別為0.025 μg/mL和0.0125 μg/mL。

2.2回收率和變異系數(shù)空白血漿樣品添加標樣濃度分別在0.025、0.5、10.0 μg/mL時，替米考星血漿絕對回收率均高于65.0%，變異系數(shù)小于10%。結果表明，試驗所用的血漿處理方法和檢測方法可靠，重復性好，回收率和變異系數(shù)都達到了化學藥物藥代動力學試驗指導原則的要求，能滿足用于替米考星在動物血漿中的檢測。

2.3血藥濃度及藥代動力學參數(shù)三組受試家兔灌服給藥后，其藥代動力學參數(shù)和血藥濃度經(jīng)時變化結果見表1和圖1。替米考星對照組、微丸組和水溶性粉組的平均半衰期（t1/2）和體內(nèi)滯留時間（MRT）分別為34.746 h和46.343 h、26.632 h和33.097 h、23.516 h和29.580 h，對照組制劑的半衰期和平均滯留時間均顯著高于微丸組和水溶性粉組，相比水溶性粉組為最低。對照組、微丸組和水溶性粉組的平均血藥峰濃度分別為0.386 μg/mL、0.390 μg/mL和0.413 μg/mL，水溶性粉組的峰濃度顯著高于其他2組。然后8 h后對照組的血藥濃度均顯著高于水溶性粉組，微丸組與水溶性粉組相似。

表1　家兔口服替米考星制劑后藥動學參數(shù)

圖1　家兔口服替米考星制劑后血漿藥物濃度經(jīng)時曲線

2.4生物等效性評價根據(jù)相對生物利用度（F）公式可計算出替米考星水溶性粉和腸溶微丸的相對生物利用度（與對照組相比）分別為86.99%和72.68%。

3　討論

替米考星作為家畜用藥，常以內(nèi)服和皮下注射兩種途徑給藥，用于動物因敏感菌引起的感染性疾病。目前對替米考星在家兔體內(nèi)的藥代動力學研究得較少，本試驗制備了替米考星水溶性粉，溶解度達到100 mg/mL，并進行了替米考星、替米考星腸溶微丸和替米考星水溶性粉在家兔體內(nèi)的藥動學比較研究。研究結果表明，替米考星水溶性粉與其他劑型的藥動學參數(shù)有一定的差別，可能與制劑處方及劑型有關。

替米考星以12.5 mg/kg體重劑量灌服給藥，家兔給藥后替米考星的血藥濃度檢測96 h，由于水溶性粉96 h和72 h時的血藥濃度已降到最低檢測（0.0125 μg/mL）以下，因此藥代動力學分析建立在48 h［11］。血漿藥物濃度經(jīng)時曲線形狀表明，水溶性粉組經(jīng)口服后，藥物在家兔體內(nèi)吸收、分布很快，消除較為緩慢，該藥代動力學特征與家兔口服替米考星后體內(nèi)藥代動力學特征相似［12］。

替米考星、腸溶微丸和水溶性粉t1/2和MRT分別為34.746 h和46.343 h、26.632 h和33.097 h、23.516 h和29.580 h，水溶性粉作用時間較其他兩組相對較短，但水溶性粉在家兔體內(nèi)可被快速吸收達到較高的血藥濃度，有利于致病菌細菌的抑制或殺滅。此外，水溶性粉組的AUC和Cmax大于微丸組，說明水溶性粉組能夠長時間維持有效濃度，提高治療效果。替米考星水溶性粉和微丸的相對生物利用度（與對照組相比）分別為86.99%和72.68%，表明了替米考星水溶性粉與對照制劑生物等效，替米考星水溶性粉口服后，生物利用度較高。

本試驗中，對照組、微丸組和水溶性粉組中的每只家兔都經(jīng)過完整的采樣周期，每個時間點的血藥濃度由一組內(nèi)6只家兔的平均血藥濃度得到，這樣消除了一組數(shù)據(jù)間的個體差異性，保證了試驗結果的科學性。

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S859.79

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0529-6005（2016）09-0105-02

2015-06-24

宋麗莉（1990-），女，碩士，從事藥物制劑與新型給藥系統(tǒng)研究，E-mail：songlilia315@126.com

趙永星，E-mail：a315lab@163.com