河南信陽犬弓形蟲病血清流行病學調查

馬超鋒，孫何云，張　軼，饒　兵

（信陽市動物疫病預防控制中心，河南 信陽 464000）

河南信陽犬弓形蟲病血清流行病學調查

馬超鋒，孫何云，張軼，饒兵

（信陽市動物疫病預防控制中心，河南 信陽 464000）

弓形蟲病（Toxoplasmosis）又稱弓形體病、弓漿蟲病，是由龔地弓形蟲（Toxoplasma gondii）寄生于人和多種動物的有核細胞內引起的一種人獸共患原蟲病［1］，呈世界性分布，可以感染人和幾乎所有的恒溫脊椎動物（超過30種鳥類和300種哺乳動物）［2］。據WTO 2009年報道，全世界有超過三分之一人口感染弓形蟲病，2005年公布的全國人體重要寄生蟲病現狀調查報告顯示，我國人弓形蟲病平均感染率為7.88%［3］。弓形蟲病對人畜的危害很大，孕婦感染弓形蟲后會導致早產、流產、胎兒發育畸形，是免疫功能低下患者（如AIDS病人等）的主要死亡原因。貓是弓形蟲的終末宿主，犬和其他動物是中間宿主。犬貓作為重要的伴侶動物，近年來，養殖數量急速增加，與人接觸密切，是人感染弓形蟲的主要傳播方式之一。為了解信陽市近年來犬弓形蟲病感染情況，筆者歷時近3年采用酶聯免疫吸附試驗對我市寵物醫院接診的犬只進行了調查，以對該病的防控提供參考。

1　材料與方法

1.1樣品收集時間2013年7月-2015年12月。

1.2樣品的收集地點及制備從信陽市和諧動物醫院、信陽市畜牧局寵物門診、摯愛寵物等6家門診，分別從不同品種、年齡、性別和健康狀況的犬只采集血液樣品1 324份，3 000 r/min離心10 min，取上清液于1.5 mL滅菌離心管中，統一編號。處理好的血清均置-20℃冰箱保存，備用待檢。

1.3試劑犬弓形蟲間接ELISA抗體檢測試劑盒，購自洛陽萊普生信息科技有限公司。

1.4主要試驗器材Thermo FC酶標儀，美國Thermo公司；TDZ5-WS臺式低速離心機，長沙湘儀離心機儀器有限公司；10～1 000 μL單道移液器及25～300 μL多道移液器，德國Eppendorf公司；303系列電熱恒溫培養箱，上海樹立儀器儀表有限公司；恒溫振蕩器；超聲波清洗器；96孔聚苯乙烯反應板。

1.5方法

1.5.1編號每次試驗應在包被板上設空白對照孔1孔，陰性對照孔2孔，陽性對照孔2孔，其余為待檢樣品孔。

1.5.2樣品1∶40稀釋將樣品稀釋液每孔195 μL加到血清稀釋板上，加5 μL待檢樣品，充分混勻。

1.5.3將板條固定于板架上，剩余的板條用不干膠密封并放入密封袋中保存。每孔加入稀釋后樣品100 μL/孔。陰、陽性對照加2孔，100 μL/孔。空白對照孔不加樣。置37℃反應30 min。

1.5.4洗板（一）：洗板機洗或手洗，方法如下：

1.5.4.1手洗傾去內容物，用洗液注滿反應孔，靜置15 s～30 s后棄去，在毛巾或吸水紙上拍干。如此洗板重復5次。

1.5.4.2洗板機洗洗板次數為5次，每次洗液在孔中滯留時間為15 s～30 s，洗液應注滿反應孔，確保每次吸凈無殘留，全部洗完后在毛巾或吸水紙上拍干。

1.5.5加酶標結合物除空白對照孔以外，各孔中加入酶標結合物100 μL。置37℃反應30 min。

1.5.6洗板，同1.5.4。

1.5.7加顯色液每孔加入顯色液A液50 μL，全部加完后再在每孔中加入顯色液B液50 μL，混勻。37±2℃顯色10 min。

1.5.8終止顯色完畢后立即于每孔加50 μL終止液，混勻。

1.5.9測定終止后應在10 min內完成判讀。對空白對照調零，用酶標儀在450 nm波長處測定吸光值。或使用雙波長測定吸光值，測定波長為450 nm，參考波長可選630 nm或655 nm。

1.5.10結果判定：以空白孔調零，450 nm波長測定OD值。陰性對照值≤0.20，陽性對照值＞0.60，證明實驗成立。按以下方法判斷：陽性，樣品OD值≥0.5；可疑0.3≤樣品OD值平均值＜0.5；陰性：樣品OD值＜0.3，對于可疑樣品應進行重測，如果重測仍為可疑，則判為陰性。

1.6數據統計分析檢測結果采用SPSS19.0軟件進行分析，通過X2檢驗分析差異顯著性，P＜0.05時差異顯著，P＜0.01差異極顯著。

2　檢測結果

2.1信陽地區犬弓形蟲病總體感染情況2013年7月-2015年12月，共在6家寵物診療機構收集到血液樣品1 324份。采用ELISA方法檢測犬弓形蟲病抗體，總體陽性率為11.3%，2013年、2014年和2015年的抗體陽性率分別為10.1%、11.4%和12.1%，各個年份均有弓形蟲抗體陽性檢出，但差異不顯著（P=0.718＞0.05）（見表1）。

2.2不同季節犬弓形蟲病感染情況從表2可以看出，不同季節弓形蟲抗體陽性率有變化，夏季最高，為13.1%，冬季最低，為9.6%，X2檢驗分析，P=0.558＞0.05，即各個季節間犬弓形蟲病抗體陽性率差異不顯著。

表1　不同年份犬弓形蟲抗體檢測情況

表2　不同季節犬弓形蟲抗體檢測情況

2.3不同性別犬弓形蟲病感染情況檢測結果顯示（見表3），雌性弓形蟲抗體陽性率為11.7%，略高于雄性的11.0%，但差異不顯著（P＞0.05）。

表3　不同性別犬弓形蟲抗體檢測情況

2.4不同年齡段犬弓形蟲病感染情況從表4可見，隨年齡增長，弓形蟲抗體陽性率在升高，1歲以內最低，為8.0%，3歲以上最高，達到16.8%，對檢測數據進行X2檢驗分析顯示，各個年齡段間抗體陽性率差異極顯著（P＜0.01）。

表4　不同年齡犬弓形蟲抗體檢測情況

3　討論

弓形蟲病是重要的人獸共患傳染病，在人群中感染較普遍，各種動物、特別是與人密切接觸的犬貓在弓形蟲的傳播中起到很重要的作用，因此，摸清犬的弓形蟲病感染情況，對人類健康有重要意義。國內外一直都有犬弓形蟲病感染情況的報道。本次調查犬血清樣品1 324份，抗體陽性率為11.3%；省內調查情況，王海燕［4］于2012年調查鄭州市犬弓形蟲抗體陽性率為34.9%，遠高于本次調查。國內其他省份，黃利權等［5］2011年調查浙江地區犬弓形蟲病抗體陽性率36.72%、張煥容等［6］2012年調查成都陽性率32.0%、汪萍等［7］2014年發現烏魯木齊的陽性率為31.8%、崔麗麗等［8］2012年調查北京地區為24.9%、鄧國強等［9］2014年調查長沙地區為23.8%、陳代雄等［10］2005年調查廣州地區抗體陽性率為20.7%，均高于本次調查；于迪等［11］2014年調查遼西地區犬弓形蟲抗體陽性率為14.2%、翟佳等［12］2014年調查的武漢地區陽性率為13.4%、鄭紅星等［13］2010年調查的蘭州地區陽性率為13.2%、高雅等［14］2011年調查的呼和浩特地區為12.4%、龔國華等［15］2009年調查上海市的陽性率為11.67%、王大為等［16］2014年調查東北部分地區陽性率為10.1%，與本次調查相近；馬明筠等［17］2012年調查的宜昌市犬弓形蟲抗體陽性率為8.2%、郭冀寧等［18］2014年調查的銀川市陽性率為7.96%、沈克飛等［19］2011年調查重慶主城區陽性率為5.6%、鄭世英等［20］2015年調查的山東省部分地區陽性率為3.5%、張如英等［21］2014年調查的東莞市陽性率為2.91%、黃紹明等［22］2008年調查的海口地區為2.6%、車小蛟等［23］2015年調查甘肅天水陽性率為1.98%，均低于本次調查。本次調查的犬只以寵物門診接診病犬為主，弓形蟲陽性率還是偏高的，采取的治療方案還要結合臨床癥狀進行，下一步我們還要擴大調查范圍，獲得更準確翔實的數據。

本次犬弓形蟲抗體調查結果顯示，不同季節陽性率有差異，但不顯著，夏季最高，為13.1%，冬季最低，為9.6%，與崔麗麗等［8］2012年報道的結果相近；不同性別間弓形蟲抗體陽性率差異不顯著，雌性略高于雄性（11.7%＞11.0%），與崔麗麗［8］、于迪［11］和汪萍［7］報道一致，與鄧國強［9］報道相反；不同年齡犬只間弓形蟲抗體陽性率差異極顯著，且隨年齡增大，陽性率有增大的趨勢，這與鄧國強［9］和鄭紅星［13］報告一致，分析原因可能與生長周期長，較易接觸帶蟲犬和感染環境中處于感染階段的弓形蟲卵囊有關。

弓形蟲病是一種重要的人獸共患病，且人群感染率較高，對人體危害較大，犬作為中間宿主，在弓形蟲病的傳播中起到重要作用，建議采取措施控制犬弓形蟲病的發生和傳播：一是加強犬只的得管理，定期檢測，積極防治；二是加大對犬貓的人獸共患病特別是弓形蟲病的監測力度，發現陽性病畜，立即淘汰；三是為提高公眾對弓形蟲病的危害認知度，開展形式多樣的宣傳活動；四是注意日常衛生，犬只糞便立即清除，接觸犬排泄物后要認真洗手；五是避免犬采食生肉和不熟的奶蛋制品，養成良好的生活習慣。

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S852.72+2

B

0529-6005（2016）09-0080-03

2016-01-18

2014年信陽市科技攻關項目（140054）

馬超鋒（1981-），男，高級獸醫師，碩士，主要從事動物疫病防治，E-mail：machaofeng5@163.com